The invention discloses a directional screening method for soil target microbial flora, which comprises the following steps: S1 sample collection; S2 isolation and culture; S3 rapid screening by polymerase chain reaction with target microbial specific primers. The invention uses specific primers and bacterial liquid to directly conduct PCR for rapid screening of target bacteria in unknown bacterial flora. The whole screening process is simple, time-saving, labor-saving, fast, intuitive and efficient. It provides a fast and convenient method for high-throughput screening of target bacteria in environmental samples.
【技术实现步骤摘要】
定向筛选土壤目标微生物菌群的方法
本专利技术涉及环境微生物
,具体涉及一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法。
技术介绍
土壤中存在着大量微生物,且种类繁多。微生物能够降解土壤环境中有机污染物,也可通过促进植物生长,提高植物修复的效率。由于外源添加到土壤中的微生物需要与土著微生物进行竞争,使得添加的微生物在土壤环境中存在时间较短。快速筛选土壤样品中的目标微生物菌群可有效提高污染土壤植物修复和微生物修复的效率。目标微生物菌群的传统筛选主要采用选择性培养基法。由于选择性培养基的选择作用往往非常有限,分离得到的目标微生物菌群数量较少,尤其大量菌群没有合适的选择性培养基供使用。而且,传统分离过程成本高、周期长。
技术实现思路
针对以上不足之处,本专利技术的目的在于提供一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,该方法可以在短时间内从大量未知细菌中识别目标微生物,实现土壤样品中的目标微生物菌群的定向高通量快速筛选。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1采集土壤样品,制备土壤悬液:取土样,置于无菌瓶中,加入缓冲液,置于摇床上震荡,得土壤悬液;S2分离培养:将步骤S1所述土壤悬液进行梯度稀释,取稀释液涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上,于培养箱内培养;然后,挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化;接着,挑取纯化后的所述单菌落,在含有无菌水的聚合酶链式反应(PCR)管中搅拌,同时接种至含有液体培养基的离心管;再将离心管置于摇床上培养8h~12h生成菌株;S3快速分筛:将步骤S2所述PCR管置于PCR仪上,运 ...
【技术保护点】
1.一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1采集土壤样品,制备土壤悬液:取土样,置于无菌瓶中,加入缓冲液,置于摇床上震荡,得土壤悬液;S2分离培养:将步骤S1所述土壤悬液进行梯度稀释,取稀释液涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上,于培养箱内培养,然后,挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化,接着,挑取纯化后的所述单菌落,在含有无菌水的PCR管中搅拌,同时接种至含有液体培养基的离心管,再将离心管置于摇床上培养8h~12h生成菌株,PCR即聚合酶链式反应;S3快速分筛:将步骤S2所述PCR管进行PCR反应;其中,所述PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板,使用目标微生物的特异性引物进行PCR;采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的PCR扩增产物,筛选出扩增DNA片段大小与目标微生物扩增DNA片段相近的菌株,即为潜在目标微生物。
【技术特征摘要】
1.一种定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1采集土壤样品,制备土壤悬液:取土样,置于无菌瓶中,加入缓冲液,置于摇床上震荡,得土壤悬液;S2分离培养:将步骤S1所述土壤悬液进行梯度稀释,取稀释液涂布到含有真菌抑制剂的培养基平板上,于培养箱内培养,然后,挑取单菌落在培养基平板上进行划线纯化,接着,挑取纯化后的所述单菌落,在含有无菌水的PCR管中搅拌,同时接种至含有液体培养基的离心管,再将离心管置于摇床上培养8h~12h生成菌株,PCR即聚合酶链式反应;S3快速分筛:将步骤S2所述PCR管进行PCR反应;其中,所述PCR管中溶液作为后续PCR反应的模板,使用目标微生物的特异性引物进行PCR;采用琼脂糖凝胶电泳检测菌株的PCR扩增产物,筛选出扩增DNA片段大小与目标微生物扩增DNA片段相近的菌株,即为潜在目标微生物。2.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,步骤S1中,取土样5g~10g,置于无菌三角瓶中,所述缓冲液为45mL~90mL,pH6.5,含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液,震荡时间为30min~60min,且每10min~15min以47kHz频率超声一次,每次20s~40s。3.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,步骤S2中,所述培养基为低营养培养基或富营养培养基,低营养培养基为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硫酸铵、0.1g/L酵母提取物、20g/L琼脂,pH6.5,富营养培养基为胰酪蛋白胨15.0g/L、大豆木瓜蛋白酶消化物5.0g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂15.0g/L,pH7.1~pH7.5。4.如权利要求1所述的定向筛选土壤目标微生物菌群的方法,其特征在于,步骤S2中,将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释,取稀释倍数为10、102以及...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘金光,李明,项萌,冉景,朱巧红,高卫民,夏溢,焦朋朋,程寒飞,安忠义,
申请(专利权)人:中冶华天南京工程技术有限公司,中冶华天工程技术有限公司,中冶华天安徽节能环保研究院有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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