中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用，所述适配子A42的序列为：5’‑AGCAGCACAGAGGTCAGATGCCGTGCGGATGTACAGGGACTTGGATAGTTTCTGA CCTATGCGTGCTACCGTGAA‑3’；该核酸适配子A42能高亲和力、高特异性地与NGAL结合，其中Kd值为66.55nM，其在AKI诊断方面具有应用前景，可运用于分离、纯化中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白中、制备中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂中以及研制治疗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白相关疾病药物中。

Neutrophil gelatinase associated lipid transporter aptamer A42 and its screening method and Application

The present invention relates to an aptamer A42 of neutrophil gelatinase-related lipid carrier protein and its screening method and application. The sequence of the aptamer A42 is 5' Combining with NGAL, the Kd value is 66.55nM, which has potential application in AKI diagnosis. It can be used to isolate and purify neutrophil gelatinase-related lipid carrier proteins, to prepare reagents for the detection of neutrophil gelatinase-related lipid carrier proteins, and to develop and treat neutrophil gelatinase-related lipid carrier eggs. In white related diseases.

【技术实现步骤摘要】
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用
本专利技术涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用。
技术介绍
急性肾损伤(AcuteKidneyInjury，AKI)是一种肾小球滤过率急剧下降所导致的临床常见疾病，临床表现包括血清尿素氮和血清肌酐水平突然并持续升高，同时伴有盐水失衡。AKI是各种严峻条件下的一种最为常见的综合症，住院患者中的发病率为5％-7％，而危重患者中高达30％，并且患有AKI的危重患者的死亡率高达50％。此外，AKI与不良转归密切相关，包括死亡率增加、住院时间延长、危重患者的机械通气持续时间延长，及发展为慢性肾脏疾病风险增加等。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin，NGAL)，又名脂质运载蛋白2、噬铁蛋白或癌基因24p3，分子量25kD，在体内以多种形式存在，单体、46kD的同源二聚体、与金属蛋白酶9(MatrixMetalloproteinase9，MMP-9)结合形成的135kD的异源二聚体。NGAL在各种损伤后合成增加，尤其是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42，其特征在于：它的序列如下所示：AGCAGCACAG AGGTCAGATG CCGTGCGGAT GTACAGGGAC 40TTGGATAGTT TCTGACCTAT GCGTGCTACC GTGAA      75；在25℃，0.1M Na+，0.001M Mg2+条件下其二级结构为茎环结构，其分子结构如下：

【技术特征摘要】
1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42，其特征在于：它的序列如下所示：AGCAGCACAGAGGTCAGATGCCGTGCGGATGTACAGGGAC40TTGGATAGTTTCTGACCTATGCGTGCTACCGTGAA75；在25℃，0.1MNa+，0.001MMg2+条件下其二级结构为茎环结构，其分子结构如下：2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42，其特征在于：对所述核酸适配子A42的5'端或3'端进行FAM、Biotin或氨基化学修饰。3.根据权利要求1或2所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42的筛选方法，其特征在于：基于核酸适配子的体外SELEX筛选技术，利用羧基磁珠作为固相介质，以NGAL为靶标，通过NGAL羧基磁珠从ssDNA库中筛选得到与NGAL特异性结合的核酸适配子。4.根据权利要求3所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42的筛选方法，其特征在于：它包括以下步骤：①包被NGAL的磁珠与ssDNA库孵育进行SELEX筛选，并从第三轮开始在每轮筛选之前加入裸磁珠进行前反筛，以此去除与磁珠非特异结合的ssDNA；②孵育洗涤后的磁珠进行热洗脱，洗脱下来的ssDNA作为模板，加入带荧光修饰的上游引物P3与带PolyA尾的下游引物P4进行PCR扩增；③PCR扩增产物用正丁醇浓缩后经10％7M尿素变性PAGE胶电泳，使得带荧光修饰的75nt的目的链与PolyA修饰的95nt的互补链分离；④切取75nt位置带荧光的目的链条带进行胶回收、乙醇纯化，...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰小鹏，洪笑迁，刘宽灿，王开宇，谢富安，杨坤荣，黄素红，
申请(专利权)人：中国人民解放军南京军区福州总医院，
类型：发明
国别省市：福建,35