一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法技术

本发明专利技术属于植物有性繁殖技术领域，公开了一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，收集郁香忍冬当日散粉的新鲜花粉，检测花粉萌发率，萌发率在80%以上时，将收集的新鲜花粉分装至离心管内，封好管口，置于‑20℃贮藏，贮藏约40d左右时，取出花粉，检测其萌发率，一般仍能达到40%，此时，其他亲本正好进入盛花期，可将花粉取出，进行人工辅助授粉。本发明专利技术有效解决了郁香忍冬杂交育种花期不遇的问题，操作简便易行，保存成本低且大大延长花粉具有活力的时间；通过开展离体花粉低温贮存研究，对于促进郁香忍冬的人工杂交育种工作具有重要意义。

A short term storage method for pollen isolated from Lonicera japonica Thunb

The invention belongs to the field of plant sexual reproduction technology, and discloses a method for short-term storage of in vitro pollen of Lonicera tulipa. The fresh pollen of Lonicera Tulipa on the same day is collected, and the pollen germination rate is detected. When the germination rate is above 80%, the collected fresh pollen is separated into centrifugal tubes, sealed, stored at 20 C, and stored. When stored for about 40 days, the germination rate of the pollen can still reach 40%. At this time, other parents just enter the peak flowering period, they can take out the pollen and carry out artificial assisted pollination. The invention effectively solves the problem that the flowering time of the hybrid breeding of Lonicera Tulipa is not encountered, the operation is simple and easy, the preservation cost is low, and the pollen vitality time is greatly prolonged; through the study of low temperature storage of in vitro pollen, it is of great significance to promote the artificial hybrid breeding of Lonicera tulipa.

