生物标志物CBX8在子痫前期诊治中的应用制造技术

本发明专利技术公开了生物标志物CBX8在子痫前期诊治中的应用，本发明专利技术通过检测子痫前期患者胎盘组织和血液中CBX8的表达变化，进一步验证了CBX8与子痫前期的发生发展密切相关。而后通过基因沉默技术抑制滋养细胞CBX8表达后观察细胞活性、侵袭能力的改变，以明确CBX8对滋养细胞侵袭性的影响以及在子痫前期中的作用，从而为子痫前期的诊断和治疗提供一种分子手段。

【技术实现步骤摘要】
生物标志物CBX8在子痫前期诊治中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及生物标志物在CBX8在子痫前期诊治中的应用。
技术介绍
子痫前期(Preeclampsia,PE)，是妊娠期高血压疾病(hypertensivedisorderscomplicatingpregnancy,HDCP)的特殊类型，主要特征为:妊娠20周以后出现高血压、蛋白尿和水肿，而分娩后血压恢复正常。由于地理、社会、经济和种族、文化等的差异，不同地区发病率不同。世界范围内，子痫前期发病率约为2％-8％，而我国子痫前期发病率偏高，约为9.4％。尽管越来越多的国家在不断改善母婴的健康，但每年死于妊娠相关性疾病的女性超过50万。子痫前期的病因及发病机理至今尚未完全阐明，目前普遍认为，滋养细胞在子宫螺旋动脉侵入过浅和受限是子痫前期发病的关键环节。滋养细胞是构成胎盘结构的主要成分，对于胎盘形成及维持胎儿正常发育起着重要作用。在囊胚植入早期，滋养外胚层细胞即分化为两类滋养层细胞，即细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞，前者又有两种分化途径：与合体滋养层细胞融合或分化为绒毛外滋养层细胞。绒毛外滋养层细胞具有侵袭能力，一部分绒毛外滋养层细胞侵润至子宫内膜的深层、直至子宫肌层的内三分之一，称为间质滋养层细胞；一部分绒毛外滋养层细胞侵入母体子宫螺旋动脉，称为血管内滋养层细胞，并逐步取代血管内皮及血管平滑肌细胞，引起血管基底膜降解，重塑螺旋动脉(spiralartery，SPA)，形成高流、低阻SPA，以提供胎儿胎盘充足的血流量。胎盘形成过程中滋养细胞侵袭发生障碍，SPA侵入过浅，胎盘血流减少，一方面可引起胎儿宫内生长受限，另一方面滋养细胞将分泌某些细胞因子或激素，导致全身血管内皮功能损伤和炎症反应过度，引起高血压、蛋白尿等一系列临床症状，从而诱发子痫前期。滋养细胞与肿瘤细胞的浸润过程相似，不同的是滋养细胞的侵袭受到精细调控，此过程涉及复杂的细胞信号转导通路，但具体的分子机制尚未被完全阐明。研究子痫前期发病的分子机制，挑选新的、可靠的临床、生化或物理标记物对其发病进行预测，对于采取可能的预防措施以改善母儿预后、节约医疗资源具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与子痫前期发生发展相关的基因标志物，灵敏和特异性的实现子痫前期的诊断和治疗。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面提供了一种试剂，所述试剂为检测CBX8基因或其表达产物的水平的试剂。进一步，所述试剂包括：特异性识别CBX8基因的探针；或特异性扩增CBX8基因的引物；或特异性结合CBX8基因编码的蛋白的抗体或配体。进一步，特异性扩增CBX8的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。本专利技术的第二方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的试剂。本专利技术的第三方面提供了一种芯片，所述芯片包括本专利技术第一方面所述的试剂。本专利技术的第四方面提供了一种核酸膜条，所述核酸膜条包括本专利技术第一方面所述的试剂。本专利技术的第五方面提供了一种组合物，所述组合物包括CBX8的抑制剂，和/或药学上可接受的载体。进一步，所述抑制剂为siRNA；优选的，siRNA的序列如SEQIDNO.7～8所示。本专利技术的第六方面提供了一种筛选治疗子痫前期的候选药物的方法，所述方法包括：用待筛选物质处理表达或含有CBX8基因或其编码的蛋白的培养体系；和检测所述体系中CBX8基因或其编码的蛋白的表达或活性；其中，若所述待筛选物质可以抑制CBX8基因的水平或表达活性，则表明该待筛选物质是治疗子痫前期的候选药物。在本专利技术中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。在本专利技术中，所述的步骤还包括：对获得的候选药物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选药物中进一步选择可以治疗子痫前期的药物。本专利技术的第七方面提供了如下任一项所述的应用：a.本专利技术第一方面所述的试剂在制备早期诊断子痫前期的产品中的应用；b.