细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供能够不使用染色试剂并且不依赖于细胞的自体荧光地判定细胞的生存率的细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法。该细胞生存率判定装置包括：分布取得部(301)，其获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的粒子的大小的分布；分类部(302)，其在分布中，使用规定的阈值将粒子分类为小粒子群和大粒子群；比计算部(303)，其计算出属于小粒子群的粒子的数量与属于大粒子群的粒子的数量之比的值；以及生存率判定部(304)，其使用预先取得的比与细胞的生存率的关系，根据比的值判定培养细胞的生存率。

【技术实现步骤摘要】
细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法
本专利技术涉及细胞培养技术，涉及细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法。
技术介绍
在生物过程和细胞培养领域，为了控制细胞培养条件，以及为了判断细胞培养的停止时期等，对培养细胞的生死进行判定，从而测定生存率。作为判定细胞生死的判定方法，提出了使荧光色素与细胞内的核酸结合，根据激发的荧光的强度对细胞的生死进行判定的方法(参照例如专利文献1。)。此外，还已知有利用透过死细胞的细胞膜将死细胞的细胞质染成蓝色的锥虫蓝染色，来判定细胞的生死的方法。但是，染色试剂价格昂贵，而且对细胞进行染色的工序繁杂。此外，染色试剂往往对人体有害。因此染色试剂需要管理、保管。此外，用染色试剂染色后的细胞难以继续培养，废液的处理也必须注意。对此，提出了不使用染色试剂，而是根据细胞发出的自体荧光来判定细胞的生死的方法(例如参照专利文献2)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第2592114号公报专利文献2：日本专利第4868879号公报
技术实现思路
专利技术要解决的课题由于细胞发出的自体荧光较微弱，因此有时需要较长的曝光时间，或需要高灵敏度的荧光检测装置。在此，本专利技术的目的在于，提供一种能够不使用染色试剂并且不依赖于细胞的自体荧光地判定细胞的生存率的细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法。解决课题的手段根据本专利技术的方式，提供一种细胞生存率判定装置，包括：分布取得部，其获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的粒子的大小的分布；分类部，其在分布中，使用规定的阈值将粒子分类为小粒子群和大粒子群；比计算部，其计算出属于小粒子群的粒子的数量与属于大粒子群的粒子的数量之比的值；以及生存率判定部，其使用预先取得的比与细胞的生存率的关系，根据比的值判定培养细胞的生存率。在上述细胞生存率判定装置中，也可以是，分布取得部根据溶液的图像，获得粒子的大小的分布在上述细胞生存率判定装置中，也可以是，分布取得部根据在各个粒子上产生的散射光的强度，获得粒子的大小的分布。上述细胞生存率判定装置还可以包括：流路，溶液在流路中流通，且流路能够卸下；测定室，其连接于流路，且能够卸下；照射器，其对测定室内照射测定光；以及散射光测定器，其测定被照射了测定光的测定室内产生的散射光的强度。在上述细胞生存率判定装置中，培养细胞也可以被悬浮培养。在上述细胞生存率判定装置中，培养细胞也可以是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。此外，根据本专利技术的方式，提供一种细胞生存率判定方法，其包括：获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的粒子的大小的分布；在分布中，使用规定的阈值将粒子分类为小粒子群和大粒子群；计算出属于小粒子群的粒子的数量与属于大粒子群的粒子的数量之比的值；使用预先取得的比与细胞的生存率的关系，根据比的值判定培养细胞的生存率。在上述细胞生存率判定方法中，也可以根据溶液的图像获得粒子的大小的分布。在上述细胞生存率判定方法中，也可以根据在各个粒子上产生的散射光的强度，获得粒子的大小的分布。上述细胞生存率判定方法还可以包括：使溶液在可卸下的流路、以及连接于流路的可卸下的测定室中流动；对测定室内照射测定光；以及测定被照射了测定光的测定室内产生的散射光的强度。在上述细胞生存率判定方法中，培养细胞也可以被悬浮培养。在上述细胞生存率判定方法中，培养细胞也可以是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。专利技术效果根据本专利技术，可以提供一种能够不使用染色试剂并且不依赖于细胞的自体荧光地判定细胞的生存率的细胞生存率判定装置以及细胞生存率判定方法。附图说明图1是第1实施方式涉及的细胞生存率判定装置的示意图。图2是第1实施方式涉及的细胞生存率判定装置的示意图。图3是示出第1实施方式涉及的粒子的频数分布的示意曲线图。图4是示出第1实施方式涉及的细胞的培养时间、与属于小粒子群的粒子的数量相对于属于大粒子群的粒子的数量之比的关系的示意曲线图。图5是示出第1实施方式涉及的死细胞的比例、与属于小粒子群的粒子的数量相对于属于大粒子群的粒子的数量之比的关系的示意曲线图。