驱动马达蛋白活性的检测方法技术

本申请公开了一种驱动马达蛋白活性的检测方法，包括以下步骤：(1)先将不同浓度三磷酸腺苷ATP分别和荧光素/荧光素酶混合，得到混合物；(2)将混合物分成两等份后分别加入测试样品池和对照样品池；(3)在对照样品池中再注入缓冲液，在测试样品池中注入驱动马达；(4)开启探测仪，检测测试样品池中的产物ADP与荧光素/荧光素酶反应产生的荧光强度和对照样品池中的荧光强度，得到荧光强度时间曲线；(5)针对不同标准浓度的ATP，测得对应的FATP，进而生成校准曲线；(6)制作米氏曲线：(7)根据米氏公式，拟合所得的Vmax即是衡量驱动马达水解ATP的活性参数；(8)判断驱动马达活性。采用本发明专利技术的检测方法能够方便快捷的检测驱动马达蛋白活性。

【技术实现步骤摘要】
驱动马达蛋白活性的检测方法
本申请涉及一种检测方法，具体涉及驱动马达蛋白活性的检测方法。
技术介绍
驱动蛋白是细胞内重要的输运机器，属于平动分子马达。其有两个主要特征：其一是持续性,马达的两个头部在交替步行时至少有一头保持与微管吸附,因此马达能沿微管长距离步进而不脱轨；另一个特征是马达的力学过程和化学过程是紧耦合的,即马达每前进一步消耗一个三磷酸腺苷(ATP)。现有技术中还没有一种能够方便快捷的检测驱动马达蛋白活性的方法。
技术实现思路
鉴于现有技术中的上述缺陷或不足，期望提供一种能够方便快捷的检测驱动马达蛋白活性的方法。为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：一种驱动马达蛋白活性的检测方法，包括以下步骤：(1)先将不同浓度三磷酸腺苷ATP分别和荧光素luciferin/荧光素酶luciferase混合，得到各浓度的混合物；(2)将各浓度的混合物分成体积相同的两等份，一份加入底部布满微管的测试样品池，另一份加入底部布满微管的对照样品池；(3)在对照样品池中再注入缓冲液，在测试样品池中注入驱动马达，则测试样品池发生酶促反应：其中，Kinesin·Microtubulen表示马达结合在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种驱动马达蛋白活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)先将不同浓度三磷酸腺苷ATP分别和荧光素luciferin/荧光素酶luciferase混合，得到各浓度的混合物；(2)将各浓度的混合物分成体积相同的两等份，一份加入底部布满微管的测试样品池，另一份加入底部布满微管的对照样品池；(3)在对照样品池中再注入缓冲液，在测试样品池中注入驱动马达，则测试样品池发生酶促反应：

【技术特征摘要】
1.一种驱动马达蛋白活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)先将不同浓度三磷酸腺苷ATP分别和荧光素luciferin/荧光素酶luciferase混合，得到各浓度的混合物；(2)将各浓度的混合物分成体积相同的两等份，一份加入底部布满微管的测试样品池，另一份加入底部布满微管的对照样品池；(3)在对照样品池中再注入缓冲液，在测试样品池中注入驱动马达，则测试样品池发生酶促反应：其中，Kinesin·Microtubulen表示马达结合在微管的n位点；而Kinesin·Microtubulen+1表示马达结合在微管的n+1位点；k+表示Kinesin同时与ATP和微管的n位点的结合速率；k--表示ATP从吸附在微管上的Kinesin解离的速率；kcat表示Kinesin对ATP的催化水解并向微管n+1位点步进的速率；(4)开启反应动力学定量探测仪，检测测试样品池中的底物三磷酸腺苷ATP与荧光素/荧光素酶反应产生的荧光强度，旋转测试转盘后检测对照样品池中的荧光强度，在控制器的控制面板中分别显示测试样品池和对照样品池的荧光强度时间曲线；(5)针对不同标准浓度的ATP，测得每个浓度对应的ATP荧光强度FATP，进而生成校准曲线；(6)制作米氏曲线：根据所得到的校准曲线，按照以下公式拟合得到比例常数α7：在线性区间:[ATP]＝α7FATP，[ATP]表示ATP的浓度；FATP为与[ATP]对应的稳态时测试样品池的荧光强度减去对照样品池的荧光强度；VATP反应速率是所述荧光强度时间曲线在起始点的负导数：t为检测时间，fATP为[ATP]对...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒咬根，罗永涛，
申请(专利权)人：易尚明天科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11