本发明专利技术属于基因工程技术领域，公开了一种长非编码RNA SNHG15及其在制备诊疗癌症药物中的应用，其中所述癌症包括大肠癌、乳腺癌和肾癌等，在大肠癌、乳腺癌和肾癌病人的肿瘤组织中长非编码RNA SNHG15表达上调，高表达长非编码RNA SNHG15的患者预后较差。在大肠癌细胞系中敲低长非编码RNA SNHG15表达可以抑制细胞的侵袭、迁移和增殖能力。并且敲低长非编码RNA SNHG15可以增加大肠癌细胞系对抗肿瘤药物吉西他滨和顺铂的药物敏感性。
A long non coding RNA SNHG15 and its application in the diagnosis and treatment of cancer drugs
The invention belongs to the field of genetic engineering technology, and discloses a long non-coding RNA SNHG15 and its application in the preparation of cancer drugs, wherein the cancers include colorectal cancer, breast cancer and kidney cancer, etc., and the expression of long non-coding RNA SNHG15 is up-regulated and the expression of long non-coding RNA SNHG15 is high in the tumor tissues of patients with colorectal cancer, breast cancer and kidney cancer. Patients with RNA SNHG15 had poor prognosis. Knocking down the expression of long non-coding RNA SNHG15 in colorectal cancer cell lines can inhibit cell invasion, migration and proliferation. And knocking down long non-coding RNA SNHG15 can increase the sensitivity of colorectal cancer cell lines to antitumor drugs gemcitabine and cisplatin.
【技术实现步骤摘要】
一种长非编码RNASNHG15及其在制备诊疗癌症药物中的应用
本专利技术属于基因工程领域，特别涉及一种长非编码RNASNHG15及其在制备诊疗癌症药物中的应用。
技术介绍
在世界范围内大肠癌是男性和女性中主要发生的恶性肿瘤之一，死亡率在所有肿瘤病人中排名第四。每年有超过120万人被诊断为大肠癌。尽管，内镜技术的应用使得大肠癌患者获得了早期诊断机会，而针对大肠癌新的治疗手段也逐步建立，但人们对大肠癌发生发展背后的具体分子机制的研究还并不完善，有许多问题等待进一步揭示。继蛋白质和小RNA之后，近几年的研究热点长非编码RNA也在大肠癌的发生发展中发挥着重要的调节功能。现今对于长非编码RNA并没有严格统一的定义，通常把转录本长度大于200个碱基，并且不具有编码蛋白质功能的RNA统称为长非编码RNA。近几年对于长非编码RNA研究已经揭示了其参与到生命过程的各个方面，并在其中发挥着作用。相对于编码蛋白质的信使RNA，长非编码RNA有着表达丰度低，表达具有组织特异性等特点。在生物体内，长非编码RNA借助于与其他生物大分子相互作用而发挥功能，这其中包括染色体，蛋白质，RNA等，通过这些相互作用，长非编码RNA可以参与到基因转录和转录后修饰等调节过程中去。例如，长非编码RNAXist可以与多种蛋白质相结合，招募其到X染色体上并介导X染色体的失活过程(Xchromosomeinactivation)。在肿瘤的发生发展过程中，常常伴随着长非编码RNA的表达异常。而其中的一些长非编码RNA在肿瘤的发生发展过程中发挥着肿瘤驱动基因的功能，促进肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移。研究发现，长非编码RNAlncRNA-ATB可以诱导肿瘤细胞发生EMT过程，进一步的机制研究发现lncRNA-ATB可以作为RNA海绵吸附miR-200家族的小RNA进一步上调诱导EMT的转录因子ZEB1和ZEB2表达。然而，在肿瘤EMT过程中还有很多异常表达的长非编码RNA功能并不清楚，有待进一步研究来揭示他们在肿瘤中发挥的功能。鉴于长非编码RNA在大肠癌中的重要性，我们通过对公共数据库中的高通量数据进行挖掘，找到了名为SNHG15的长非编码RNA，该长非编码RNA在病人的大肠癌中高表达并与病人的不良预后相关。长非编码RNASNHG15在多种肿瘤中高表达并与病人的不良预后相关。研究发现长非编码RNASNHG15通过阻止Slug蛋白进行泛素化-蛋白酶体途径的降解从而加强Slug蛋白的稳定性。进而促进大肠癌细胞的增值与转移。这些结果表明，长非编码RNASNHG15是大肠癌的重要致癌因子，可以作为大肠癌病人诊断和预后的分子标记物且成为肿瘤治疗的一个靶点。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种长非编码RNASNHG15及其在制备诊疗癌症药物中的应用。本专利技术通过以下技术方案实现上述目的：一种用于判断包括大肠癌、乳腺癌、肾癌在内的癌症预后情况或作为癌症诊疗靶点的长非编码RNASNHG15，所述长非编码RNA的核苷酸序列如SeqIDNO.1和SeqIDNO.2所示。所述的长非编码RNA在作为筛选判断肿瘤预后情况的诊断试剂中的应用。所述的长非编码RNA在作为筛选诊疗肿瘤的药物中的应用。所述的长非编码RNA通过绑定Slug表观沉默下游靶基因E-cad表达的应用。