一种杏鲍菇液体菌种的发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种杏鲍菇液体菌种的发酵方法，在液体种子、摇瓶种子、种子罐种子及发酵罐液体菌种各阶段培养基中科学复配可提高菌种抗冷、热应激性、免疫性和抗杂菌能力的中草药提取物，同时科学复配了既具有原料适应性，又具有消泡剂功能的木屑粉，并且采用追加接种和分段变温发酵的方式，缩短了菌种菌龄及增殖代数差距，适时流加包被后的具有特殊功能的壳聚糖，培养出发酵菌丝粗壮、活性高、菌丝球直径小、密度大、分布均匀的杏鲍菇液体菌种，其菌丝球密度为4.5‑5.5ⅹ10

A fermentation method of Pleurotus abalone liquid strain

The invention discloses a fermentation method of liquid bacteria of Pleurotus eryngii, which can be scientifically compounded in liquid seeds, shake flask seeds, seed pot seeds and liquid bacteria culture medium of fermentation pot to improve the cold resistance, heat stress resistance, immunity and anti-bacterial ability of the bacteria, and scientifically compounded the extracts of Chinese herbal medicine with suitable raw materials. Sawdust powder with the function of defoamers and defoamers was inoculated and fermented at different temperatures in order to shorten the age of bacteria and the difference of multiplication algebra. Chitosan with special function was added in proper time and the fermented mycelia was thick, active, small diameter, large density and uniform distribution. The liquid density of Pleurotus spp. is 4.5, 5.5, 10.

【技术实现步骤摘要】
一种杏鲍菇液体菌种的发酵方法本申请是以下申请的分案申请：申请日为2015年6月11日，申请号为201510316763.1，专利技术名称为一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法。
本专利技术涉及杏鲍菇栽培
，具体涉及一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种的发酵方法。
技术介绍
杏鲍菇(PleurotuseryngiiQuel.)又名刺芹侧耳，具有菌肉肥厚、质地脆嫩等优点，特别是其菌柄组织致密、结实、乳白、爽口，被称为“平菇王”、“干贝菇”，具有杏仁香味和鲍鱼的口感，适合保鲜、加工，深得人们的喜爱，其营养丰富，富含蛋白质、碳水化合物、维生素及钙、镁、铜、锌等矿物质，可以提高人体免疫功能，对人体具有抗癌、降血脂、润肠胃以及美容等作用，具有极高的栽培价值与商业价值。目前国内外杏鲍菇栽培以固体菌种为主，而液体菌种相对于固体菌种具有生产周期短、菌龄一致、出菇齐、便于管理、菌种成本低、接种方便且快速等优点，有利于食用菌生产的规模化、工厂化。近年来由于工厂化栽培技术的迅猛发展，为缩短菌种制备周期，提高菌种质量和生产效率，国内外生产厂家研究开发液体菌种用于替代目前杏鲍菇生产中普遍使用的固体菌种，并在实际生产中开始应用。杏鲍菇液体菌种是通过液体发酵工艺生产有活力的杏鲍菇菌丝体。目前，国内尚未颁布统一的国家标准来规范杏鲍菇液体菌种的质量和品质，但是在实际应用过程中人们总结应用效果制订了一些地方性标准，如辽宁省地方标准《DB21/T1693-2008食用菌液体菌种生产技术规程》等，在这些标准中明确规定，合格的食用菌液体菌种应该“可见特有的菌丝形态，球状和丛状菌丝体大量分布，菌丝粗壮，菌丝内原生质分布均匀”“菌液稍粘稠，有大量片状或球状菌丝体悬浮、分布均匀”，也就是说优良的液体菌种菌丝球密度高、直径小，分布均匀；另一方面，在实际生产应用中杏鲍菇液体菌种是通过生产线接种机进行机械化接种操作，由于接种机喷口狭窄，为防止菌液堵塞管道，还需要增加液体菌种接种前的预处理工艺(一般采用机械粉碎的方法使菌液中的菌丝球直径变小，使菌液变均匀)。因此，杏鲍菇液体发酵菌丝球的大小、密度、均匀度等物理特性是优质液体菌种的关键控制指标。目前，有关杏鲍菇液体培养的研究报道和专利技术大部分集中于摇瓶水平，规模化发酵研究的较少，基本集中在发酵工艺的优化方面，尤其在发酵培养基的改良方面较多：申请号为201410568173.3的中国专利公开了一种改良的杏鲍菇液体发酵培养基以及利用其培养杏鲍菇液体菌种的方法，在发酵培养基中添加0.1-0.3g/100ml的明胶、琼脂中的一种或二者的混合物，采用搅拌、摇床震荡培养，上述公开的专利培养基中琼脂添加量超过0.4g/100ml凝固，无法进行液体培养，不易控制，存在发酵失败隐患，并且摇床培养得到的液体菌种量少，不适合规模化、机械化生产，同时菌种质量不是很好。申请号为201410244283.4的中国专利公开了一种食用菌液体菌种的生产方法，是将保存的食用菌菌株经活化后在固体培养基培养，然后粉碎，继续在固体培养基上密封培养2-3天，与0.15-0.2％的琼脂溶液接触混匀得到液体菌种，上述公开的专利实质上仍然存在固体发酵的缺陷，并且其中的粉碎再培养工艺和调配工艺易污染杂菌，高速搅拌打浆和粉碎的高剪切力对菌种伤害颇大。