一种提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法技术

本发明专利技术属于中药材栽培领域，具体涉及是一种提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，该栽培方法可以显著的提高灵芝三萜类成分的含量。本发明专利技术灵芝的栽培方法，按照常规方法制作母钟；制作栽培种；制作栽培袋；出芝管理；其特征在于：出芝管理在灵芝子实体形成的栽培阶段时，控制环境中二氧化碳浓度至500‑900ppm。自然环境中二氧化碳浓度为300‑500ppm，发明专利技术人意外的发现，通过控制环境中二氧化碳浓度的技术方案，提高灵芝三萜类成分的含量的技术效果，为栽培灵芝提供了一种的技术方案。

A cultivation method to improve the content of three terpenoids in Ganoderma lucidum

The invention belongs to the field of traditional Chinese medicine cultivation, in particular relates to a cultivation method for increasing the content of triterpenoids in Ganoderma lucidum, which can significantly increase the content of triterpenoids in Ganoderma lucidum. The cultivation method of the Ganoderma lucidum is characterized in that the concentration of carbon dioxide in the environment is controlled to 500_900ppm when the Ganoderma lucidum fruiting body is managed at the cultivation stage of the Ganoderma lucidum fruiting body formation. The concentration of carbon dioxide in the natural environment was 300 500 ppm. The inventor unexpectedly found that the technical effect of increasing the content of triterpenoids in Ganoderma lucidum could be achieved by controlling the concentration of carbon dioxide in the environment, which provided a technical scheme for the cultivation of Ganoderma lucidum.