识别所述长非编码RNA的标记物在制备诊断癌症及判断癌症诊疗预后情况的诊断产品中的应用，所述的标记物包括但不限于：(1)结合所述长非编码RNA的引物/引物组或荧光标记的结合所述长非编码RNA的引物/引物组；(2)结合所述长非编码RNA的小分子化合物；(3)结合所述长非编码RNA的生物大分子，所述的生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能的片段、荧光标记的抗体或抗体功能片段、RNA结合蛋白或其功能片段、荧光标记的RNA结合蛋白或其功能片段。进一步的，所述引物组或荧光标记的引物组的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。一种用于判断肿瘤诊疗预后情况的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包含如上述的标记物。针对所述的长非编码RNA的检测试剂在制备诊断癌症及筛选癌症预后情况的诊断试剂中的应用。抑制所述的长非编码RNA的抑制剂在制备诊断或诊疗肿瘤的药物中的应用，所述抑制剂包括但不限于：(1)抑制所述长非编码RNA的siRNA、shRNA或功能类似的小干扰RNA；(2)抑制所述长非编码RNA的小分子化合物；(2)抑制所述长非编码RNA的生物大分子，所述的生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、高底物专一性的酶或其功能片段。进一步的，所述抑制剂的核苷酸序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。技术方案细胞培养人胚胎肾细胞系(HEK293T)，人大肠癌细胞系(SW480,SW1116,SW620,HCT116),人宫颈癌细胞系(HeLa)以上细胞均购自ATCC，由本室冻存。SW480、SW1116、SW620、HCT116细胞在RPMI1640培养基中培养；HEK293T，HeLa细胞在DMEM培养基中培养。完全培养基中含有10％的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100毫克/毫升的链霉素的，在37℃，5％CO2的培养箱中培养。RNA提取和定量PCR分析根据试剂的使用说明，用Trizol试剂分离总RNA。逆转录反应应用Promega公司操作说明书进行。逆转录试剂盒对lug总RNA进行逆转录，最终体积为20μ1。结果分析：分析引物的特异性及扩增效率，根据溶解曲线判断引物的反应特异性。根据扩增曲线得到Ct值，采用相对量法与内参GAPDH进行目的基因相对表达量的分析。数据分析采用ΔΔCt法。质粒构建人长非编码SNHG15全长cDNA序列合成并插入到pcDNA3.1载体中。长非编码SNHG15的异位过表达是通过pcDNA3.1-SNHG15转染获得的，以一个空的pcDNA载体为对照。48小时后qRT-PCR检测长非编码SNHG15的表达水平。细胞转染(以六孔板为例)(a)提前一天将细胞种植到六孔板中，20～24小时后转染。转染时细胞密度应为60％-80％，且位于对数生长期；(b)用培养液洗涤培养板中的细胞1～2遍，最后每孔留下1ml培养液；(c)配制转染混合溶液：溶液A，将3μgDNA加入200μlOpti-MEM培养基中混匀；溶液B，将6μlPEI加入200μlOpti-MEM培养基中，室温放置5min；(d)将两者混匀，室温放置10min；(e)将混合溶液加到细胞培养皿中，并与培养基混匀后继续培养4～6小时；(f)将培养基换为新鲜的含10％FBS的培养基继续培养至48小时。Transwell实验1.消化细胞与细胞传代步骤一样，最后一遍PBS重悬离心得到细胞，用Adhesionbuffer重悬细胞；Adhesionbuffer配方：CaCl2：1mMMgCl2：1mMMnCl2：0.2mMBSA：0.5％RPMI1640培养基溶解；2.细胞计数：一般将细胞稀释2-10倍后计数，保证每次4个大方格总数为50-200个；3.调整细胞浓度，细胞浓度调整为3×104个/ml；4.细胞迁移实验中在tranwell小室的下室加入含10g/mlcollagen的培养基，上室加入100l细胞(数量为3×103个)；5.细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于判断包括大肠癌、乳腺癌、肾癌在内的癌症预后情况或作为癌症诊疗靶点的长非编码RNA SNHG15，其特征在于，所述长非编码RNA的核苷酸序列如Seq ID NO.1 和Seq ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
2018.03.29 CN 20181027147141.一种用于判断包括大肠癌、乳腺癌、肾癌在内的癌症预后情况或作为癌症诊疗靶点的长非编码RNASNHG15，其特征在于，所述长非编码RNA的核苷酸序列如SeqIDNO.1和SeqIDNO.2所示。2.权利要求1所述的长非编码RNA在作为筛选判断肿瘤预后情况的诊断试剂中的应用。3.权利要求1所述的长非编码RNA在作为筛选诊疗肿瘤的药物中的应用。4.权利要求1所述的长非编码RNA通过绑定Slug表观沉默下游靶基因E-cad表达的应用。5.识别权利要求1所述的长非编码RNA的标记物在制备诊断癌症及判断癌症诊疗预后情况的诊断产品中的应用，其特征在于，所述的标记物包括但不限于：（1）结合所述长非编码RNA的引物/引物组或荧光标记的结合所述长非编码RNA的引物/引物组；（2）结合所述长非编码RNA的小分子化合物；（3）结合所述长非编码RNA的生物大分子，所述的生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能的片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宏权，江浩，战军，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京,11
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