北方园艺.食用菌篇公开了刘冠卉等发表的杏鲍菇液体菌种的制备研究【2009(11)230-232】，对杏鲍菇液体菌种发酵培养基和发酵条件进行了优化，但仍不全面，不能很好的适合菌种生长、繁殖，得到的液体菌种的发酵菌丝球的大小、密度、均匀度等物理特性不很理想，同样存在搅拌剪切力对菌丝球质量的严重影响。鼓气发酵是将氧气或无菌空气从气升式发酵罐底部通入的发酵方式，同时具备通氧和柔和搅拌的作用，通氧效率高、溶氧效果好，可有效防止搅拌式发酵剪切力对杏鲍菇液体菌种质量的影响，得到的液体菌种菌丝粗壮、粘度适中、菌丝球直径小、密度高、分布均匀。申请号为201310479951.7的中国专利公开了一种杏鲍菇液体菌种的培养方法，将传统的马铃薯碳源和麸皮氮源替换为豆粕粉，将培养基倒入发酵罐，121℃灭菌60-120分钟，灭菌后水淋冷却并通入无菌空气；接种培养好的液体母种，接种量为1-2‰，发酵罐培养温度为21-26℃，通气压力为0.5-1.5兆帕，培养7-10天得到杏鲍菇液体菌种，但上述公开的专利培养基营养不全面，发酵工艺滞后，发酵周期长，得到的液体菌种质量仍不理想。综上，依据杏鲍菇的菌种特性，通过优化培养基和培养条件，采用鼓气发酵制备高质量、高产量、成本低的菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种仍是本领域技术人员的不懈追求。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是克服现有鼓气发酵制备杏鲍菇液体菌种的缺陷，在菌种培养过程各阶段培养基中科学复配可提高菌种抗冷、热应激性和免疫性的中草药提取物以及适应性原料木屑粉，采用分段追加接种和变温发酵的方式，缩短菌种菌龄、增殖代数差距，适时流加包被后的壳聚糖调整发酵培养基的粘度，培养出一种发酵菌丝粗壮、活性高、菌丝球直径小、密度大、分布均匀、发酵周期短的杏鲍菇液体菌种。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括如下步骤：1)取保存好的杏鲍菇斜面菌种0.2cm2的菌种块2块接种于平板培养基进行活化，25℃恒温培养10天，如此活化2次，得平板种子；2)将平板种子用直径为0.5cm的打孔器截取0.2cm2的菌种块3块接入250mL三角瓶中，液体种子培养基装液量为100mL，于25℃恒温培养2天，然后放入恒温摇床中，25℃、100r/min振荡培养3天得液体种子；3)将液体种子以10％的接种量接种于500mL摇瓶中，摇瓶培养基装液量250mL，于25℃、150r/min振荡恒温培养4天得摇瓶种子；4)将摇瓶种子以10％的接种量接种于5L种子罐中，种子罐培养基装液量3L，于25℃、通气量4L/min条件下恒温培养4天得种子罐种子；5)首先将种子罐种子以8％接种量接种于30L发酵罐，发酵培养基装液量15L,于30-32℃、通气量3-5L/min恒温发酵12-24h,然后以0.3-0.5℃/min的速率降温至18-22℃，向发酵罐中加入10-12g包被壳聚糖和900mL种子罐种子，在通气量3-5L/min条件下恒温发酵10-16h，最后以0.2-0.4℃/min的速率升温至24-26℃，在通气量2-4L/min条件下恒温发酵45-52h即得菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种；所述杏鲍菇斜面菌种为市购杏鲍菇纯化菌株；所述平板培养基组成为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂20g/L，VB10.02g/L，余量为水，pH值6.0；所述液体种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，琼脂2g/L，中草药提取物0.3-0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.1-0.3g/L，VB10.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述摇瓶培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.5-1.0g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：将保存的杏鲍菇斜面菌种经平板培养基活化后依次经液体种子培养基、摇瓶种子培养基和种子罐培养基逐级扩大培养得到种子罐种子，首先将种子罐种子以8％接种量接种于30L发酵罐，发酵培养基装液量15L,于30‑32℃、通气量3‑5L/min恒温发酵12‑24h,然后以0.3‑0.5℃/min的速率降温至18‑22℃，向发酵罐中加入10‑12g包被壳聚糖和900mL种子罐种子，在通气量3‑5L/min条件下恒温发酵10‑16h，最后以0.2‑0.4℃/min的速率升温至24‑26℃，在通气量2‑4L/min条件下恒温发酵45‑52h即得菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种；所述包被壳聚糖的制备方法包括如下步骤：取壳聚糖加入其质量30‑50％的质量百分比浓度为13‑15％的α‑环状糊精水溶液中，制成软材，用10‑20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率2000W、60‑80℃干燥4‑6min，用10‑20目筛快速整粒即得包被壳聚糖；所述液体种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，琼脂2g/L，中草药提取物0.3‑0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.1‑0.3g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述摇瓶种子培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.5