引物对、试剂和试剂盒及其应用和鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种引物对、试剂和试剂盒及其应用和鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法。本发明专利技术提供的鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对具有如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列，可以同时扩增出紫花苜蓿和花生的DNA片段，并且紫花苜蓿和花生的扩增产物长度不同。该引物对可以通过一次扩增待测样品，即可分辨出待测样品中是否含有紫花苜蓿和/或花生。该引物对可以应用于鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生，具有灵敏度高，检测便捷等优点，缓解了现有技术中缺乏一种简便、快速、高效鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的检测方法。

Primer pairs, reagents and kits and their application and identification of alfalfa products containing peanuts

The invention relates to the field of biotechnology, in particular to a primer pair, reagent and reagent kit, and a method for application and identification of peanuts in alfalfa products. The primer pairs for identifying alfalfa and/or peanut provided by the present invention have sequences as shown in SEQ ID NO.1 and SEQ ID NO.2 in the sequence table, and can simultaneously amplify DNA fragments of alfalfa and peanut, and the amplified products of alfalfa and peanut have different lengths. This pair of primers can be used to determine whether alfalfa and / or peanut are contained in the samples by one-step amplification. The primers have the advantages of high sensitivity and convenience for the identification of peanuts in alfalfa products, which alleviates the lack of a simple, rapid and efficient method for the identification of peanuts in alfalfa products.

