一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法，将百里酚类药物原料溶解提取并高速离心分离后得到上清液，通过三重串联四级杆高效液相色谱‑质谱联用仪分析，从而检测出百里酚类药物原料中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的含量。通过本发明专利技术的检测方法，硫酸二异丙酯的回收率在90％～110％之间，标准偏差(RSD)为2.33％，检出限为1.74μg/kg，定量限为5.81μg/kg，说明方法检出限低、回收率高、灵敏度高、重复性好，可用于包括难气化药物在内的药物原料中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法
本专利技术属于分析测试领域，特别涉及一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法。
技术介绍
目前针对药物原料中硫酸二异丙酯杂质含量的分析方法比较少，而且药物原料本身基质复杂，沸点高，尤其是一些难汽化的药物，现有技术中的气相色谱法或者气质联用法对于难气化的药物原料并不适用，因为难气化的药物原料会滞留在进样口、污染离子源，甚至堵塞分流管口而导致损坏仪器；其次现有技术报道的气相色谱法检出限较高。百里酚的化学名称是2-异丙基-5-甲基苯酚，又名麝香草酚、百里香酚、麝香草脑。常温下，百里酚呈无色半透明结晶状，具有特殊的香味。百里酚是我国允许添加的食用型香精，主要用于配制止咳糖浆、椒样薄荷、胶姆糖、柑橘等型香精。百里酚具有很强的杀菌作用，常用于口腔、咽喉的消毒杀菌，百里酚的杀菌效果比苯酚强，并且低毒，能促进气管纤毛运动，有利于气管粘液的分泌，具有祛痰的功效，对皮肤癣菌病、放射菌病及耳炎都具有一定的灭杀作用，因此可用于治疗气管炎、百日咳等疾病。除此之外，百里酚还能用作除螨剂、驱蛔虫剂、指示剂、防腐剂等。百里酚的一种常用合成法是以间甲酚和异丙醇为原料，浓硫酸为催化剂，经过傅氏烷基化反应制得。然而浓硫酸和异丙醇易发生化学反应生成硫酸二异丙酯。硫酸二异丙酯因其结构中具有硫酸酯结构单元，具有潜在的基因毒性，在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中硫酸二异丙酯被列为2B类致癌物。药物原料基质复杂，特别是沸点高难以气化的性质进一步加大了药物杂质含量测定的难度，因此需要建立一种高效灵敏，回收率高，检出限低的处理和分析方法，用于定性定量的检测难气化药物原料(如百里酚)中痕量硫酸二异丙酯的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法。所述的检测方法采用溶剂萃取和三重串联四级杆液质联用仪(LC-MS/MS)定性定量测定药物原料中硫酸二异丙酯含量，实现了药物中硫酸二异丙酯的快速、高灵敏度、低成本检测，而本专利技术的检测方法同样适用于难气化药物原料(如百里酚类药物)，高效灵敏，回收率高，检出限低。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种药物中硫酸二异丙酯的检测方法，包括如下步骤：(1)提取在药物样品中加入甲醇提取，高速离心后取上清液，过微孔滤膜，得到待测样品溶液；(2)标准工作溶液的配制精密称取硫酸二异丙酯标准品，配制得到硫酸二异丙酯标准储备液和标准对照品溶液，然后配制得到梯度浓度的标准工作溶液；(3)高效液相色谱-质谱联用仪检测(LC-MS/MS)分析通过高效液相色谱-串联质谱联用仪测定步骤(2)中各梯度浓度的标准工作溶液，以目标化合物定量离子对峰面积(Y)及硫酸二异丙酯工作溶液浓度(x)建立标准工作曲线；在相同条件下测定步骤(1)得到的待测样品溶液，通过标准工作曲线计算待测样品溶液硫酸二异丙酯的浓度，从而计算得到药物样品中硫酸二异丙酯的含量。所述的药物优选为难气化的药物，进一步优选为百里酚。步骤(1)中所述的提取的具体操作为：加入甲醇后涡旋振荡。步骤(1)中所述的药物样品的质量优选为0.1g±0.01g；加入甲醇时的定容体积优选为1mL。步骤(1)中所述的高速离心的转速优选为5000r/min～8000r/min；离心的提取时间优选为10min。步骤(1)中所述的甲醇优选为色谱级甲醇。步骤(1)中所述的微孔滤膜优选为有机相微孔滤膜，孔径为0.45μm。步骤(2)中所述的配制的溶剂优选为甲醇。步骤(2)中所述的标准工作溶液浓度范围优选为0.01μg/mL～1μg/mL。步骤(3)中所述的高效液相色谱-质谱联用仪优选为三重串联四级杆液质联用仪，其扫描模式优选为多反应检测模式(MRM)，选择特定的一对母离子和子离子作为定量离子，同时选定一对或多对特定的母离子和子离子作为定性离子，有效的降低基质干扰，提供定性定量的灵敏度和准确性。所述的母离子优选为断裂了异丙基之后的加合离子。步骤(3)的液相色谱条件为：高效液相色谱柱为inertsilODS-33μm2.1×100mm；样品进样量为5μL，柱温为35℃±5℃，流速为0.3mL/min±0.05mL/min；流动相为体积比为0.1％的甲酸水溶液(A相)和甲醇(B相)，梯度洗脱程序优选如表1所示：表1流动相梯度洗脱表时间/minA相/％B相/％0505053070629813298145050175050所述的流速优选为0.3mL/min。步骤(3)的质谱条件优选为：a)离子源：ESI-；b)检测方式：多反应监测MRM模式；c)离子源电压：使用调谐文件；d)接口温度：300℃；e)雾化气流量：3L/min；f)加热气流量：10L/min；g)干燥气流量：10L/min。在上述质谱条件下，目标物质磺酸二异丙酯的质谱参数如表2所示。