‑1.0g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.2‑0.4g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述种子罐培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.8‑1.2g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.3‑0.5g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述发酵培养基的组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物1.3‑1.5g/L，木屑粉0.7‑0.9g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述发酵培养基的制备方法为：按照培养基配方准确称量各原料，首先取黄豆饼粉质量4‑6倍的水，用乳酸调节pH值为5‑6，加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a‑淀粉酶,边搅拌边加入黄豆饼粉，升温至90‑95℃，保温，液化10‑15min,然后降温至50‑60℃，保温，边搅拌边加入40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20‑30min，边搅拌边加入剩余水和其它原料，均匀混合，调整pH值为6.0，121‑123℃灭菌30‑40min即得发酵培养基；所述木屑粉的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于装有质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3‑0.4MPa蒸煮20‑30min,取出，沥干，与植物油按质量比100:1均匀混合，然后将混合物置微波干燥机于2000W、120℃微波辐照5min，最后超微粉碎至粒径0.3‑0.5mm,密封包装即得木屑粉。...

【技术特征摘要】
1.一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：将保存的杏鲍菇斜面菌种经平板培养基活化后依次经液体种子培养基、摇瓶种子培养基和种子罐培养基逐级扩大培养得到种子罐种子，首先将种子罐种子以8％接种量接种于30L发酵罐，发酵培养基装液量15L,于30-32℃、通气量3-5L/min恒温发酵12-24h,然后以0.3-0.5℃/min的速率降温至18-22℃，向发酵罐中加入10-12g包被壳聚糖和900mL种子罐种子，在通气量3-5L/min条件下恒温发酵10-16h，最后以0.2-0.4℃/min的速率升温至24-26℃，在通气量2-4L/min条件下恒温发酵45-52h即得菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种；所述包被壳聚糖的制备方法包括如下步骤：取壳聚糖加入其质量30-50％的质量百分比浓度为13-15％的α-环状糊精水溶液中，制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率2000W、60-80℃干燥4-6min，用10-20目筛快速整粒即得包被壳聚糖；所述液体种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，琼脂2g/L，中草药提取物0.3-0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.1-0.3g/L，VB10.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述摇瓶种子培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.5-1.0g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.2-0.4g/L，VB10.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述种子罐培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.8-1.2g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.3-0.5g/L，VB10.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述发酵培养基的组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物1.3-1.5g/L，木屑粉0.7-0.9g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，VB10.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述发酵培养基的制备方法为：按照培养基配方准确称量各原料，首先取黄豆饼粉质量4-6倍的水，用乳酸调节pH值为5-6，加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边加入黄豆饼粉，升温至90-95℃，保温，液化10-15min,然后降温至50-60℃，保温，边搅拌边加入40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20-30min，边搅拌边加入剩余水和其它...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建树，
申请(专利权)人：天津中天精科科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12