时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条和试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种快速、便捷、经济的时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条和试剂盒，所述试纸条包括PVC底板、全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸；所述试剂盒包括上述时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条、样本缓冲液和含有AMH标准曲线的ID卡。本实用新型专利技术技术方案能够满足单人份、小批量检测AMH的要求，其具有灵敏度高、特异性高、用血量少、检测时间短、操作简便、检测结果准确可靠的优点。

Time resolved fluorescence immunochromatographic assay for detection of AMH in test strips and kits

The utility model relates to a fast, convenient and economical time-resolved fluorescence immunochromatography test strip and a reagent kit for detecting AMH. The test strip comprises a PVC substrate, a whole blood filter pad, an antibody bearing membrane and a water absorbing paper; the reagent kit comprises the time-resolved fluorescence immunochromatography test strip for detecting AMH, a sample buffer. Liquid and ID card containing AMH standard curve. The technical scheme of the utility model can meet the requirements of single person and small batch AMH detection, and has the advantages of high sensitivity, high specificity, less blood consumption, short detection time, simple operation, accurate and reliable detection results.

【技术实现步骤摘要】
时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条和试剂盒
本技术涉及激素检测
，具体涉及一种时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条和试剂盒。
技术介绍
抗缪勒管激素(Anti-Müllerianhormone，AMH)，也被称为缪勒管抑制激素(Müllerian-inhibitinghormoneMIH)，是一种结构上与转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员抑制素和激活素相关的糖蛋白激素，其主要作用是调控生长分化和卵泡生成。在男性胚胎中，AMH由男性胎儿的睾丸Sertoli细胞SOX9基因激活，其表达抑制女性生殖道或缪勒管(副中肾管)的发展，从而抑制输卵管、子宫和阴道的产生。AMH的表达在胚胎发育的特定时期对性别分化至关重要。在女性中，AMH由窦前颗粒细胞和小窦状卵泡分泌，直至绝经期逐渐停止。AMH通过抑制卵泡的募集和优势卵泡选择来调节卵泡生长。卵巢内的小窦卵泡数量越多，AMH的浓度便越高；反之，当卵泡随着年龄及各种因素逐渐消耗，AMH浓度也会随之降低。因此AMH可作为预测卵巢储备功能的分子标志物。随着AMH的作用被越来越多的人所认识，AMH在妇科内分泌疾病、生殖医学、性别异常等领域的应用越来越受到关注。具体而言，AMH有以下用途：评价大体生育能力方面，比较个人的AMH水平与同年龄段的平均水平在评价生育能力方面是有帮助的。它提供了一个确定女性卵巢储备的指南，能够识别可能需要考虑卵子冷冻或尽快尝试怀孕的女性，而不是等以后她们的长期生育能力变差的时候再考虑尝试生育。体外受精方面，AMH是预测体外受精(IVF)中卵巢低反应的有利工具。此外，AMH水平还能用于评价一位女性的剩余卵子供应量。根据NICE体外受精指南，AMH≤5.4pmol/l(0.8ng/mL)预示着卵巢过度刺激低反应，而AMH≥25pmol/l(3.6ng/mL)预示高反应。其次，AMH水平越高，IVF后出生几率越大。因此，AMH可用于合理化制定排卵诱导方案，决定辅助生殖技术中转移胚胎的数量，以最大限度地提高妊娠成功率，同时尽量减少卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生的风险。AMH预测对于OHSS过度反应的敏感性和特异性分别为82％和76％。但AMH水平应结合经阴道卵巢扫描结果综合评估卵泡数量和卵巢体积。女性肿瘤方面：放疗和化疗会损伤卵巢储备。在这种情况下，治疗前AMH检测能够预测长期化疗后卵巢功能丧失程度，决定是否采取生育能力保存策略，如卵母细胞的冷冻保存。而治疗后AMH检测往往预示着生育能力下降。颗粒细胞瘤卵巢分泌AMH，AMH测试在诊断这些肿瘤方面的灵敏度在76和93％之间。多囊卵巢综合征(PCOS)是一种最常见于育龄期妇女的内分泌疾病，其特点是寡或无排卵、雄激素增多，多囊卵巢。这类患者的AMH高出正常值的二到三倍。越来越多的人认为，AMH是一种诊断或提示PCOS的工具或生物标志物。AMH是一个崭新的检测指标，相较于现有的性激素检测项目，它具有以下优点：AMH水平不受月经周期内与周期之间的变化影响；AMH可在月经周期内的任何时间抽血检查；AMH不受激素避孕药的影响，便于临床使用；AMH可更早、更准确地反映年龄相关卵巢储备功能的下降。