一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法技术

本发明专利技术公开了一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法，包括如下步骤：S1染色液配制：首先将Hoechst33258荧光染料和蔗糖溶于磷酸盐缓冲液PBS，配成Hoechst33258浓度20‑40μg/L、蔗糖浓度8‑10wt％的溶液一，然后配制含乙醇60‑70％(v/v)、乙酯乙酸10％(v/v)、甘油30‑20％(v/v)的溶液二，将溶液一和溶液二按体积比1:1混合摇匀得到染色液，并低温避光保存；S2染色：取步骤S1中制得的染色液于载玻片上，然后从花序上摘取需要染色观察的开放花朵或花蕾，用镊子摘取花药直接放入载玻片上的染色液中，轻轻捏挤花药，散出花粉，取出杂物，涂抹使花粉与染色液混合均匀，然后盖上盖玻片。本发明专利技术可以解决目前花粉荧光染色法所存在的繁琐、费时及耗工的问题，同时提高荧光染色法的稳定性和重现性。

【技术实现步骤摘要】
一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法
本专利技术涉及一种花粉荧光染色方法，具体涉及一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法。
技术介绍
植物花粉壁是一层主要由孢粉素和纤维素组成的特殊细胞壁，由外壁和内壁两层组成。其中，外壁又分为内外两层，外壁外层呈蜂窝状或网状，外壁内层则为平坦结构，外壁的主要成分是孢粉素类物质。而内壁结构相对简单，主要含有纤维素、果胶和蛋白质等。由于植物花粉壁在结构上比一般的植物细胞壁复杂，且紧密厚实，尤其是成熟花粉粒，其通透性及光透性极差，因此多数植物花粉染色后不结合透明技术在显微镜下难于观察到清晰细胞核。目前，植物花粉染色常用的方法有醋酸洋红染色法、苯酚品红法、铁矾苏木精染色法及荧光染色法等，一般采用“固定(卡诺氏固定液)→洗涤→染色→脱色→镜检”的操作步骤，但对于绝大多数的植物成熟花粉，还需要经过乙醇分级脱水和冬青油透明后才能观察，其操作步骤繁琐、耗时，完成整个操作过程需要数个小时以上，甚至长达2-3天。从染色剂的特异性看，醋酸洋红染色法、苯酚品红法和铁矾苏木精染色法所使用的染色剂与荧光染色所使用的荧光染料(如Hoechst33258、DAPI等)相比，其特异本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：S1染色液配制：首先将Hoechst33258荧光染料和蔗糖溶于磷酸盐缓冲液PBS，配成Hoechst33258浓度20‑40μg/L、蔗糖浓度8‑10wt％的溶液一，然后配制体积百分比含乙醇60‑70％、乙酯乙酸10％、甘油30‑20％的溶液二，将溶液一和溶液二按体积比1:1混合摇匀得到染色液，并低温避光保存；S2染色：取步骤S1中制得的染色液于载玻片上，然后从花序上摘取需要染色观察的开放花朵或花蕾，摘取花药直接放入载玻片上的染色液中，轻轻捏挤花药，散出花粉，取出杂物，涂抹使花粉与染色液混合均匀，然后盖上盖玻片。

【技术特征摘要】
1.一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：S1染色液配制：首先将Hoechst33258荧光染料和蔗糖溶于磷酸盐缓冲液PBS，配成Hoechst33258浓度20-40μg/L、蔗糖浓度8-10wt％的溶液一，然后配制体积百分比含乙醇60-70％、乙酯乙酸10％、甘油30-20％的溶液二，将溶液一和溶液二按体积比1:1混合摇匀得到染色液，并低温避光保存；S2染色：取步骤S1中制得的染色液于载玻片上，然后从花序上摘取需要染色观察的开放花朵或花蕾，摘取花药直接放入载玻片上的染色液中，轻轻捏挤花药，散出花粉，取出杂物，涂抹使花粉与染色液混合均匀，然后盖上...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智军，曾晶，谭铭许，谢景，
申请(专利权)人：广东金作农业科技有限公司，广东省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44