人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法和应用技术

本发明专利技术公开了人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，包括：(1)将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，并将羊膜分割成组织片儿，然后，将胎盘胎儿面的羊膜从其附着的胎盘组织上取下；(2)用生理盐水或PBS缓冲液清洗羊膜、蜕膜，将羊膜、蜕膜折叠或者平铺放入冻存袋或冻存管中，加入4℃的冻存液，密封，转入程序降温仪，按照设定的降温程序降温至‑80℃，转移至液氮冷冻保存。本发明专利技术的冷冻保存方法，有利于提高冻存组织和细胞的活性，复苏后形态、功能、结构与新鲜组织一致，组织内细胞总体存活率达90％以上，所保存的组织不但可以用于分离干细胞，上皮细胞等领域，还可以用于组织工程移植等领域。

【技术实现步骤摘要】
人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法和应用
本专利技术涉及人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法和应用，具体涉及人胎盘羊膜、蜕膜的冷冻保存方法及复苏方法。
技术介绍
胎盘是胎儿与母体之间物质交换的重要器官，是人类妊娠期间由胚胎胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间组织结合器官。近年来随着科学研究的深入，人们可以从胎盘中分类出包括造血干细胞、间充质干细胞、上皮细胞等多种类型的细胞，从而改变了胎盘长期以来作为医疗废弃物的状况。现代科学研究提示，胎盘羊膜即可以用于扩增羊膜来源的间充质干细胞，也可以用在眼科手术中。胎盘绒毛膜即可以分离出间充质干细胞，也可以分离出造血干细胞。胎盘中的绒毛结构其实是毛细血管组织，从中可以分类出内皮干细胞、上皮干细胞等。胎盘蜕膜是胎盘附着于母体的结构，研究也获得了类似间充质干细胞的蜕膜干细胞。而在羊膜和绒毛膜、绒毛膜与蜕膜之间有富含间充质干细胞的间质组织。目前对胎盘的利用是粗放的，往往只取胎盘很小一部分组织来分离出胎盘的一种或者几种干细胞进行储存，其余部分的胎盘仍然作为医疗废物处理，形成了浪费。并且，随着科学研究的深入，胎盘具有造血器官等功能，可以合成大量的激素及因子，除造本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，并将羊膜分割成组织片儿，然后，将胎盘胎儿面的羊膜从其附着的胎盘组织上取下；(2)清洗羊膜、蜕膜，将羊膜、蜕膜折叠或者平铺放入冻存袋或冻存管中，加入冻存液，密封，转入程序降温仪，按照设定的降温程序降温至‑80℃，转移至液氮冷冻保存；所述降温程序为：在4℃保持5min；以2℃/min速率继续降至‑10℃，保持10min；以1℃/min速率继续降至‑40℃保持5min；以0.5℃/min速率继续降至‑80℃保持5min；所述冻存液，由质量浓度为20％的人血白蛋白溶液、二甲基亚砜、丙二醇...

【技术特征摘要】
1.一种人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，并将羊膜分割成组织片儿，然后，将胎盘胎儿面的羊膜从其附着的胎盘组织上取下；(2)清洗羊膜、蜕膜，将羊膜、蜕膜折叠或者平铺放入冻存袋或冻存管中，加入冻存液，密封，转入程序降温仪，按照设定的降温程序降温至-80℃，转移至液氮冷冻保存；所述降温程序为：在4℃保持5min；以2℃/min速率继续降至-10℃，保持10min；以1℃/min速率继续降至-40℃保持5min；以0.5℃/min速率继续降至-80℃保持5min；所述冻存液，由质量浓度为20％的人血白蛋白溶液、二甲基亚砜、丙二醇、羟乙基脲和海藻糖组成，其中，各组分所占比例为：二甲基亚砜5～10wt％，丙二醇5～10wt％，羟乙基脲5～10wt％，海藻糖5～10wt％，余量为人血白蛋白溶液。2.根据权利要求1所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：所述步骤(1)中，组织片儿的面积为10cm2～100cm2。3.根据权利要求1所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：所述步骤(1)中，组织片儿的形状为四边形。4.根据权利要求1所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中，用生理盐水或PBS缓冲液清洗羊膜、蜕膜。5.根据权利要求1所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述冻存液...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐峰波，王肇光，金华，崔光晶，宋现收，生德伟，李德柱，
申请(专利权)人：银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37