长链非编码RNAs的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了长链非编码RNAs中CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌诊断领域的新应用。本发明专利技术发现了CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌血清中表达上升，是潜在结直肠癌诊断标志物，与CEA以及CA19‑9联合作为肿瘤标志物共同诊断，具备更强的特异性和灵敏度，故本发明专利技术提供了CCAT2、LINC00511和LINC01133三者以及三者和CEA以及CA19‑9联合在结直肠癌诊断领域的新应用，从而为该领域的疾病提供了新的诊断方法，也补充了CCAT2、LINC00511和LINC01133三者的研究成果。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNAs的应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及长链非编码RNAs的应用。
技术介绍
结直肠癌(colorectalcancer,CRC)是男性第三大癌症，也是女性第二大癌症，约占全球每年癌症发病率的10％。每年约有120万新发病例和60万患者死亡，结直肠癌也是致死率第四大最常见的肿瘤。发病率在50岁以下人群中较低，但随着年龄增加而显著提高。发达国家中，结直肠癌患者确诊时年龄中位数在70岁左右。结直肠癌发病率随着经济发展水平的不断提高呈现强有力的正向梯度。结直肠癌在欧洲、北美和大洋洲发病率最高，而在南亚、中亚和非洲一些国家发病率最低。我国结直肠癌的发病率和死亡率均保持上升趋势。2011年，我国结直肠癌的发病率和死亡率分别为23.03/10万和11.11/10万。CRC的最重要预后因素是病人确诊时疾病所处阶段。美国2001至2007年确诊为结直肠癌的患者中，原位癌患者5年生存率为90.1％，区域淋巴结转移患者5年生存率为69.2％，远端转移患者5年生存率仅11.7％。目前，在加拿大、澳大利亚、美国和欧洲等一些高收入国家中，结直肠癌患者5年生存率已经接近65％，而我国仅为47.2％。之前的大量研究已经发现，结直肠癌家族史、炎症性肠道疾病、吸烟、过度饮酒等不良生活方式以及肥胖、糖尿病等疾病状态均可能促进结直肠癌的发生。健康的生活方式，如不吸烟不饮酒，合理膳食等是结直肠癌防控的重要手段。结直肠癌筛查旨在通过早期检测和检测相关并发症的发生率来降低结直肠癌死亡的风险。这种筛查还旨在通过检测和去除癌前病变来降低结直肠癌的发病率和死亡率。结直肠癌患者就诊时大多已处于中晚期，疗效较差，除早期诊断争取手术根治外，目前尚无有效的非手术治疗手段。因此，结直肠癌的早期诊断与早期治疗是非常重要的。目前，临床上常用的结直肠癌筛查方法包括粪便隐血试验、内镜和CT结肠成像这三种筛查方法。粪便隐血检测包括愈创木脂化学法粪便潜血试验(guaiacFOBT,gFOBT)和更敏感的粪便免疫化学检测(FIT)。使用光学纤维内镜直接检查直肠和结肠的方法包括乙状结肠镜检查和结肠镜检查。结肠镜检查既作为主要筛查工具，也作为对其他筛查方法检测呈阳性者的随访。此外，计算机断层扫描(CT)结肠成像技术已被开发为一种结肠直肠癌筛查的微创可视化技术。最近出现但尚未广泛测试的新技术是基于视觉检查(例如,视频胶囊内窥镜检查)或粪便中的生物标志物(例如多靶标DNA)，血液中(例如甲基化septin9DNA)或呼吸中(例如挥发性有机化合物和蛋白质的各种标志物，RNA和DNA)中生物标记物的分析。虽然粪便隐血试验简便易行，价格低廉，但对于早期结直肠癌的诊断效率低，敏感性差。内窥镜检查的诊断准确率高，但可能会产生心理危害以及乙状结肠镜检查阳性结果后不必要的转诊。此外，内镜检查可能会引发严重的医疗伤害，其中最常见的是出血和穿孔，尽管此类不良事件不常见，每次事件发生率为结肠镜检查的0.01-0.05％，但内镜筛查癌症过度诊断的比例不确定。与CT结肠成像相关的潜在危害包括辐射诱发效应、结肠外发现检测的下游效应以及后续结肠镜检查的潜在损害。临床上常用的血清肿瘤标志物有蛋白质类肿瘤标志物CEA，糖原类肿瘤标志物CA19-9、CA242与CA50。这些标志物对大肠癌诊断的敏感性与特异性较差，所以亟需发现新的肿瘤标志物用于大规模的结直肠癌早期诊断。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供长链非编码RNAs中CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌诊断领域的新应用。CCAT2、LINC00511和LINC01133的序列依次如SEQIDNo.1-3所示(lncRNA通用的序列表达方法在本领域以DNA的序列来表示)。本专利技术检测了CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌(CRC)与正常对照者血清中的含量，发现血清中CCAT2、LINC00511和LINC01133在CESC血清中均明显升高，且差异显著，这表明了CCAT2、LINC00511和LINC01133三者可联合作为诊断结直肠癌的潜在肿瘤标志物。