一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法技术

本发明专利技术所要解决的技术问题是提供一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法。本发明专利技术建立在冬虫夏草中砷及砷形态日常检测的基础上，采用电感耦合等离子体质谱法(ICP‑MS)和阴离子交换高效液相色谱‑电感耦合等离子体质谱法(HPLC‑ICP‑MS)测定野生冬虫夏草和人工冬虫夏草中总砷、无机砷和有机砷的含量，其中野生冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量低于人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量，且野生冬虫夏草中无机砷的含量占总砷的含量低于10％，人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量高于30％；野生冬虫夏草中未知有机砷占总砷含量的89‑92％，人工冬虫夏草中未知有机砷的含量占总砷含量的51‑65％。本鉴别方法判定简单，省时省力，成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法
本专利技术涉及一种冬虫夏草产品鉴别方法，特别是一种用于鉴别野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的方法。
技术介绍
在中国及周边国家，冬虫夏草作为一种罕见的功能性食品被用于促进健康和治疗多种慢性病已有2000多年。1993年，中国女运动员在全国运动会上打破世界纪录，其功绩后来被归因于(至少部分是)食用这种真菌，冬虫夏草因此而闻名世界。从那时起，越来越多的现代药物研究表明，其主要功能是抗肿瘤、抗炎、保肾、抗氧化、抗高血糖、抗细胞凋亡、免疫调节和肝保护，这些显著的药用功效导致了对冬虫夏草的大量需求，同是也提升了青海西藏高原周边及相邻国家经济贫困地区的区域经济建设。一些牧民家庭收集冬虫夏草的收入占其总收入的三分之二。近几十年来，冬虫夏草的零售价格(中等质量的15,000美元/公斤)大幅提升。与此同时，由利润和需求驱动，过度地采挖野生冬虫夏草对产地造成极大的生态威胁，因此人工培育冬虫夏草应运而生。在众多科学家的努力下，经过近半个世纪的研发工作，到2017年，国内已有企业成功量产人工培育冬虫夏草20吨，创造经济效益20多亿元。然而，自2016年CFDA(中国食品药品监督管理局)透露，冬虫夏草被检出砷超标(总砷：4.4-9.0mg/kg)，是功能食品中总砷含量参考值1mg/kg的五倍(GB16740-2014)。随后，CFDA命令所有以冬虫夏草为功能食品的试点工作于2016年2月26日停止。因此，不少媒体纷纷宣称冬虫夏草不是功能食品，而是毒药。这对健康食品市场造成了巨大的冲击，严重影响了冬虫夏草的经济链。砷(As)被国际癌症研究机构(IRAC)归为致癌物质。该元素可以有机和无机两种形式存在。砷的毒性取决于其化学形式，无机形态中三价砷(AsIII)和五价砷(AsV)是最具毒性的。有机砷是无机砷(iAs)的代谢产物，如一甲基砷酸(MMAV)和二甲基砷酸(DMAV)，对人类的毒作用要比无机砷小得多，还有一些被认为无毒的有机砷化合物，包括砷胆碱、砷甜菜碱和各种砷糖和砷脂。由于不同砷形态的毒性不同，总砷含量不足以提供有关分析样品的毒性信息，区分砷的化学形式变得更加重要。因此，根据总砷含量来判断冬虫夏草的毒性是不可取的。受动物来源的中医药(TCM)中有机砷比例明显高于植物来源的中医药的激发，一些学者提出，由于幼虫真菌的复杂性，冬虫夏草中的砷可能大部分为有机砷。最近，他们通过高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)检测冬虫夏草中的砷形态后，提供了推测冬虫夏草中有毒砷形态较少(AsIII和AsV)或低于检测水平的证据。此外，他们发现，冬虫夏草中大部分的砷由未知的有机砷形态组成。由于HPLC-HG-AFS本身的缺点，在该研究中，他们只简单区分出冬虫夏草中四种砷形态物质(MMA,DMA,AsⅤ,和AsⅢ)。如今，人工冬虫夏草的成功培育，在虫种、菌种、外观形态和显微结构等方面与野生冬虫夏草一致，传统方法(基于形态学、颜色或气味的经验方法)已不足以用于识别野生冬虫夏草与人工培育的冬虫夏草，而衍生出来的一个重要问题是，由人工诱导的冬虫夏草真菌感染的作用下，其感染后的虫菌复合体中砷形态分布会发生变化，这对冬虫夏草的食用安全性至关重要。为了辨别野生冬虫夏草与人工冬虫夏草之间砷的含量及各形态的分布差异，本研究采用最常用的技术：电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和阴离子交换高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)，分别检测野生和人工冬虫夏草中的总砷(tAs)及相关砷形态(AsⅢ,AsⅤ,MMA,DMA,AsB)的含量。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中存在的问题，提供一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法。本专利技术建立在冬虫夏草中砷及砷形态日常检测的基础上，采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和阴离子交换高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)，分别检测野生和人工冬虫夏草中的总砷(tAs)、有机砷和无机砷的含量。