用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途技术

本发明专利技术用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途。通过本发明专利技术的方法可以指示糖链异常蛋白引发的肿瘤以及其他相关疾病的诊断情况，具有极高的灵敏度，方法快速简便而且自动化。

Compositions, kits, methods and uses for separation and detection of carbohydrate abnormal proteins

The present invention is used for separating and detecting sugar chain abnormal protein, kit, method and application. The method of the invention can indicate the diagnosis of tumors and other related diseases caused by abnormal sugar chain proteins, and has high sensitivity, fast, simple and automatic method.

【技术实现步骤摘要】
用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途
本专利技术涉及用于糖链异常疾病标志物蛋白(以下简称：糖链异常蛋白)分离检测的组合物、试剂盒以及方法和应用，属于医疗器械及体外诊断领域。
技术介绍
糖蛋白是由一个或多个寡糖链与蛋白质的多肽骨架共价相连构成的结合蛋白。糖蛋白是由蛋白质糖基化修饰形成的，糖链随着新合成肽链的延长与肽链的特定位点结合，促使肽链折叠、聚合成具有正确空间构象的糖蛋白。糖链异常蛋白主要由糖基化不完全，或糖基转移酶活性变化形成的，糖链异常蛋白有多种表现形式：特定结构糖链表达量的差异、不完整糖链结构的出现、糖前体的解聚及新糖链的出现等，糖基化生物合成状态比蛋白质的改变能更有效地提示疾病状态。大量研究表明糖链异常蛋白与恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后存在密切关系，如恶性肿瘤患者的糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶等糖链结构发生改变，达到一定程度后，向血液排放，并较多地存在于外周血液。因此，糖链异常蛋白检测使肿瘤在发生早期即可作出诊断，并为疾病进展的动态监测提供可能。糖链异常蛋白检测在肿瘤及相关疾病的诊断中有着重要意义：1、肿瘤辅助诊断、疗效评估和复发转移监测，提高肿瘤诊断准确率。2、临床病人和体检人群的肿瘤筛查，降低肿瘤漏检、早期发现肿瘤。3、慢性病症和异常体征的肿瘤风险评估，早期预警肿瘤风险、积极诊治、避免发展成中晚期肿瘤、拯救生命。糖链异常蛋白检测主要流程包括：糖链异常蛋白的分离与富集、检测分析等。糖链异常蛋白的分离与富集原理是基于糖链异常蛋白的识别及肽链理化性质的不同。主要富集方法有：1、凝集素亲和法、酰肼化学反应法及硼酸法等是基于某些物质对糖链异常蛋白的特异识别不同来分离、富集糖链异常蛋白的方法。2、电泳法及亲水作用法是基于糖链理化性质的不同实现糖链异常蛋白的分离、富集。糖链异常蛋白检测方法有质谱分析法、核磁共振波谱法(NMR)等：1、质谱分析法：采用液相色谱－电喷雾质谱结合蛋白酶解和糖苷酶解的方法为糖蛋白的分析提供了快速、灵敏的检测手段，能获得相关糖链的结构信息；质谱法价格昂贵且检测后相应的数据处理尚需继续完善，限制了应用。2、核磁共振波谱法(NMR)是利用原子核对射频辐射的吸收不同，从而对各种物质成分、结构进行定性分析的方法，是能提供糖链结构方面的信息，但NMR对样品要求非常高限制了的临床应用3、基于凝集法的凝集素亲和原理的糖链异常蛋白检测系统已广泛应用于临床，但该系统存在诸多不足。正如中国专利CN207067147U公开的一种糖链异常蛋白TAP检测装置所记载的，其为定性检测，不能有效提示肿瘤负荷与检测结果间的关系，且存在假阳性。而关于糖链异常蛋白的操作简便、高特异性、高灵敏度的自动化检测相关方法未见有公开记载。因此，针对上述问题和技术不足，专利技术一种高特异性、高灵敏度的糖链异常蛋白分离和检测的方法，对肿瘤及相关疾病的早诊、早治是必须的，且有着重要的应用价值和社会效益。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术在深入研究的基础上，发现首先通过特异性的分离磁珠对样本中糖链异常蛋白进行精准分离，然后通过包被对应抗体的检测磁珠对样本中糖链异常蛋白进行检测，可以得到糖链异常蛋白的准确含量。优选地，进一步通过采用同样方法检测的样本中相同项目的糖链蛋白含量，通过计算得到糖链异常蛋白的比率。具体地，本专利技术包括以下内容。本专利技术的第一方面，提供用于糖链异常蛋白分离检测的组合物，其至少两种磁珠，所述磁珠中的至少一种磁珠用于分离糖链异常蛋白，为糖链异常蛋白分离磁珠；至少一种磁珠用于检测糖链异常蛋白，为糖链异常蛋白检测磁珠。在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白分离磁珠和糖链异常蛋白检测磁珠的粒径不同，优选糖链异常蛋白分离磁珠粒径与糖链异常蛋白检测磁珠粒径比值大于1。在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白分离磁珠经高分子材料包埋处理，形成复合包埋磁珠，所述高分子材料是硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、环氧树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素的任意一种。在某些实施方式中，所述复合包埋磁珠包括上述两种以上高分子材料的复合物。在某些实施方式中，所述复合包埋磁珠与凝集素偶联形成磁珠-凝集素偶联复合物，用于样本中糖链异常蛋白的准确、高效分离。在某些实施方式中，所述凝集素包括植物凝集素、蜗牛凝集素HPA和欧洲花园蜗牛凝集素HAA。在某些实施方式中，所述植物凝集素包括：小扁豆凝集素(LCA)、刀豆凝集素、橘果孢粉凝集素、花生凝集素(PNA)、豌豆凝集素、麦胚素(WGA)等。在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白分离、检测组合物还包括分离洗脱液、分离清洗液，用于提高糖链异常蛋白的分离方法的稳定性，提高分离效率和灵敏度，降低分离过程中的非特异性吸附。在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白检测磁珠表面经羧基、羟基、氨基任意一种生物活性基团处理，对应形成羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠。在某些实施方式中，所述羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠与糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的抗糖链蛋白抗体结合，形成磁珠-抗体复合物，用于检测经分离磁珠分离后的糖链异常蛋白。在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白分离、检测组合物还包括检测清洗液、酶标记抗体、底物液；所述检测清洗液用于糖链异常蛋白检测过程中的清洗，提高结合效率、降低非特异性吸附、提高检测的灵敏度；所述酶标记抗体包括酶标记的抗糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的抗糖链蛋白抗体，抗体缓冲液，用于在检测过程中与分离磁珠分离的糖链异常蛋白、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物，然后与底物液进行显色或发光反应，准确测定糖链异常蛋白含量。本专利技术的第二方面，提供用于糖链异常蛋白分离、检测的试剂盒，其包括本专利技术第一方面所述的组合物。使用所述试剂盒检测，在检测结束后获得样本中糖链异常蛋白的定量检测结果。优选地，糖链异常蛋白分离磁珠包含于糖链异常蛋白分离组合物中，糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白检测组合物。在某些实施方案中，本专利技术的试剂盒除了包括本专利技术第一方面所述的组合物之外，还进一步包括糖链异常蛋白对应糖链蛋白的检测组合物。使用所述试剂盒检测，在检测结束后，同时获得样本中的糖链异常蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白对应糖链蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白比率共计三种检测结果。优选地，糖链异常蛋白分离磁珠包含于糖链异常蛋白分离组合物中，至少一种糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白检测组合物中，至少一种糖链异常蛋白检测磁珠还包含于糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物中。进一步优选地，糖链异常蛋白检测组合物和糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物为相同的组合物。本专利技术的第三方面，提供糖链异常蛋白检测方法，其包括使用本专利技术第一方面所述的组合物，或本专利技术第二方面所述的试剂盒的步骤。优选地，糖链异常蛋白检测组合物、糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物的制备、使用和组合的方法相同，确保糖链异常蛋白检测和糖链异常蛋白对应的糖链蛋白检测过程中背景相同，保证糖链异常蛋白检测比率的准确性；在某些实施方式中，所述糖链异常蛋白检测比率＝糖链异常蛋白的定量检测结果/糖链异常蛋白对应糖链蛋白的定量检测结果。本专利技术的第四方面，提供本专利技术第一方面所述的组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于糖链异常蛋白分离、检测的组合物，其包含两种以上的磁珠，其中至少一种磁珠为糖链异常蛋白分离磁珠，其用于分离糖链异常蛋白；至少一种磁珠为糖链异常蛋白检测磁珠，其用于检测糖链异常蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种用于糖链异常蛋白分离、检测的组合物，其包含两种以上的磁珠，其中至少一种磁珠为糖链异常蛋白分离磁珠，其用于分离糖链异常蛋白；至少一种磁珠为糖链异常蛋白检测磁珠，其用于检测糖链异常蛋白。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述糖链异常蛋白分离磁珠和所述糖链异常蛋白检测磁珠位于不同的溶液中，且具有不同的粒径、和/或平均粒径。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述糖链异常蛋白分离磁珠的粒径与所述糖链异常蛋白检测磁珠的粒径、和/或平均粒径的比值大于1。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述糖链异常蛋白分离磁珠经高分子材料包埋处理形成复合包埋磁珠，且所述高分子材料选自由硅化物、硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素组成的组的中的至少一种。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述高分子材料为选自由硅化物、硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素组成的组的中的至少两种。6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述复合包埋磁珠与凝集素偶联形成磁珠-凝集素偶联复合物，用于样本中糖链异常蛋白的分离。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述凝集素包括选自由植物凝集素、蜗牛凝集素HPA和欧洲花园蜗牛凝集素HAA组成的组中的至少一种。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述植物凝集素选自小扁豆凝集素LCA、刀豆凝集素、橘果孢粉凝集素、花生凝集素PNA、豌豆凝集素和麦胚素WGA组成的组。9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述糖链异常蛋白检测磁珠的表面经选自由羧基、羟基和氨基组成的组中的至少一种生物活性基团处理，从而形成羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠；所述羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠用于与糖链异常蛋白对应糖链蛋白的糖链蛋白抗体结...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔雍，李艳召，闵微，林长松，高琦，李永胜，林长青，余韶华，
申请(专利权)人：北京热景生物技术股份有限公司，热景廊坊生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11