表2目标物质的质谱参数步骤(3)中所述的建立标准工作曲线的具体操作优选为：分别取步骤(2)中各梯度浓度的标准工作溶液5μL进行LC-MS/MS分析，以目标化合物定量离子对峰面积(Y)及硫酸二异丙酯工作溶液浓度(x)绘制线性回归曲线，得到线性回归方程和相关系数分别为：Y＝1.28569×107x-60805.8。步骤(3)中所述的标准工作曲线包括5～7个梯度浓度。标准曲线浓度梯度点优选为0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL。本专利技术利用一步溶剂萃取技术，建立了一种高效高回收率的提取方法，然后通过三重串联四级杆液质联用仪(LC-MS/MS)进行定性定量检测，可有效地对药物原料，甚至是难气化药物原料(如百里酚类)中杂质硫酸二异丙酯进行分析检测，本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)由于药物的基质复杂，尤其是难气化药物原料(如百里酚类)沸点高，难汽化，故不适合使用气相色谱、气相色谱质谱联用仪进行分析检测。而且硫酸二异丙酯本身无紫外吸收，因此也不适合用液相色谱进行定性定量分析。三重四级杆液相色谱串联质谱仪可以有效的消除复杂药物原料复杂基质的干扰，有效的提高硫酸二异丙酯的灵敏性和准确性；目标物的检出限可达到ppb级别。(2)本专利技术采用的高效液相串联质谱法，选择的模式为负模式，母离子选择的是碎裂了一端异丙基之后加合离子，通过这种碎裂方式形成的母离子更稳定，在仪器中的响应也更高，增加了检测方法的稳定性并且提高了检测方法的灵敏度。(3)本专利技术采用一步溶剂萃取技术，使用溶剂量少，无需浓缩，大大的提高了目标化合的回收率和前处理速率。同时应用液质方法进行分析检测，减少了药物本身复杂的基质干扰。本专利技术所使用的梯度洗脱程序能进一步有效地把目标化合物完全洗脱出来，同时在6～13min时间段有机相比例增加到98％，这能有效的洗脱出色谱柱残留的药物原料，避免了对下一个样品的污染。(4)目前我国对药物原料中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的分析检测方法很少，本专利技术从前处理技术到仪器分析方面提供了一种快速、高效、准确的药物原料中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的定性定量技术。硫酸二异丙酯的加标回收率在90％～110％之间，检出限为1.74μg/kg，定量限为5.81μg/kg。附图说明图1是空白溶剂的特征离子流图。图2是硫酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取在药物样品中加入甲醇提取，高速离心后取上清液，过微孔滤膜，得到待测样品溶液；(2)标准工作溶液的配制精密称取硫酸二异丙酯标准品，配制得到硫酸二异丙酯标准储备液和标准对照品溶液，然后配制得到梯度浓度的标准工作溶液；(3)高效液相色谱‑质谱联用仪检测分析通过高效液相色谱‑串联质谱联用仪测定步骤(2)中各梯度浓度的标准工作溶液，以目标化合物定量离子对峰面积Y及硫酸二异丙酯工作溶液浓度x建立标准工作曲线；在相同条件下测定步骤(1)得到的待测样品溶液，通过标准工作曲线计算待测样品溶液硫酸二异丙酯的浓度，从而计算得到药物样品中硫酸二异丙酯的含量。

【技术特征摘要】
1.一种药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取在药物样品中加入甲醇提取，高速离心后取上清液，过微孔滤膜，得到待测样品溶液；(2)标准工作溶液的配制精密称取硫酸二异丙酯标准品，配制得到硫酸二异丙酯标准储备液和标准对照品溶液，然后配制得到梯度浓度的标准工作溶液；(3)高效液相色谱-质谱联用仪检测分析通过高效液相色谱-串联质谱联用仪测定步骤(2)中各梯度浓度的标准工作溶液，以目标化合物定量离子对峰面积Y及硫酸二异丙酯工作溶液浓度x建立标准工作曲线；在相同条件下测定步骤(1)得到的待测样品溶液，通过标准工作曲线计算待测样品溶液硫酸二异丙酯的浓度，从而计算得到药物样品中硫酸二异丙酯的含量。2.根据权利要求1所述的药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于：所述的药物为难气化的药物。3.根据权利要求1所述的药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于：所述的药物为百里酚。4.根据权利要求1所述的难气化的药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于：步骤(3)中所述的高效液相色谱-质谱联用仪为三重串联四级杆液质联用仪，其扫描模式为多反应检测模式，选择特定的一对母离子和子离子作为定量离子，同时选定一对或多对特定的母离子和子离子作为定性离子。5.根据权利要求4所述的难气化的药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于：所述的母离子为断裂了异丙基之后的加合离子。6.根据权利要求1所述的难气化的药物中硫酸二异丙酯的检测方法，其特征在于，步骤(3)的...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾瑜，刘瑞，赖华杰，陈晓丹，马倩，靳焘，
申请(专利权)人：中科广化重庆新材料研究院有限公司，广州中科检测技术服务有限公司，中科院广州化学有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50