本专利技术第二方面所述的试剂盒在制备诊断子痫前期的产品中的应用；c.本专利技术第三方面所述的芯片在制备诊断子痫前期的产品中的应用；d.本专利技术第四方面所述的核酸膜条在制备诊断子痫前期的产品中的应用；e.本专利技术第五方面所述的组合物在制备治疗子痫前期的药物中的应用；f.本专利技术第六方面所述的方法在筛选治疗子痫前期的候选药物中的应用；g.CBX8在筛选治疗子痫前期的候选药物中的应用；h.CBX8在制备治疗子痫前期的候选药物中的应用。附图说明图1是利用QPCR检测CBX8基因在子痫前期患者中的表达情况；其中，A是胎盘组织中的表达水平，图B是血液中的表达水平；图2是利用QPCR检测siRNA对CBX8基因表达的影响图；图3是利用ELISA检测siRNA对CBX8蛋白表达的影响图；图4显示MTT法检测CBX8对细胞增殖活性的影响图；图5显示利用Transwell小室检测CBX8基因对细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，首先通过高通量测序技术，筛选在子痫前期患者中呈现差异表达的基因，通过检测子痫前期患者中胎盘组织和血液中该基因的表达变化，进一步验证该基因与子痫前期发生发展密切相关。而后通过基因沉默技术抑制滋养细胞中该基因的表达后观察细胞活性、侵袭能力的改变，以明确该基因对滋养细胞侵袭性的影响及在子痫前期中的作用，并探讨其作用机制，为阐明子痫前期的分子机制提供线索。CBX8基因CBX8基因位于17号染色体长臂2区5带上，本专利技术中的CBX8包括野生型、突变型或其片段。在本专利技术的具体实施例中，CBX8具有如目前国际公共核酸数据库GeneBank中CBX8基因(NM_020649.2)所示的序列。本专利技术的CBX8核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。mRNA水平的一些检测或定量方法是本领域已知的并且都适合用于本文提供的方法以测量生物标志物的水平。示例性的方法包括但不限于RNA印迹(northernblots)、核糖核酸酶保护试验和基于PCR的方法。当生物标志物是mRNA分子时，mRNA序列或其片段可以用于制备至少有部分互补的探针。然后采用例如基于PCR的方法、RNA印迹法(Northernblotting)或试纸条检测(dipstickassay)等任何合适的测定法，可以用探针检测样品中的mRNA序列。所述测定方法可以根据所需mRNA信息的类型而变化。示例性的方法包括但不限于RNA印迹(Northernblots)和基于PCR的方法(例如，qRT-PCR)。qRT-PCR等方法也可以对样品中mRNA的量进行准确定量。任何合适的测定平台均可用于确定样品中mRNA的存在。例如，测定可以呈试纸条(dipstick)、膜(membrane)、芯片(chip)、盘(disk)、测试条(teststrip)、滤器(filter)、微球(microsphere)、载片(slide)、多孔板(multiwellplate)或光纤(opticalfiber)的形式。测定系统可以具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂，其特征在于，所述试剂为检测CBX8基因或其表达产物的水平的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种试剂，其特征在于，所述试剂为检测CBX8基因或其表达产物的水平的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，包括：特异性识别CBX8基因的探针；或特异性扩增CBX8基因的引物；或特异性结合CBX8基因编码的蛋白的抗体或配体。3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，特异性扩增CBX8的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的试剂。5.一种芯片，其特征在于，所述芯片包括权利要求1-3任一项所述的试剂。6.一种核酸膜条，其特征在于，所述核酸膜条包括权利要求1-3任一项所述的试剂。7.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括CBX8的抑制剂，和/或药学上可接受的载体。8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述抑制剂为siRNA；优选的，siRNA的序列如SEQIDNO.7～8所示。9.一种筛选治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，孙耀兰，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11