新的靶向肿瘤微环境与肺癌干细胞相互作用的miRNA的检测及应用制造技术

本发明专利技术提出了新的靶向肿瘤微环境与肺癌干细胞相互作用的miRNA的检测及应用，并提出了试剂在制备药物中的用途。该药物用于下列的至少之一：预防或治疗癌症，抑制癌症干细胞球的形成或增殖，抑制体内癌症的形成或增殖，该药物用于预防或治疗癌症，所述试剂用于过表达核酸，所述核酸具有下列的核苷酸序列：1)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；2)具有与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性；或3)3)与1)相比具有一个或者多个核苷酸的突变。

Detection and application of new miRNA targeting tumor microenvironment and lung cancer stem cells

The invention proposes the detection and application of novel targeted tumor microenvironment and lung cancer stem cell interaction microRNAs, and proposes the use of reagents in the preparation of drugs. The drug is used for at least one of the following: preventing or treating cancer, inhibiting the formation or proliferation of cancer stem cell spheres, inhibiting the formation or proliferation of cancer in vivo, and for preventing or treating cancer. The reagent is used for overexpressing nucleic acids, the nucleotides having the following sequence of nucleotides: 1) the nucleosides shown in SEQ ID NO:1 (2) having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 99% identity with the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO:1; or (3) having one or more nucleotide mutations compared to 1).

【技术实现步骤摘要】
新的靶向肿瘤微环境与肺癌干细胞相互作用的miRNA的检测及应用
本专利技术涉及生物领域，具体地，本专利技术涉及试剂在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗癌症，更具体地，本专利技术涉及新的靶向肿瘤微环境与肺癌干细胞相互作用的miRNA的检测及应用。
技术介绍
肺癌是我国乃至世界范围内恶性程度最高的肿瘤之一，其发病率与复发率极高，在癌症相关死亡人数中占有很高的比例。近年来，尽管肺癌的诊断和治疗已经有了较大提高，但死亡率仍居高不下，并呈现年轻化趋势。随着我国经济和城市化的快速发展，空气环境的恶化亦不断加剧，大气污染的PM2.5指数也持续升高，由此肺癌发病率也将继续增加，这将大大影响我国人民的生存及生活质量，进而影响我国的经济发展。肺癌组织在肿瘤进程中伴随着显著的纤维化，并且血管化丰富，因此肿瘤基质微环境在肺癌发生发展的各个阶段均与肺癌细胞相互作用和相互调节，提示肺癌组织微环境中的间充质干细胞可能在肺癌发生发展中也发挥着重要作用。但到目前为止，仍然缺乏对肺癌组织间充质干细胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)的报道。由此，肺癌组织MSCs与肺癌细胞之间的相互作用仍有待进一步研究。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：miRNA广泛参与调控肿瘤干细胞的增殖、自我更新、转移、耐药及预后等，其重要性逐渐被人们所接受。但目前人们的研究重点主要集中在寻找调控肺癌干细胞本身的miRNA研究上，而间充质干细胞微环境如何调控肺癌细胞中的miRNA，进而促进肿瘤进程，目前尚无报道。基于上述事实和问题的发现，专利技术人从多对肺癌病人组织及对应的癌旁组织中成功分离得到间充质干细胞(MSCs)，进一步通过免疫表型、多向分化能力证明其确实是MSCs，并通过皮下成瘤实验证明肺癌组织MSCs显著促进肺癌细胞肿瘤的形成。同时专利技术人通过建立MSCs与绿色荧光蛋白(GFP)的肺癌细胞共培养模型，经高通量miRNA芯片检测，寻找MSCs与肺癌细胞相互作用中受调控的miRNA，并首次发现了mi194在MSCs处理的肺癌细胞中显著降低，且miR-194在肺癌标本中也显著降低，同时发现在肺癌细胞中高表达miR-194能显著抑制肺癌肿瘤干细胞球的增殖，进而抑制肺癌细胞体内成瘤和增殖。因此，专利技术人首次提出miR-194是一个可靠的靶向肺癌间充质干细胞与肺癌细胞相互作用的新的靶点。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了试剂在制备药物中的用途。根据本专利技术的实施例，所述药物用于下列的至少之一：预防或治疗癌症，抑制癌症干细胞球的形成和/或增殖，抑制体内癌症的形成和/或增殖，所述试剂用于过表达核酸，所述核酸具有下列的核苷酸序列：1)SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；2)具有与SEQIDNO：1所示的核苷酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性；或3)3)与1)相比具有一个或者多个核苷酸的突变。uguaacagcaacuccaugugga(SEQIDNO：1)。SEQIDNO：1所示的核苷酸序列为miR-194-5p(微小RNA-194)的核苷酸序列，专利技术人发现，肺癌组织来源的间充质干细胞能够显著促进肺癌增殖，显示肺癌组织来源的间充质干细胞能够作为激活肿瘤的微环境，其能够显著改变肺癌细胞中miRNA的表达，通过高通量的miRNA芯片，专利技术人发现间充质干细胞微环境能够显著下调miR-194的表达。进而专利技术人发现，在间充质干细胞中体外高表达miR-194能够显著抑制癌症干细胞球的体外生成和/或增殖，稳定高表达miR-194能够显著抑制肺癌的体内形成和/或增殖，利用根据本专利技术实施例所述的试剂所制备的药物，可有效用于预防或治疗癌症。根据本专利技术的实施例，上述用途还可以包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述药物用于预防或治疗癌症是通过抑制癌症间充质干细胞和癌症细胞的相互作用实现的。专利技术人发现，在体外培养癌症干细胞过程中，miR-194能够显著抑制癌症肿瘤干细胞球的形成和/或增殖，在体实验中，miR-194能够显著抑制癌症的形成和/或增殖，这与miR-194具有抑制癌症间充质干细胞微环境与癌症细胞的相互作用是分不开的。利用过表达miR-194的试剂所制备的药物，可有效用于抑制癌症间充质干细胞与癌症细胞的相互作用。根据本专利技术的具体实施例，在体外培养癌症干细胞过程中，miR-194能够显著抑制癌症肿瘤干细胞球的体外形成和/或增殖，在体实验中，miR-194能够显著抑制癌症的形成与增殖，这与miR-194具有抑制癌症间充质干细胞微环境与癌症细胞的相互作用是分不开的。利用过表达miR-194的试剂所制备的药物，可有效用于抑制癌症间充质干细胞与癌症细胞的相互作用，进而抑制肿瘤干细胞球的形成和/或增殖。根据本专利技术的实施例，所述药物用于预防或治疗癌症是进一步通过抑制体内癌症的形成或增殖实现的。专利技术人发现，在体外培养癌症干细胞过程中，miR-194能够显著抑制癌症肿瘤干细胞球的形成，在体实验中，miR-194能够显著抑制癌症的形成与增殖，这与miR-194具有抑制癌症间充质干细胞微环境与癌症细胞的相互作用是分不开的。利用过表达miR-194的试剂所制备的药物，可有效用于抑制癌症间充质干细胞与癌症细胞的相互作用，进而抑制体内癌症的形成和/或增殖。根据本专利技术的实施例，所述癌症包括肺癌。根据本专利技术的实施例，利用过表达miR-194的试剂所制备的药物，可更加有效地用于抑制肺癌间充质干细胞与肺癌细胞的相互作用、进而抑制肺癌肿瘤干细胞球的生成和/或增殖以及抑制体内肺癌肿瘤的形成和/或增殖。根据本专利技术的实施例，所述试剂是以包括选自下列至少之一的形式提供的：缀合物、脂质体、前体、模拟物、表达所述核酸的构建体。根据本专利技术的实施例，利用上述形式的至少之一，可实现过表达miR194核酸的试剂在患者体内的特异性靶向到目标并目标区域发挥相应的生理效应。根据本专利技术的实施例，所述缀合物包括所述核酸以及纳米颗粒、胆固醇、多肽的至少之一。纳米颗粒、胆固醇、多肽与核酸所形成的缀合物，可实现过表达miR194核酸的试剂在患者体内的特异性靶向到目标和核酸在目标区域发挥相应的生理效应，过表达miR194核酸的试剂以上述缀合物的形式提供，其稳定性、靶向性进一步提高。根据本专利技术的实施例，所述纳米颗粒为聚乙烯亚胺、半乳糖修饰巯基化壳聚糖季铵盐。专利技术人通过实验发现，以聚乙烯亚胺、半乳糖修饰巯基化壳聚糖季铵盐作为纳米颗粒结合核酸所获得的纳米颗粒-核酸缀合物的稳定性和靶向性进一步提高。根据本专利技术的实施例，所述构建体进一步包括控制序列，所述控制序列与所述核酸可操作的连接。控制序列可有序和高效地调控核酸在受体细胞中的高效表达，进而实现药物功能发挥的有效性和有序性。根据本专利技术的实施例，所述构建体为pLV3(H1/GFP&puro)，用根据本专利技术实施例的构建体可更好地实现过表达miR194核酸的试剂在患者体内的特异性靶向到目标并在目标区域发挥相应的生理效应。根据本专利技术的实施例，所述构建体携带具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列的核酸。uguaacagcaacuccaugugga(SEQIDNO：1)。携带具有SEQIDNO：1所示的核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.试剂在制备药物中的用途，所述药物用于下列的至少之一：预防或治疗癌症，抑制癌症干细胞球的形成或增殖，抑制体内癌症的形成或增殖，所述试剂用于过表达核酸，所述核酸具有下列核苷酸序列：1)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；2)具有与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性；或3)3)与1)相比具有一个或者多个核苷酸的突变。