图6是第2实施方式涉及的细胞生存率判定装置的示意图。图7是第2实施方式涉及的细胞生存率判定装置的示意图。图8是示出培养开始后第0天至第3天的实施例涉及的粒子的频数分布的曲线图。图9是示出培养开始后第4天至第7天的实施例涉及的粒子的频数分布的曲线图。图10是示出培养开始后第8天至第11天的实施例涉及的粒子的频数分布的曲线图。图11是示出培养开始后第12天以及第13天的实施例涉及的粒子的频数分布的曲线图。图12是实施例涉及的含有被悬浮培养的细胞的培养基的照片。图13是示出实施例涉及的细胞的培养时间、与属于小粒子群的粒子的数量相对于属于大粒子群的粒子的数量之比的关系的曲线图。图14是示出实施例涉及的细胞的生存率、与属于小粒子群的粒子的数量相对于属于大粒子群的粒子的数量之比的关系的曲线图。具体实施方式以下对本专利技术的实施方式进行说明。下图的记载中，同一部分或类似的部分以相同或类似的符号表示。但是，附图是示意性的。因此，具体尺寸等应对照以下说明进行判断。此外，在附图相互之间，当然也包含彼此的尺寸关系、比例不同的部分。还有，形成该公开的一部分的记述以及附图不应该理解为对本专利技术的限定。根据该公开，本领域技术人员理应清楚了解各种各样的替代实施方式、实施例及应用技术。因此，应该理解本专利技术也包含在这里没有记载的各种各样的实施方式等。(第1实施方式)如图1以及图2所示，第1实施方式涉及的细胞生存率判定装置包括：分布取得部301，其获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的粒子的大小的分布；分类部302，其在分布中使用规定的阈值，将粒子分类为小粒子群和大粒子群；比计算部303，其计算出属于小粒子群的粒子的数量与属于大粒子群的粒子的数量之比的值；以及生存率判定部304，其使用预先取得的比与细胞的生存率的关系，根据比的值判定培养细胞的生存率。分布取得部301、分类部302、比计算部303以及生存率判定部304例如包含于运算处理装置300中。培养细胞是例如被悬浮培养的细胞。在悬浮培养中，使细胞不与培养器的底面接触地，使球状的细胞以在培养液中悬浮的状态增殖。培养细胞也可以是被接触培养的细胞。培养细胞包含所有种类的细胞。作为培养细胞的一例，可以举出抗体形成细胞。作为抗体形成细胞的例子，有例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。CHO细胞包含株化了的CHO细胞。此外，CHO细胞包含CHO－K1细胞、二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO－DG44细胞等的变种。分布取得部301例如根据含有包含培养细胞的粒子的溶液的图像，获得每单位体积的粒子的大小的频数分布。通过测量含有包含培养细胞的粒子的溶液的图像上映现的各粒子的大小，得到粒子的大小的频数分布。含有包含培养细胞的粒子的溶液的图像为含有被悬浮培养的细胞的溶液的图像。或者，含有包含培养细胞的粒子的溶液的图像为，含有经接触培养后被从培养器上剥离而悬浮于溶液中的细胞的溶液的图像。粒子的大小的频数分布例如用直方图表示。不过，粒子的大小的频数分布并不一定必须以视觉的方式进行表现。包含培养细胞的粒子的大小可以是粒子的直径，也可以是粒子的半径。此外，也可以将反映粒子的大小的数值用作表示粒子的大小的指标。例如，当对粒子照射光时，粒子上会产生米氏散射光本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞生存率判定装置，其特征在于，包括：分布取得部，其获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的所述粒子的大小的分布；分类部，其在所述分布中，使用规定的阈值将所述粒子分类为小粒子群和大粒子群；比计算部，其计算出属于所述小粒子群的粒子的数量与属于所述大粒子群的粒子的数量之比的值；以及生存率判定部，其使用预先取得的所述比与细胞的生存率的关系，根据所述比的值判定所述培养细胞的生存率。

【技术特征摘要】
2017.04.19 JP 2017-0826751.一种细胞生存率判定装置，其特征在于，包括：分布取得部，其获得含有包含培养细胞的粒子的溶液中的所述粒子的大小的分布；分类部，其在所述分布中，使用规定的阈值将所述粒子分类为小粒子群和大粒子群；比计算部，其计算出属于所述小粒子群的粒子的数量与属于所述大粒子群的粒子的数量之比的值；以及生存率判定部，其使用预先取得的所述比与细胞的生存率的关系，根据所述比的值判定所述培养细胞的生存率。2.根据权利要求1所述的细胞生存率判定装置，其特征在于，所述分布取得部根据所述溶液的图像，获得所述粒子的大小的分布。3.根据权利要求1所述的细胞生存率判定装置，其特征在于，所述分布取得部根据在各个所述粒子上产生的散射光的强度，获得所述粒子的大小的分布。4.根据权利要求3所述的细胞生存率判定装置，其特征在于，还包括：流路，所述溶液在所述流路中流通，且所述流路能够卸下；测定室，其连接于所述流路，且能够卸下；照射器，其对所述测定室内照射测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：长谷川伦男，
申请(专利权)人：阿自倍尔株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP