HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法技术

本发明专利技术提供了HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法，属于中药技术领域。（1）混合对照品溶液的制备；（2）供试品溶液的制备；（3）分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，即得。本发明专利技术有助于全面评价紫草的质量，为规范紫草药材的使用提供科学依据。

【技术实现步骤摘要】
HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法
本专利技术涉及属于中药
，具体是HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法。
技术介绍
紫草为常用药材，最早见于《神农本草经》，历代本草均有收载。1990年到2005年版中国药典收录了紫草科的3种植物，即软紫草属的新疆紫草、内蒙紫草和紫草属的硬紫草的干燥根，而2015年版中国药典收载了紫草科软紫草属植物新疆紫草和内蒙紫草的干燥根，具有清热凉血、活血解毒、透疹消斑的功能，用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤。除药典标准外，滇紫草的干燥根为《云南省中药饮片标准》收录的品种，长花滇紫草的根为《卫生部药品标准》1995年版收载藏紫草基原之一，两者均来源于滇紫草属植物。由于药品标准众多以及药用习惯等原因导致紫草基原较为复杂，药材市场上存在不同基原的紫草药材。本研究主要针对市场上的紫草药材，采用HPLC法同时测定3种羟基萘醌类色素的含量，为紫草药材的质量控制提供科学依据。
技术实现思路
紫草为常用药材，最早见于《神农本草经》，历代本草均有收载。1990年到2005年版中国药典收录了紫草科的3种植物，即软紫草属的新疆紫草、内蒙紫草和紫草属的硬紫草的干燥根，而2015年版中国药典收载了紫草科软紫草属植物新疆紫草和内蒙紫草的干燥根，具有清热凉血、活血解毒、透疹消斑的功能，用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤。除药典标准外，滇紫草的干燥根为《云南省中药饮片标准》收录的品种，长花滇紫草的根为《卫生部药品标准》1995年版收载藏紫草基原之一，两者均来源于滇紫草属植物。由于药品标准众多以及药用习惯等原因导致紫草基原较为复杂，药材市场上存在不同基原的紫草药材。本研究主要针对市场上的紫草药材，采用HPLC法同时测定3种羟基萘醌类色素的含量，为紫草药材的质量控制提供科学依据。
技术实现思路
有鉴如此，本专利技术旨在提供一种HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法，包括如下步骤：（1）混合对照品溶液的制备：取左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁各约10mg，精密称定，用乙腈溶解制成上述3个成分分别约20、100、100μg/mL的混合溶液，即得。（2）供试品溶液的制备：取样品粉末（过4号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入石油醚（60～90℃）25mL，称量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，再称量，用石油醚（60～90℃）补足减失的量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈溶解，转移至10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（3）分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪进行测定，即得。进一步地，所述步骤（3）的色谱条件如下：色谱柱:HypersilODSC18,250mm×4.6mm,5μm；流动相：乙腈-0.05%醋酸溶液（70：30）；流速：1.0ml/min；检测波长：275nm；理论板数以β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁峰计不低于6000。进一步地，所述步骤（2）中的样品为紫草药材。进一步地，所述步骤（3）中注入高效液相色谱仪的溶液体积为10μl。进一步地，所述样品按干燥品计算，含左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁分别不得少于0.80%、0.30%和0.30%。相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：（1）药材市场上存在不同基原的紫草药材。本专利技术主要针对市场上存在的紫草药材品种，采用HPLC法同时测定3种羟基萘醌类色素的含量，为紫草类药材的质量控制提供科学依据。（2）本专利技术重新制定了本品的含量限度为“按干燥品计算，含左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁分别不得少于0.80%、0.30%和0.30%”。（3）本专利技术简化检验步骤，提高检测方法精度，检测起来更加方便，快捷。具体实施方式实施例一HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法1.1仪器和试剂仪器：Agilent1260高效液相色谱仪。试剂：乙腈（色谱纯，CNWTechnologies公司），醋酸（色谱纯，山东西亚化学服务有限公司），水为超纯水。对照品:左旋紫草素（中国食品药品检定研究院购置，批号：批号110769-200405，纯度97.3%）、乙酰紫草素（上海士锋生物技术有限公司，批号：15062715，纯度99.7%）、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁（中国食品药品检定研究院购置，批号111689-201504，纯度98.6%）。