【技术实现步骤摘要】
一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法
本专利技术属于植物繁殖
，涉及一种植物花粉的贮藏方法，具体涉及一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法。
技术介绍
郁香忍冬（LonicerafragrantissimaLindl.etPaxt.），是忍冬科忍冬属的一种半常绿灌木，高达2m，花香浓郁，是北方早春季节重要的芳香类花木，先花后叶，开花时色香兼备，花量繁盛，近年来，常被应用于垂直绿化中，是一种非常好的观花、观果园林绿化树种。郁香忍冬具有花香浓郁，早春开花等优良特性，在忍冬属植物的新品种培育中，作为优秀的亲本材料可供选择，但是郁香忍冬通常在2月中旬到3月初进入盛花阶段，而与其亲缘关系较近的忍冬属的其他植物（如金银忍冬（Loniceramaackii(Rupr.)Maxim.var.maackii）等），盛花期一般都在4月中下旬，花期不遇，限制了人工杂交育种工作的进行，因此，探索一种短期贮藏郁香忍冬离体花粉的方法显得极为必要，成熟的花粉含有植物的全部遗传物质信息，在自然条件下，许多花粉的寿命非常短，这给种质资源研究和杂交育种工作带来极大的不便，同时也不利于相关的植物遗传研究。进行离体花粉短期贮藏研究对于解决花期不遇，促进杂交育种工作的开展都具有重要意义。专利CN201611121492.5记载了一种金银忍冬花粉超低温保存方法，将新鲜金银忍冬花粉从发育良好的母树上在开花当天13:30左右采集后装入1.8ml的冻存管中，即在采后初始含水量为13％～14％左右时将装有花粉的冻存管投入﹣196℃液氮罐中保存，随后采用自来水化冻5min的方式进行化冻。本方法虽可实现花粉的超低温保存，但对保存条件要求较高，一般情况下较难达到，并且操作过程复杂，大大降低了花粉保存的可操作性。
技术实现思路
郁香忍冬的盛花期早于其亲缘关系较近的忍冬属的其他植物，致使花期不遇，限制了自然条件下的开展人工杂交育种工作，同时，郁香忍冬的花粉寿命短，不易于较长时间的自然存放，阻碍育种进程以及完善种质资源保存。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种短期贮藏郁香忍冬离体花粉的方法，有效克服了郁香忍冬与其亲缘关系较近的忍冬属其他植物的花期不遇的问题，为其种质创新、新品种选育提供参考依据。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现：本专利技术所述郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，采集郁香忍冬花粉，置于花粉贮存容器后，密封花粉贮存容器口，贮藏于5℃～-20℃的冰箱中，贮藏时间40左右。作为所述方法的进一步优化，郁香忍冬花粉的采集时间为上午9:00～10:00，所采花粉应为当日散粉的新鲜花粉。作为所述方法的进一步优化，采集的郁香忍冬新鲜花粉的萌发率不低于80%。作为所述方法的进一步优化，郁香忍冬新鲜花粉的贮藏温度-20℃，贮藏时间40d左右，花粉萌发率不低于40%。在上述参数优化的基础上，所述的郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其包括以下步骤：1）于上午9:00～10:00取当日散粉的花朵，用毛刷轻刷已散粉的花粉囊，收集花粉；2）检测花粉活力，郁香忍冬新鲜花粉的萌发率不低于80%；3）将采集的郁香忍冬新鲜花粉分装至花粉贮存容器后，密封花粉贮存容器口，贮藏于-20℃的冰箱中，期间不定期检测花粉活力；4）在贮藏40d左右时，检测花粉活力，其萌发率不低于40%。与现有技术相比，本专利技术的有益效果或优点主要体现在以下方面：本专利技术提供了一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其将采集的新鲜花粉分装于离心管中，密封离心管管口，贮藏于-20℃的冰箱中，贮藏时间40d左右，通过检测贮藏后的花粉活力，获知通过本专利技术方法保存离体郁香忍冬花粉具有较好的活力，花粉萌发率不低于40%。本专利技术解决了郁香忍冬杂交育种花期不遇的问题，40d左右能保证离体花粉具有一定生活力，为郁香忍冬的育种、新品种的选育工作提供了条件。本专利技术所述郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，简便易行，可操作性强，采用普通常用冰箱便可达到的-20℃冷冻贮藏，条件简便，易于达到，可行性很高。附图说明图1是郁香忍冬离体新鲜花粉在不同温度下贮藏后的萌发率。图2是郁香忍冬离体阴干花粉在不同温度下贮藏后的萌发率。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，下述各实施例仅用于说明本专利技术，对本专利技术并没有限制。实施例1以陕西省西安植物园内的郁香忍冬为例对本专利技术作进一步的详细说明。本实施例所述郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，所用离体花粉为郁香忍冬的新鲜花粉。1）采收花粉采收花粉—3月10日，在西安植物园园区内选择生长健壮，无病虫害的郁香忍冬植株，于上午9:00～10:00取当日散粉的花朵，置于硫酸纸上，迅速带回实验室，用毛刷轻刷已散粉的花粉囊，收集花粉。2）测定花粉含水量通过现有技术测定采集的新鲜花粉的含水量，测定结果显示，新鲜花粉的含水量为90%。3）检测花粉活力通过现有技术测定花粉的活力（TTC染色法），测定结果显示，新鲜花粉的萌发率为96.28%。4）贮藏将新鲜花粉分装至离心管内，封好管口，分别置于常用冰箱冷冻室（-20℃）、冷藏室（5℃）和室温贮藏。5）检测花粉萌发率在贮藏5d、10d、21d、31d和40d时分别检测不同贮藏温度下的花粉萌发率，结果如图1所示。从图1中可以看出，在不同的贮藏温度下，花粉的萌发率与贮藏时间呈负相关，在室温、5℃和-20℃条件下，随着贮藏时间的延长，郁香忍冬的新鲜花粉萌发率均降低，在室温贮藏11d时，花粉萌发率降为0，5℃贮藏31d时，花粉萌发率降为0，在-20℃贮藏40d后，其萌发率仍保持在40.63%，说明对于新鲜花粉，-20℃是其短期贮藏的最佳方式。6）人工辅助杂交育种5月19日，取出-20℃中贮藏的、萌发率为40.63%的花粉，对其他忍冬属植物进行人工授粉。实施例2以陕西省西安植物园内的郁香忍冬为例对本专利技术作进一步的详细说明。本实施例所述郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，所用离体花粉为郁香忍冬的阴干花粉。1）采收花粉采收花粉—3月10日，在西安植物园园区内选择生长健壮，无病虫害的郁香忍冬植株，于上午9:00～10:00取当日散粉的花朵，置于硫酸纸上，迅速带回实验室，用毛刷轻刷已散粉的花粉囊，收集花粉。2）测定花粉含水量将采集的花粉置于室内阴干48h后，通过现有技术测定花粉的含水量，测定结果显示，阴干花粉的含水量为55%。3）检测花粉活力通过现有技术（TTC染色法）测定阴干花粉的活力，测定结果显示，阴干花粉的萌发率为86.32%。4）贮藏将阴干花粉分装至离心管内，封好管口，分别置于常用冰箱冷冻室（-20℃）、冷藏室（5℃）和室温贮藏。5）检测花粉萌发率在贮藏5d、10d、21d、31d和40d时分别检测不同贮藏温度下的花粉萌发率，结果如图2所示。从图2中可以看出，在不同的贮藏温度下，花粉的萌发率与贮藏时间呈负相关，在室温、5℃和-20℃条件下，随着贮藏时间的延长，阴干后的郁香忍冬花粉萌发率均降低，在室温贮藏11d时，花粉萌发率降为0，5℃贮藏31d时，花粉萌发率降为0，在-20℃贮藏40d后，其萌发率为36.17%，说明对于阴干后的郁香忍冬离体花粉，-20℃是其短期贮藏的最佳方式。通过实验发现，运用此方法对郁香忍冬花粉进行短期贮藏时，花粉含水量对其贮藏效果影响不大，因此，可选择将新鲜花粉直接贮藏，此方法既避免了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其特征在于，采集郁香忍冬花粉，置于花粉贮存容器后，密封花粉贮存容器口，贮藏于5℃～‑20℃的冰箱中，贮藏时间40 d左右。

【技术特征摘要】
1.一种郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其特征在于，采集郁香忍冬花粉，置于花粉贮存容器后，密封花粉贮存容器口，贮藏于5℃～-20℃的冰箱中，贮藏时间40d左右。2.根据权利要求1所述的郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其特征在于，郁香忍冬花粉的采集时间为上午9:00～10:00，所采花粉应为当日散粉的新鲜花粉。3.根据权利要求1所述的郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其特征在于，采集的郁香忍冬新鲜花粉的萌发率不低于80%。4.根据权利要求2所述的郁香忍冬离体花粉短期贮藏的方法，其特征在于，郁...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘安成，尉倩，李淑娟，王庆，柏国清，
申请(专利权)人：陕西省西安植物园，
类型：发明
国别省市：陕西,61