【技术特征摘要】
1.试剂在制备药物中的用途，所述药物用于下列的至少之一：预防或治疗癌症，抑制癌症干细胞球的形成或增殖，抑制体内癌症的形成或增殖，所述试剂用于过表达核酸，所述核酸具有下列核苷酸序列：1)SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；2)具有与SEQIDNO：1所示的核苷酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性；或3)3)与1)相比具有一个或者多个核苷酸的突变。2.根据权利要求1所述的用途，所述癌症包括肺癌。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂是以包括选自下列至少之一的形式提供的：缀合物、脂质体、前体、模拟物、表达所述核酸的构建体。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述缀合物包括所述核酸以及纳米颗粒、胆固醇、多肽的至少之一；任选地，所述纳米颗粒为聚乙烯亚胺、半乳糖修饰巯基化壳聚糖季铵盐。5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述构建体进一步包括控制序列，所述控制序列与所述核酸可操作的连接；任选地，所述构建体为pLV3；任选地，所述构建体携带具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列的核酸。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物成注射剂、缓释微球制剂；任选地，所述药物以注射、口服或灌肠原位给药的方式给药。7.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，包括：试剂，所述试剂用于过表达核酸，...

【专利技术属性】
技术研发人员：阎新龙，岳文，裴雪涛，刘馨慧，杨慧，万令飞，何丽娟，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11