1.2对照品溶液的制备：精密称定左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁各10.13mg、10.21mg和10.05mg，用乙腈制成上述3个成分分别含19.71、101.79、99.09μg/mL的混合溶液，即得。1.3供试品溶液的制备：取样品粉末（过4号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入石油醚（60～90℃）25mL，称量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，再称量，用石油醚（60～90℃）补足减失的量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈溶解，转移至10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.3.1线性关系考察：精密吸取各对照品储备液均0.02、0.1、0.5、1.0、2.0mL，分别置5个10mL量瓶中，加乙腈定容至刻度，摇匀，即得各系列浓度的混合对照品溶液。分别精密吸取各系列浓度的混合对照品溶液及对照品储备液各10μl，分别注入相色谱仪，测定，以各对照品质量浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，各被测成分回归方程和相关系数见表1。表1回归方程和相关系数结果表明，3个成分在一定质量浓度范围内，进样浓度与峰面积线性关系良好。1.3.2精密度试验吸取1.2项下混合对照品溶液10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁峰面积的RSD（n=6）分别为0.19%，0.28%和0.35%，表明仪器精密度良好。重复性考察取样品粉末（批号代号：EH-ZC-001）分别按照“1.3”项下方法制备供试品溶液上述色谱方法测定，记录峰面积，计算含量。结果各份供试品溶液中左旋紫草素、乙酰紫草素和β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的平均含量（n=6）分别为0.99%、0.44%和0.59%，RSD分别为1.03%、0.62%、和1.05%，结果表明重复性良好。1.3.4溶液稳定性试验取同一份供试品溶液（批号代号：EH-ZC-001)，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。结果左旋紫草素、乙酰紫草素和β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁峰面积的RSD（n=6）分别为0.77%、0.94%和1.01%，表明供试品溶液在24h内稳定。1.3.5加样回收率试验以乙腈配制左旋紫草素、乙酰紫草素和β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁质量浓度分别为0.2750、2.411和2.052mg·mL-1的3个对照品溶液。取已知含量的样品粉末（批号代号：EH-ZC-00本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）混合对照品溶液的制备：取左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′‑ 二甲基丙烯酰阿卡宁各约 10 mg，精密称定，用乙腈溶解制成上述3 个成分分别约 20、100、100 μg/mL 的混合溶液，即得；（2）供试品溶液的制备：取样品粉 末（过 4 号 筛）约 0.5 g，精密称 定，置具塞锥形瓶 中，精密加入石油 醚（60 ～ 90 ℃）25 mL，称 量，超声处 理（功 率 250 W，频率 33 kHz）30 min，放冷，再称量，用石油醚（60～90 ℃）补足减失的量，摇匀，滤过；精密量取续滤液 10 ml，蒸干，残渣加乙腈溶解，转移至 10 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；（3）分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪进行测定，即得。

【技术特征摘要】
1.HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量及质量标准检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）混合对照品溶液的制备：取左旋紫草素、乙酰紫草素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁各约10mg，精密称定，用乙腈溶解制成上述3个成分分别约20、100、100μg/mL的混合溶液，即得；（2）供试品溶液的制备：取样品粉末（过4号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入石油醚（60～90℃）25mL，称量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，再称量，用石油醚（60～90℃）补足减失的量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈溶解，转移至10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；（3）分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪进行测定，即得。2.根据权利要求1所述的HPLC法测定紫草药材中3种萘醌类成分含量质量标...

【专利技术属性】
技术研发人员：周静，赵丹，张飞燕，
申请(专利权)人：江苏颐海药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32