在一个实施方案中，提供了一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法，其中，野生冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量低于人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量，且野生冬虫夏草中无机砷的含量占总砷的含量低于10％。进一步地，所述野生冬虫夏草中未知有机砷为主要砷成分，占总砷含量的89-92％，人工冬虫夏草中未知有机砷占总砷含量为51-65％。进一步地，所述人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量高于30％。进一步地，所述人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量为32-49％。进一步地，不同砷形态为三价砷(AsIII)、五价砷(AsV)、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、砷甜菜碱(AsB)，其中AsIII和AsV为无机砷，MMA，DMA和AsB为有机砷。进一步地，冬虫夏草中砷含量测定方法包括如下步骤：(1)准确称取不同形态的砷标准溶液适量于标准溶液瓶中，配制成不同形态的砷标准溶液使用液浓度；(2)吸取适量砷标准溶液使用液适量，用一定浓度的硝酸溶液逐级稀释配制不同浓度的砷标准溶液，备用。进一步地，冬虫夏草样品经处理后采用ICP-MS和HPLC-ICP-MS检测测得样品中不同砷形态和总砷含量。进一步地，冬虫夏草的样品处理步骤包括样品粉碎、样品消解、抽提的步骤。本专利技术建立在冬虫夏草中砷及砷形态日常检测的基础上，通过比较野生冬虫夏草和人工冬虫夏草中无机砷和有机砷相对于总砷的含量进行鉴别，省时省力，成本低。附图说明图1野生冬虫夏草与人工培育冬虫夏草中各砷形态分布散点图具体实施方式本专利技术中采用的仪器、试剂以及含砷标准品的来源：从Milli-Q水净化系统(Millipore，Bedford，MA，USA)获得的去离子水用于制备所有溶液。无水乙酸钠，硝酸钾，磷酸二氢钠和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)用于制备流动相。H2O2(31％)和HNO3(69％)用于样品消化和提取。通过稀释标准储备溶液(认证浓度为1.000mgAs/L，国家计量研究所(中国北京))制备外用校准标准品；砷酸根标准溶液为0.233μmol/g，亚砷酸根标准溶液为1.011μmol/g，一甲基砷标准溶液为0.355μmol/g，二甲基砷标准溶液为0.706μmol/g，砷甜菜碱标准溶液为0.518μmol/g。所有储备溶液保存在4℃，分析时进一步稀释。7700X电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)，美国安捷伦科技公司；1260高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司，恒温干燥箱，德国宾得公司；Milli-Q超纯水系统，德国默克公司。实施例(1)样品准备野生冬虫夏草：选择三个典型的区域(理塘，那曲和玉树)作为采样点，每个地点收集了20个相似大小的冬虫夏草样本(每个样本约0.3g)。将所有样品冷冻干燥以达到恒重。为了收集足够的材料用于随后的每个采样点的As分析，将每五个样本合并成一个批次样品。将这些样品批次用研钵和研杵单独粉碎以降低粒度。然后，将细粉末通过孔径为0.25mm的筛，并在4℃下保存在密封塑料袋中以备分析。人工冬虫夏草：购自东阳光。将样品随机分成六组，冷冻干燥以达到恒重。分别用研钵和研杵单独粉碎以降低粒度。然后，将细粉末通过孔径为0.25mm的筛子，并在4℃下保存在密封塑料袋中以备分析。(2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法，其特征在于，所述野生冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量低于人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量，且野生冬虫夏草中无机砷的含量占总砷的含量低于10％。

【技术特征摘要】
1.一种野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的鉴别方法，其特征在于，所述野生冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量低于人工冬虫夏草中无机砷相对于总砷的含量，且野生冬虫夏草中无机砷的含量占总砷的含量低于10％。2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述野生冬虫夏草中未知有机砷为主要砷成分，占总砷含量的89-92％，人工冬虫夏草中未知有机砷占总砷含量为51-65％。3.根据权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭莲仙，王佳婷，钟粤平，王伟琪，洪佳彬，尚俊康，林也琳，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44