同时，本专利技术还将上述三个长链非编码RNAs与CEA以及CA19-9联合作为肿瘤标志物，通过受试者工作特征曲线(ROC)方法分析其诊断效率，结果显示，由CCAT2、LINC00511、LINC01133与CEA以及CA19-9联合组成的CRC诊断模型的诊断效率较高，AUC值可达到为0.911，敏感性与特异性更强；与单个临床上结直肠癌的血清标志物CEA以及CA19-9相比，其联合本专利技术所述三个长链非编码RNAs作为肿瘤标志物共同诊断，具备更强的特异性和灵敏度。以上试验结果表明，CCAT2、LINC00511和LINC01133可以作为结直肠癌的联合肿瘤标志物，更为优选地方案，CCAT2、LINC00511、LINC01133和CEA以及CA19-9可以作为结直肠癌的联合肿瘤标志物；并且可通过能够检测各自的表达量的诊断试剂，比如引物、探针等，或整套试剂盒，比如扩增体系、引物、探针、酶等，对结直肠癌进行诊断。因此，本专利技术提出了CCAT2、LINC00511和LINC01133作为结直肠癌诊断标志物在制备结直肠癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用，以及CCAT2、LINC00511、LINC01133和SCC作为结直肠癌诊断标志物在制备结直肠癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用。作为优选，所述试剂或试剂盒包括至少包括CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增试剂，或CCAT2、LINC00511、LINC01133和CEA以及CA19-9的扩增试剂，并可根据实际情况选择包括或不包括血清总RNA提取试剂和长链非编码RNAs逆转录试剂；其中，所述CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增试剂包括CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增上/下游引物、SYBRPremixExTaqⅡ(2x)和ROXReferenceDye(50×)中的一种或两种以上；其中，所述CCAT2扩增上/下游引物序列如SEQIDNo.4-5所示，所述LINC00511扩增上/下游引物序列如SEQIDNo.6-7所示，所述LINC01133扩增上/下游引物序列如SEQIDNo.8-9所示。CEA以及CA19-9的扩增试剂可采用本领域常规的试剂盒市售试剂盒；由以上技术方案可知，本专利技术发现了CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌血清中表达上升，是潜在结直肠癌诊断标志物，与CEA以及CA19-9联合作为肿瘤标志物共同诊断，具备更强的特异性和灵敏度，故本专利技术提供了CCAT2、LINC00511和LINC01133三者以及三者和CEA以及CA19-9联合在结直肠癌诊断领域的新应用，从而为该领域的疾病提供了新的诊断方法，也补充了CCAT2、LINC00511和LINC01133三者的研究成果。附图说明图1所示为CCAT2、LINC00511和LINC01133在结直肠癌患者和正常人血清中含量对比结果；纵坐标为CCAT2、LINC00511和LINC01133的相对表达量，横坐标normal为正常人血清，colorectalcancer为结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CCAT2、LINC00511和LINC01133作为结直肠癌诊断标志物在制备结直肠癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.CCAT2、LINC00511和LINC01133作为结直肠癌诊断标志物在制备结直肠癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述CCAT2、LINC00511和LINC01133序列如SEQIDNo.1-3所示。3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述试剂或试剂盒至少包括CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增试剂。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增试剂包括CCAT2、LINC00511和LINC01133扩增上/下游引物、S...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗清，黄常志，王文杰，赵玫，李燕，
申请(专利权)人：遵义医学院附属医院，中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：贵州,52