目前用于检测AMH的方法主要有酶联免疫分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)、电化学发光法(electro-chemiluminescenceimmunoassay,ECLI)、化学发光法(chemiluminescentimmunoassay,CLI)等，但这些方法都存在以下缺陷：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此这些方法都不适合AMH的临床快速诊断。目前常用于快速诊断的试纸条多基于胶体金或荧光素标记的方法。胶体金法在定量和灵敏度上存在弊端。荧光素标记灵敏度为10-10mol/L；背景信号强，有非特异荧光，特异性低；荧光素标记对光不稳定，容易发生光漂白现象，发光效率低，使分析结果可靠性和重复性降低；背景信号强，吸收光谱较窄，发射光谱较宽，Strokes位移小，容易发生光谱的交叠，影响结果准确度。时间分辨荧光免疫层析法(time-resolvedfluorescenceImmunoassay，TRFIA)用镧系元素(三价稀土离子及其螯合物)作为示踪物，标记抗原或抗体，免疫反应发生时，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物的荧光强度，再根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。TRFIA的灵敏度高达10-18mol/L；特异性强，通过时间延迟，将特异性荧光与非特异性荧光分辨开来，使理论本底达到0；荧光寿命极长，极长的荧光衰退时间，发光效率高，非常稳定；发射光谱带较窄，激发光谱带较宽，Strokes位移大，因此干扰少，灵敏度高，结果准确度高。然而，现有技术中针对采用TRFIA的干式荧光免疫分析仪，缺少一种能够快速、便捷、经济使用的试剂盒及方法，使其能够满足单人份、小批量检测AMH的要求。
技术实现思路
本技术的目的是针对现有技术的不足，结合干式荧光免疫分析仪，提供一种快速、便捷、经济的时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条和试剂盒及，从而能够满足单人份、小批量检测AMH的要求，其具有灵敏度高、特异性高、用血量少、检测时间短、操作简便、检测结果准确可靠的优点。为实现上述目的，本技术的第一个方面提供了一种时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条，所述试纸条包括PVC底板、全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸；全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸依次搭接粘贴在PVC底板上；所述抗体承载膜包括基底膜和基底膜上依次涂有的相互平行的微球线、检测线和控制线，其中所述微球线靠近全血滤垫，控制线靠近吸水纸；所述控制线由兔抗小鼠IgG组成，检测线由AMH单克隆抗体组成，微球线由结合AMH单克隆抗体的时间分辨荧光微球组成。进一步的，所述全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸依次相互交错1.8-2.3mm搭接粘贴在PVC底板上。上述相互交错尺寸优选为2mm。进一步的，所述微球线距全血滤垫4～6mm。进一步的，所述微球线和检测线间距为4～10mm；且所述检测线和控制线的间距为4～10mm。优选上述范围分别为4～6mm，更优选5～6mm。通过上述间距的设置，使得所述试纸条检测AMH的灵敏度和特异性达到最优化。进一步的，所述微球线、检测线和控制线均为实心线状。进一步的，所述抗体承载膜的基底膜为硝酸纤维素膜。硝酸纤维素又称硝化纤维素、纤维素硝酸酯，为纤维素与硝酸酯化反应的产物。以棉纤维为原料的硝酸纤维素称为硝化棉。硝酸纤维素是一种白色纤维状聚合物，耐水、耐稀酸、耐弱碱和各种油类。尤其适于作为本技术抗体承载膜的基底膜材质，可以使得所获得的抗体承载膜的理论层析速度达到15min左右。进一步的，所述AMH单克隆抗体为小鼠抗人AMH单克隆抗体。进一步的，所述试纸条还包括外壳，外壳将全血滤垫、抗体承载膜、吸水纸和PVC底板装入其中，外壳包括上壳和下壳，上壳将全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸压紧在PVC底板上，且上壳在对应全血滤垫和抗体承载膜的部分分别设有加样孔和观察窗。所述试纸条可用于干式荧光免疫分析仪的检测。本技术的第二个方面提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括PVC底板、全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸；所述全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸依次搭接粘贴在PVC底板上；所述抗体承载膜包括基底膜和所述基底膜上依次涂有的相互平行的微球线、检测线和控制线，其中所述微球线靠近全血滤垫，所述控制线靠近吸水纸；所述控制线由兔抗小鼠IgG组成，所述检测线由AMH单克隆抗体组成，微球线由结合AMH单克隆抗体的时间分辨荧光微球组成。

【技术特征摘要】
1.一种时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括PVC底板、全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸；所述全血滤垫、抗体承载膜和吸水纸依次搭接粘贴在PVC底板上；所述抗体承载膜包括基底膜和所述基底膜上依次涂有的相互平行的微球线、检测线和控制线，其中所述微球线靠近全血滤垫，所述控制线靠近吸水纸；所述控制线由兔抗小鼠IgG组成，所述检测线由AMH单克隆抗体组成，微球线由结合AMH单克隆抗体的时间分辨荧光微球组成。2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析法检测AMH的试纸条，其特征在于，所述微球线距全血滤垫4～6mm；所述微球线和检测线间距为4～6mm；且所述检测线和控制线的间距为4～6mm。3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光免疫层析法检测A...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翀，康星，张旭，范祖森，闫慧娟，
申请(专利权)人：李翀，
类型：新型
国别省市：北京,11