一种去除PK15细胞中支原体的方法技术

本发明专利技术公开了一种去除PK15细胞中支原体的方法，具体包括以下步骤：(1)分别配置DMEM培养基和0.25％胰酶，然后经滤菌器分别进行过滤，将牛血清进行消毒和灭活处理后进行分装备用；(2)将长满单层的PK15细胞用步骤(1)制备的0.25％胰酶消化分散，加入细胞生长液进行传代；(3)加入Plasmocin treatment试剂，继续培养；(4)待PK15细胞长成致密单层后进行传代，选用含有25μg/ml的Plasmocin treatment试剂的步骤(2)中配制的细胞生长液作为传代培养基，待PK15细胞长满后按1:5加入所述的传代培养基再连续传代4代，即获得无支原体的PK15细胞。本发明专利技术能够有效去除PK15细胞中的支原体，且用时较短，获得的无支原体的PK15细胞在后期传代过程中无需再使用Plasmocin treatment试剂，也不会发生细胞的二次感染。

A method for removing mycoplasma from PK15 cells

The invention discloses a method for removing mycoplasma from PK15 cells, which includes the following steps: (1) configuring DMEM culture medium and 0.25% trypsin respectively, then filtering through filters, sterilizing and inactivating bovine serum for separate equipment; (2) using steps for preparing single-layer PK15 cells; (1) preparing 0.25% trypsin. Trypsinase was digested and dispersed, and cell growth liquid was added for passage; (3) Plasmocin treatment reagent was added for further culture; (4) PK15 cells were subcultured when they grew into dense monolayer. The steps of using PLASMOcin treatment reagent containing 25 ug/ml were selected. (2) Cell growth liquid prepared in the process was used as the medium for passage until the PK15 cells were full-grown. 1:5 was added to the passages and continuously passaged for 4 generations, that is, PK15 cells without Mycoplasma were obtained. The invention can effectively remove mycoplasma from PK15 cells, and the time is short. The obtained PK15 cells without Mycoplasma need not use Plasmocin treatment reagent in the later passage process, and no secondary infection of cells will occur.

【技术实现步骤摘要】
一种去除PK15细胞中支原体的方法
本专利技术属于细胞生物学
，具体涉及一种去除PK15细胞中支原体的方法。
技术介绍
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3～0.5μm之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。目前对细胞的支原体去除方法多是用不同抗生素进行去除，比如氟喹诺酮类、四环素类衍生物、大环内酯类抗生素，其处理方法为：(1)获取待处理的细胞；(2)用含10μg/ml环丙沙星的培养基培养所述待处理的细胞；(3)定时更新所述培养基，并且使所述待处理的细胞的生长密度保持在50％～80％；(4)检测不到支原体污染的情况之后停止使用所述培养基。这些抗生素在使用一段时间后细胞支原体变成阴性，但细胞在不添加这些抗生素继续传代十几代后，支原体检测又变成的阳性。支原体约有1％可通过滤菌器，用普通染色法不易着色，因此在普通光学显微镜下不易被发现。商品化的Plasmocin(支原体抗生素)主要用于治疗或预防细胞培养中支原体污染。Plasmocin含有两种杀菌成分，可以强效对抗支原体及相关的无胞壁的细菌。它的显著效果主要是其含有两种独特的抗菌成分，一种成分通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除PK15细胞中支原体的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)分别配置DMEM培养基和0.25％胰酶，然后经滤菌器分别进行过滤，将牛血清进行消毒和灭活处理后进行分装备用；(2)将步骤(1)处理分装的牛血清加入到DMEM培养基中配置成细胞生长液，将长满单层的PK15细胞用步骤(1)制备的0.25％胰酶消化分散，按照1:5比例加入细胞生长液于不透气的T25细胞培养瓶中进行传代；(3)向步骤(2)获得的T25细胞培养瓶内的细胞悬液中加入Plasmocin treatment试剂，继续培养；(4)待PK15细胞长成致密单层后进行传代，选用含有25μg/ml的Plasmocin treat...

【技术特征摘要】
1.一种去除PK15细胞中支原体的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)分别配置DMEM培养基和0.25％胰酶，然后经滤菌器分别进行过滤，将牛血清进行消毒和灭活处理后进行分装备用；(2)将步骤(1)处理分装的牛血清加入到DMEM培养基中配置成细胞生长液，将长满单层的PK15细胞用步骤(1)制备的0.25％胰酶消化分散，按照1:5比例加入细胞生长液于不透气的T25细胞培养瓶中进行传代；(3)向步骤(2)获得的T25细胞培养瓶内的细胞悬液中加入Plasmocintreatment试剂，继续培养；(4)待PK15细胞长成致密单层后进行传代，选用含有25μg/ml的Plasmocintreatment试剂的步骤(2)中配制的细胞生长液作为传代培养基，待PK15细胞长满后按1:5加入所述的传代培养基再连续传代4代，即获得无支原体的PK15细胞。2.根据权利要求1所述的去除PK15细胞中支原体的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述滤菌器的规格为0.1μm。3.根据权利要求2所述的去除PK15细胞中支原体的方法，其特征在于：步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭春丽，王学波，刘志亮，王丹娜，常娓娓，罗济冠，李晓林，王相芹，李朝阳，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，青岛信得药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37