【技术实现步骤摘要】
一种提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法
本专利技术属于中药材栽培领域，具体涉及是一种提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，该栽培方法可以显著的提高灵芝三萜类成分的含量。
技术介绍
灵芝Ganodermalucidum(LeyssexFr.)Karst是担子菌纲(Basidiomycotina)，多孔菌科(Polyporaceae)，灵芝属(Ganoderma)真菌，在我国已有2000多年的药用历史，灵芝三萜类化合物是灵芝的主要活性成分。灵芝三萜类化合物主要具有抗肿瘤、保护肝脏、抗HIV病毒、抗组织胺释放、抗衰老、降血脂、降血糖等作用。由于灵芝三萜类化合物的药理作用显著，《中国药典》(2015年版第一部)也将其纳入评鉴灵芝药材质量的重要指标。TakashiKubota等于1982年首次从灵芝子实体干燥的表皮中分离出两个新的三萜单体—灵芝酸A和灵芝酸B，到2012年，已在子实体、菌丝体和发酵培养液中发现的三萜化合物超过150多种，并且这些三萜类物质多数为高度氧化的羊毛甾烷型衍生物，多数具有苦味。灵芝三萜类化合物的相对分子质量一般为400～600KDa，结构较为复杂，目前已知灵芝三萜类化合物有7类不同的母核结构，母核上有多个不同取代基，如甲基、羟基、羧基、酮基、乙酰基和甲氧基等。三萜类根据碳原子数的不同也可分为C30,C27和C24三种；依据所联接官能团和侧链结构不同，划分为灵芝酸类、醇类、醛类、内酯类等几个大类灵芝酸、灵芝孢子酸、灵芝内酯、灵芝醇、灵芝醛、赤灵酸、灵赤酸、赤芝酮等10多种。灵芝三萜类成分是评价灵芝质量的重要指标，因此提高灵芝三萜类成分是近年学者研究的热点。姚强等研究发现亚油酸还灵芝胞内三萜和胞外三萜量表现出较强的促进作用；姚强等研究发现稀土元素在适宜浓度时对灵芝三萜的产量具有一定程度的促进作用；赵蔚发现随着培养基中氮(如谷氨酰胺)浓度的不断减少，四种单体灵芝酸GA-Mk，GA-T，GA-S及GA-Me的产量明显提高；骆军鑫等发现采用震荡-静置两阶段培养法进行灵芝液体深层发酵培养与液体震荡培养法相比，灵芝菌丝体胞内总三萜含量提高了1.7倍左右；刘高强等研究发现蜣螂虫粉的添加，能显著促进灵芝胞外三萜的形成。谢丽源等发现以厚朴和桑枝为栽培基质灵芝三萜含量明显低于以青杠为栽培基质灵芝；梅锡玲研究发现绿光和蓝光处理对提高灵芝菌丝体三萜酸种类和含量均有促进作用；郭耀辉研究发现菊花非要用部位栽培灵芝能提高灵芝三萜含量。在此背景下，专利技术人在对二氧化碳浓度对灵芝子实体生长的影响研究发现，通过提高二氧化碳浓度能明显的提高栽培灵芝子实体三萜类成分的含量，由此专利技术人欲提供一种全新的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种灵芝的栽培方法，采用该方法栽培灵芝可以显著的提高灵芝三萜类成分的含量。本专利技术灵芝的栽培方法，按照常规方法制作母钟；制作栽培种；制作栽培袋；出芝管理；其特征在于：出芝管理在灵芝子实体形成的栽培阶段时，控制环境中二氧化碳浓度至500-900ppm，并大于500ppm。通常情况下，自然环境中二氧化碳浓度为200-500ppm。专利技术人意外的发现，在控制环境中二氧化碳浓度至500-900ppm时，培养所得的灵芝子实体的三萜类成分含量显著高于自然环境二氧化碳浓度条件所培养的灵芝子实体。现有技术认知中，灵芝属于好氧型蕈菌，必须在生长在有氧气存在的环境中。自然环境中，空气中二氧化碳的浓度为0.03％左右，专利技术人发现稍增加二氧化碳浓度，如二氧化碳的浓度为500ppm以上时，可促进灵芝菌丝的生长；适当提高二氧化碳浓度，如二氧化碳的浓度为500ppm900ppm时，有利于灵芝原基的发生及分化，由此可见。二氧化碳浓度对子实体菌盖扩展和菌柄伸长的相对比例有显著影响。但特别的是，灵芝子实体生长发育阶段，如果二氧化碳浓度高于0.09％(900ppm)时，会促进灵芝菌柄的伸长，但无法形成菌盖，形成多分支鹿角状畸形子实体，因此，本专利技术选择制环境中二氧化碳浓度至500-900ppm，即二氧化碳浓度(T)为：500ppm＜T≤900ppm，优选控制二氧化碳浓度(T)为：700ppm≤T≤900ppm；最优选控制二氧化碳浓度(T)为：900ppm。在此发现之上，本专利技术提供了一种在灵芝子实体形成的栽培阶段，通过控制环境中二氧化碳浓度的技术方案，实现了促进灵芝原基的发生及分化，提高灵芝三萜类成分的含量的技术效果，为栽培灵芝提供了一种的技术方案。附图说明图1二氧化碳浓度对灵芝原基数量影响。图2二氧化碳浓度对灵芝三萜类成分含量影响。具体实施方式专利技术人在应用时发现，本专利技术栽培方法关键在于二氧化碳浓度的控制。而制作母钟，制作栽培种，制作栽培袋，出芝管理则按照常规方法制作和操作即可。具体可采用的方法如下：所述制作母种：按照无菌操作规程，从原有母种中挑取带菌丝琼脂块，置于PDA培养基中，于25-30℃避光培养5-7天，至菌丝长满培养基得母种。所述制作原种：按照无菌操作规程，从母种培养基中挑取带菌丝琼脂块，置于灭菌的小麦颗粒菌种瓶中，于23-26℃的条件下，培养至菌丝长满菌种瓶得原种。所述制作栽培种：按照下述重量百分比配料：杂木屑10-15％、棉籽壳40-60％、玉米芯10-15％、麸皮8-10％、石灰1-2％和石膏1-2％，然后按料水比1:1.2-1.4加水，装入菌种瓶，高温灭菌，冷却后接入原种，于23-26℃的条件下培养至菌丝长满菌种瓶得栽培种。所述制作栽培袋：按照下述重量百分比配料：杂木屑50-60％、棉籽壳15-30％、玉米芯15-30％、麸皮8-10％、石灰1-2％和石膏1-2％，然后按料水比1:1.2-1.4加水，堆料发酵3-5天，用石灰和石膏调节pH值至6.5-7.0。然后装入栽培袋常压灭菌，冷却至料袋温度低于28℃接种栽培种，于23-26℃的条件下培养至菌丝长满栽培袋。所述出芝管理：将长满菌丝的栽培袋转移至灵芝栽培大棚，打开袋口后进行出芝管理，其中：原基期：控制环境温度25-28℃，喷水控制空气湿度85-90％，光照强度500-2000lx；开片期：喷水控制空气湿度75-90％(优选85％)，光照强度1000-5000lx(优选2000lx)；成熟期：喷水控制环境湿度75-90％(优选80％)；灵芝子实体第一次采收：当灵芝停止生长，取芝，留不带培养基柄蒂0.5-1cm；转潮管理：采收后，停止喷水2-3天，然后控制环境湿度为75-90％(优选85％)，温度25-28℃(优选25℃)，待再次长出灵芝子实体，采收第二潮灵芝；优选的，控制空气湿度喷水采用喷雾加湿。本专利技术实施例中具体采用的制作母钟，制作栽培种，制作栽培袋以及出芝管理的具体条件如下：1)制作母种：按照无菌操作规程，在专用接种间内的超净工作台上从原有母种中挑取0.5cm×0.5cm见方的带菌丝琼脂块，放入新制备的PDA试管中，置于25℃专用培养箱中避光培养5-7d长满培养基。2)制作原种：按照无菌操作规程，在专用接种间内的超净工作台上从母种试管中挑取3cm2的带菌丝琼脂块，置于灭菌的小麦颗粒菌种瓶内，置于23-26℃条件下，培养至满瓶。3)制作栽培种：将杂木屑10-15％、棉籽壳40-60％、玉米芯10-15％、麸皮8-10％、石灰1-2％和石本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，按照常规方法制作母钟；制作原种；制作栽培种；制作栽培袋；出芝管理；其特征在于：出芝管理在灵芝子实体形成的栽培阶段时，控制环境中二氧化碳浓度T为：500ppm≤T≤900ppm。

