The inventor provides a preparation method of AP Red dye solution, including the preparation of chromogen, substrate and dye solution. The above technical scheme provides a new type of AP Red and its preparation method, possibly because the chromatogen in AP Red has multiple reaction groups, which can react with the groups on the tissue and form covalent bonds, thus enhancing the bonding force between AP Red dye solution and the tissue, so that the AP Red dye solution can be used in the tissue. After dyeing, organic reagents were used directly, and water-based sealing tablets were not needed to avoid bubble formation. Thickness was controlled, time and labor costs were saved, and observation of dyeing results was avoided.
【技术实现步骤摘要】
一种AP-Red染色液及其制备方法
本专利技术涉及生物医药领域,特征涉及一种AP-Red染色液及其制备方法。
技术介绍
AP-Red染色液是免疫组织化学或免疫细胞化学中常用的染色液。免疫反应中,抗体所带的碱性磷酸酶与AP-Red染色液起反应,最终使组织切片中抗原位点上呈现红色着色。在显色完成后,要对组织切片进行封片保存。由于目前普通的AP-Red遇到有机溶剂(乙醇、二甲苯)会褪色,因此需要用水性封片剂封片,若要让染色结果长期保存,待水性封片剂干片后再用中性树胶封片。水性封片剂封片容易产生气泡,有一定厚度,存在折光度问题,一定程度影响染色结果的观察,同时水性封片剂耗时费力,给操作人员增加负担。另外,水性封片剂封片后如果没有再次用中性树胶封片,AP-Red的所染红色会在3-5个月后逐渐褪色。
技术实现思路
为此,需要提供一种可在染色后直接过有机试剂,不需使用水性封片的AP-Red染色液。为实现上述目的,专利技术人提供了一种AP-Red染色液的制备方法,包括以下步骤:色原制备:3.5-3.7g新品红溶于45-55ml质量百分比为1.5%-2%的盐酸溶液中,制得第一混合溶液;向第一混合溶液中加入的2-2.2g亚硝酸钠进行重氮化反应,反应温度控制在0-5℃,得到含有重氮化新品红的第一悬浊液,将第一悬浊液进行固液分离,得到含有重氮化新品红的AP-Red色原溶液;底物制备:0.2-0.4g萘酚AS-BI磷酸盐溶解于40-60mlpH8.2-8.6的Tris缓冲液中,得到第二混合溶液,将第二混合溶液与0.4-0.6ml二甲基甲酰胺混合,得到AP-Red底物;染色液制备:将AP ...
【技术保护点】
1.一种AP‑Red染色液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:色原制备:3.5‑3.7g新品红溶于45‑55ml质量百分比为1.5%‑2%的盐酸溶液中,制得第一混合溶液;向第一混合溶液中加入2‑2.2g亚硝酸钠进行重氮化反应,反应温度控制在0‑5℃,得到含有重氮化新品红的第一悬浊液,将第一悬浊液进行固液分离,得到含有重氮化新品红的AP‑Red色原溶液;底物制备:0.2‑0.4g萘酚AS‑BI磷酸盐溶解于40‑60ml pH8.2‑8.6的Tris缓冲液中,得到第二混合溶液,将第二混合溶液与0.4‑0.6ml二甲基甲酰胺混合,得到AP‑Red底物;染色液制备:将AP‑Red色原溶液与等体积的AP‑Red底物进行混合,得到AP‑Red染色液。
【技术特征摘要】
1.一种AP-Red染色液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:色原制备:3.5-3.7g新品红溶于45-55ml质量百分比为1.5%-2%的盐酸溶液中,制得第一混合溶液;向第一混合溶液中加入2-2.2g亚硝酸钠进行重氮化反应,反应温度控制在0-5℃,得到含有重氮化新品红的第一悬浊液,将第一悬浊液进行固液分离,得到含有重氮化新品红的AP-Red色原溶液;底物制备:0.2-0.4g萘酚AS-BI磷酸盐溶解于40-60mlpH8.2-8.6的Tris缓冲液中,得到第二混合溶液,将第二混合溶液与0.4-0.6ml二甲基甲酰胺混合,得到AP-Red底物;染色液制备:将AP-Red色原溶液与等体积的AP-Red底物进行混合,得到AP-Red染色液。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述色原制备步骤中,所述重氮化...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨清海,史永勤,陈惠玲,陈泳,
申请(专利权)人:福州迈新生物技术开发有限公司,
类型:发明
国别省市:福建,35
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