用于荧光检测的方法和组合物技术

本文公开了用于成像和扫描Western或免疫印迹的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于荧光检测的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求2016年2月24日提交的美国临时申请号62/299,436的权益，该申请以其全文纳入本文用于所有目的。
技术介绍
Western或斑点印迹通常用作分析技术以检测各种蛋白质。荧光检测是大多数Western和斑点印迹试验中的一种选择方法，用于可视化和定量蛋白质。然而，通常用于试验的硝基纤维素、聚偏二氟乙烯(PVDF)或其它膜会使得入射光发生散射，使得蛋白质难以定量。因此，本领域需要提供新型的方法和组合物以解决该光散射的问题。
技术实现思路
大致来说，本文提供了用于检测和/或定量硝基纤维、PVDF或在Westen印迹或其它分析技术中所用的其它合适的膜的荧光信号。本专利技术人已发现糖和表面活性剂的水性混合物提供了具有以下特性的溶液：其降低了标准捕获膜(例如PVDF，硝基纤维素)的背景信号、且增加了荧光检测试剂的信号。该溶液(也可包括缓冲液)可用作例如Western印迹检测工作流程的最终膜孵育溶液，以改进靶蛋白的检测。一种提供的组合物包含70％重量/体积(w/v)或更多的糖、和两性离子表面活性剂。所述糖和两性离子表面活性剂溶解于水或水性缓冲液。在一些实施方式中，组合物的两性离子表面活性剂是氨基硫代甜菜碱。在一些实施方式中，氨基硫代甜菜碱是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)铵基)丙烷-1-磺酸盐(ASB-C80)。在一些实施方式中，两性离子表面活性剂浓度在约0.01％至约0.2％体积/体积(v/v)的范围内。在一些实施方式中，组合物中的糖选自下组：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、右旋糖、纤维二糖和半乳糖。在一些实施方式中，组合物中的糖浓度在约70％至约90％w/v的范围内。在一些实施方式中，所述组合物还包括浸没在水或水性缓冲液中的膜，其中所述膜配置用于在分析物检测试验中使用。在一些实施方式中，组合物的膜包括硝基纤维素或PVDF。在一些实施方式中，分析物检测试验是Western印迹。还提供了一种在分析物检测试验中使得膜成像的方法，所述方法包括：将膜浸没在溶液中。所述膜构造为用于在分析物检测试验中使用。所述溶液包含糖和两性离子表面活性剂，其中，糖和两性离子表面活性剂溶解于水或水性缓冲液。所述方法还包括：使得膜成像。在一些实施方式中，所述方法的膜包括硝基纤维素或PVDF。在一些实施方式中，分析物检测试验是Western印迹。在一些实施方式中，所述方法的两性离子表面活性剂是氨基硫代甜菜碱。在一些实施方式中，所述方法的氨基硫代甜菜碱是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)铵基)丙烷-1-磺酸盐(ASB-C80)。在一些实施方式中，所述方法中的两性离子表面活性剂浓度在约0.01％至约0.2％v/v的范围内。在一些实施方式中，所述方法中的糖选自下组：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、右旋糖、纤维二糖和半乳糖。在一些实施方式中，所述方法中的糖浓度在约70％至约90％w/v的范围内。还提供了用于检测分析物的试剂盒，所述试剂盒包含糖、两性离子表面活性剂、以及缓冲液。在一些实施方式中，所述试剂盒的两性离子表面活性剂是氨基硫代甜菜碱。在一些实施方式中，所述试剂盒的氨基硫代甜菜碱是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)铵基)丙烷-1-磺酸盐(ASB-C80)。在一些实施方式中，所述试剂盒中的糖选自下组：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、右旋糖、纤维二糖和半乳糖。在一些实施方式中，所述试剂盒还包含结合剂。附图说明图1是浸没在85％w/v糖溶液或水中的聚偏二氟乙烯(PVDF)膜的照片。图2是显示糖和表面活性剂对Westen印迹发射猝灭的影响的图。图3是显示表面活性剂对Westen印迹发射强度的影响的图。图4呈现出显示糖和表面活性剂在不同蛋白质浓度下对Westen印迹发射强度的影响的图。图5呈现出膜的照片，其显示出浸没在糖/表面活性剂溶液中时分析物分辨率提高。图6呈现出照片和图，其显示出浸没在糖/表面活性剂溶液中时分析物分辨率和发射强度提高。图7是显示不同表面活性剂对Westen印迹发射猝灭的影响的图。图8是显示表面活性剂浓度对Westen印迹发射猝灭的影响的图。定义除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常所理解的同样含义。参见例如Lackie，《细胞和分子生物学词典(DictionaryofCellandMolecularBiology)》，埃尔斯威尔出版社(Elsevier)(第4版，2007)；以及Sambrook等人，《分子克隆，实验室手册(MolecularCloning:ALaboratoryManual)》，冷泉港实验室出版社(冷泉港，纽约1989和后续版本)。