【技术实现步骤摘要】
引物对、试剂和试剂盒及其应用和鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种引物对、试剂和试剂盒及其应用和鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法。
技术介绍
紫花苜蓿具有优质、高产、饲用价值高(粗蛋白含量21％)、适口性好、用途广泛等特点，被世界誉为“牧草之王”。牧草颗粒化后，密度比原样增加5倍以上，具有体积减少，方便贮存和运输的优点。紫花苜蓿草颗粒因其体积小、饲喂便捷、营养价值较高，耐贮藏的特点，深受养殖户的青睐，是紫花苜蓿作为饲料来使用的重要方式。欧美国家使用的牛饲料约50％以上是草颗粒，饲喂苜蓿颗粒可显著提高奶牛的产奶量和牛奶的品质，粗饲料颗粒化也是我国饲料工业的发展方向。紫花苜蓿草颗粒是饲料贸易中的重要角色。花生是世界上重要的油料作物之一，我国花生种植面积占世界种植面积的20％，花生产量占全世界总产量的40％以上，2002年以来总产量一直位居世界首位。虽然花生具有这么多的优点，但花生秸秆利用价值却不大。如果有人把花生的秸秆打碎后添加进紫花苜蓿草颗粒中，会使草颗粒的品质产生下降，从而使消费者的权益受到伤害。当紫花苜蓿打成草粉用来制作草颗粒时，通过肉眼无法分辨其中是否混有花生秸秆，如果使用者购买了大量的含有花生秸秆的紫花苜蓿草颗粒将会对消费者的权益受到巨大的损害，而现在国内外还没有一个统一的、行之有效的鉴定方法。准确迅速鉴定紫花苜蓿草颗粒中是否含有其他作物秸秆是苜蓿草颗粒质量检验中的一大难题。因此，提供一种高效、快速、简便鉴定紫花苜蓿草颗粒中是否含有花生秸秆的方法是目前市场迫切需要的。有鉴于此，特提出本专利技术。专利
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，以缓解现有技术中没有可以高效快速检测样本中是否含有紫花苜蓿和/或花生的技术问题。本专利技术的第二目的在于提供上述引物对在制备用于鉴定紫花苜蓿和/或花生的产品中的应用。本专利技术的第三目的在于提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂，本专利技术的第四目的在于提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂盒，以缓解现有技术中缺乏可以同时检测样本中是否含有紫花苜蓿和/或花生的产品。本专利技术的第五目的在于提供上述引物对或试剂或试剂盒在鉴定紫花苜蓿产品是否含有花生中的应用。本专利技术的第六目的在于提供一种鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法，以缓解现有技术中缺乏一种高效、快速、简便鉴定紫花苜蓿草颗粒中是否含有花生的方法。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：本专利技术提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，所述引物对包含引物MH2-F和引物MH2-R；所述引物MH2-F具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，所述引物MH2-R具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。进一步地，所述引物对经过修饰；优选地，所述修饰包括在引物对添加标记物；优选地，所述标记物包括荧光标记、生物素标记或地高辛标记。本专利技术提供上述引物对在制备用于鉴定紫花苜蓿和/或花生的产品中的应用；所述产品包括试剂或试剂盒。本专利技术提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂，包括上述引物对。本专利技术提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂盒，包括上述引物对或试剂。进一步地，所述试剂盒还包括Mg2+、dNTP，DNA聚合酶和PCRBuffer。本专利技术提供上述引物对或试剂或试剂盒在鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生中的应用。本专利技术最后提供一种鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法，包括以下步骤：以上述引物对为引物，对紫花苜蓿产品的DNA进行PCR扩增，根据扩增产物中是否含有花生的DNA片段鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生。进一步地，所述紫花苜蓿产品为紫花苜蓿草颗粒。进一步地，所述鉴定的方法包括凝胶电泳或测序。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，可以同时扩增出紫花苜蓿和花生的DNA片段，并且紫花苜蓿和花生的扩增产物长度不同。该引物对可以通过一次扩增待测样品，即可分辨出待测样品中是否含有紫花苜蓿和/或花生，避免了分开扩增时由于扩增效率的差异或者人员操作的误差导致的假阳性或假阴性。本专利技术提供的鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂和试剂盒，包括上述引物对。该试剂或试剂盒可提高实验的效率，配合其他分子生物学实验中常用试剂具有广泛的用途。本专利技术提供的鉴定紫花苜蓿产品中是否含有花生的方法，可以在基因组水平上有效的检测出紫花苜蓿产品中混有质量分数为1％的花生。此方法具有灵敏性强、准确率高、重复性强和快速便捷等优点，能够进行大批量紫花苜蓿产品的检测，为紫花苜蓿产品的纯度检测提供可行依据。该方法可以快速、高效和准确的检测紫花苜蓿产品中是否混有花生，省时省力，操作简便，在较短时间内能够很好的完成。该方法使紫花苜蓿产品更好的为畜牧业生产服务，为保障饲料安全打下坚实的基础。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例4中PCR扩增电泳结果图；图2为本专利技术实施例4中PCR扩增电泳结果图；图3为本专利技术实施例4中PCR扩增电泳结果图；图4为本专利技术实施例6中引物对灵敏性电泳验证结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。本专利技术提供一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，所述引物对包含引物MH2-F和引物MH2-R；所述引物MH2-F具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，所述引物MH2-R具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。引物MH2-F和引物MH2-R可以同时扩增出紫花苜蓿和花生的DNA片段，并且紫花苜蓿和花生的扩增产物长度不同。该引物对可以通过一次扩增待测样品，即可分辨出待测样品中是否含有紫花苜蓿和/或花生，避免了分开扩增时由于扩增效率的差异或者人员操作的误差导致的假阳性或假阴性。需要说明的是，当待检测样品中只有紫花苜蓿时，使用上述引物对可以特异性扩增出长度为210bp的紫花苜蓿DNA片段；当待检测样品中只有花生时，使用上述引物对可以特异性扩增出长度为188bp的花生DNA片段；当待检测样品中同时含有紫花苜蓿和花生时，使用上述引物对可以同时扩增出长度为188bp的花生DNA片段和长度为210bp的紫花苜蓿DNA片段。因此，上述引物对可鉴定出待检测样品是否含有紫花苜蓿和/或花生。在本专利技术的引物对的扩增产物中，紫花苜蓿DNA片段具有如SEQIDNO.3所示序列，其互补序列如SEQIDNO.4所示；花生DNA片段具有如SEQIDNO.5所示序列，其互补序列如SEQIDNO.6所示。在本专利技术一个优选地实施方式中，引物对经过修饰。所述修饰例如可以为但不限于为磷酸化、生物素标记、地高辛标记、荧光基团标记、硫代修饰、脱氧尿嘧啶修饰或脱氧次黄嘌呤修饰。可以理解的是只要符合分子生物学实验的常规实验原理，本专利技术不限制引物的修饰方式。本专利技术提供上述引物对在制备用于鉴定紫花苜蓿和/或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，其特征在于，所述引物对包含引物MH2‑F和引物MH2‑R；所述引物MH2‑F具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述引物MH2‑R具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的引物对，其特征在于，所述引物对包含引物MH2-F和引物MH2-R；所述引物MH2-F具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，所述引物MH2-R具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述引物对经过修饰；优选地，所述修饰包括在引物对添加标记物；优选地，所述标记物包括荧光标记、生物素标记或地高辛标记。3.如权利要求1或2所述的引物对在制备用于鉴定紫花苜蓿和/或花生的产品中的应用；所述产品包括试剂或试剂盒。4.一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物对。5.一种鉴定紫花苜蓿和/或花生的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫龙凤，申书恒，刘志鹏，陈小平，王彦荣，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62