术语“一个”或“一种”意在表示“一个(种)或多个(种)”。当术语“包含”及其各种变体例如“包括”和“含有”位于叙述步骤或要素之前的时候，是用来表示添加其它的步骤或要素是任选的，并且是非排它性的。本专利技术的实践中可以使用与本文所述类似或等价的方法、装置和材料。提供以下定义是用来帮助理解本文经常用到的某些术语，不对本专利技术的范围构成限制。本文所用的缩写具有其在化学和生物领域内的常规涵义。如本文中所用，术语"糖"是指单糖、二糖、低聚糖或多糖。单糖包括但不限于葡萄糖、核糖、果糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、和半乳糖。二糖包括但不限于：蔗糖、乳糖、纤维二糖和麦芽糖。多糖包括但不限于：纤维素、半纤维素、和木质纤维素或淀粉。其它糖均可用于本专利技术。本文所使用术语“表面活性剂”是指用于降低液体之间或液体和固体之间表面张力的表面活性试剂(surfaceactiveagent)。表面活性剂可用作清洁剂、润湿剂、乳化剂、泡沫剂或分散剂。本文所用术语“两性离子表面活性剂”是指不具有净电荷的两亲性表面活性剂分子，其包含疏水性基团和一个或多个亲水性基团、以及相反形式电荷的两个部分。本文所使用术语“缓冲液”是指任意无机或有机的酸或碱，其抵抗pH的变化并使得其所加入的溶液的pH值保持在所需点附近。本文所用术语“膜”是指聚合物材料片，其用于使得可通过适当的化学方法检测的分析物暴露于其表面上。分析物可以通过从电泳凝胶电印迹转移到膜上。本文所用术语“分析物”、“抗原”和“靶”是指任何相关分子、化合物或复合物，确定其的存在、量、表达水平、活化状态和/或种类。可以通过结合剂的特异性识别来进行确定。相关分子、化合物或复合物可以是大分子，例如，例如，多肽或蛋白质、多糖、毒素、细胞壁、细胞被囊、病毒被囊、病毒包衣、鞭毛、纤毛或菌毛、微生物、与蛋白质或多糖复合的核酸、脂质、与蛋白质或多糖复合的脂质、多核苷酸、多肽、碳水化合物、化学部分、或它们的组合(例如，磷酸化或糖基化的多肽等)。本领域技术人员会理解该术语并不表示该分析物在各种情况中是免疫原性的，但仅仅表示其可被结合剂或抗体靶向。本文所用术语“结合剂”指特异性结合抗原或分析物的分子。示例性结合剂包括但不限于抗体、抗体片段、非抗体蛋白支架、抗体模拟物、适体、Affimer、猝体(quenchbody)、酶标记的抗体或分析物特异性抗体对。本文所使用的关于结合剂和靶的术语“结合”是指结合剂与纯群体中的大多数靶连接(假定结合剂与靶的合适摩尔比)。例如，结合给定靶的结合剂将结合溶液中至少2/3的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其包含：70％w/v或更多的糖；以及两性离子表面活性剂，其中，所述糖和两性离子表面活性剂溶解于水或水性缓冲液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.24 US 62/299,4361.一种组合物，其包含：70％w/v或更多的糖；以及两性离子表面活性剂，其中，所述糖和两性离子表面活性剂溶解于水或水性缓冲液。2.如权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含：配置用于分析物检测试验的膜，其中，所述膜被浸没在水或水性缓冲液中。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述膜包含硝基纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF)。4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述两性离子表面活性剂是氨基硫代甜菜碱。5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述氨基硫代甜菜碱是3-(二甲基(3-(4-辛基苯甲酰胺基)丙基)铵基)丙烷-1-磺酸盐(ASB-C80)。6.如权利要求1-5中任一项所述的组合物，其特征在于，所述糖选自下组：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、右旋糖、纤维二糖和半乳糖。7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其特征在于，糖浓度在约70％至约90％w/v的范围内。8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其特征在于，两性离子表面活性剂浓度在约0.01％至约0.2％v/v的范围内。9.一种在分析物检测试验中使得膜成像的方法，所述方法包括：将膜浸没在溶液中，其中，所述膜构造为用于分析物检测试验，其中所述溶液包含糖和两性离子表面活性剂，并且其中所述糖和两性离子表面活性剂溶解在水或水性缓冲液中；...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·T·麦基，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US