【技术特征摘要】
1.提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，按照常规方法制作母钟；制作原种；制作栽培种；制作栽培袋；出芝管理；其特征在于：出芝管理在灵芝子实体形成的栽培阶段时，控制环境中二氧化碳浓度T为：500ppm≤T≤900ppm。2.根据权利要求1所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：控制环境中二氧化碳浓度T为：700ppm≤T≤900ppm。3.根据权利要求1所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：控制环境中二氧化碳浓度T为900ppm。4.根据权利要求1-3任一项所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：出芝管理步骤采用大棚栽培时，在栽培过程中控制大棚的通气次数和通气时间满足控制环境中二氧化碳浓度的要求。5.根据权利要求1-3任一项所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：出芝管理步骤采用工厂化栽培过程时，采用智能控制空气二氧化碳浓度满足控制环境中二氧化碳浓度的要求。6.根据权利要求1-3任一项所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：出芝管理步骤采用的设备人工气候培养箱。7.根据权利要求1-6任一项所述的提高灵芝三萜类成分含量的栽培方法，其特征在于：至少满足以下任意一项：所述制作母种：按照无菌操作规程，从原有母种中挑取带菌丝琼脂块，置于PDA培养基中，于25-30℃避光培养5-7天，至菌丝长满培养基得母种；所述制作原种：按照无菌操作规程，从母种培养基中挑取带菌丝琼脂块，置于灭菌的小麦颗粒菌种瓶中，于23-26℃的条件下，培养至菌丝长满菌种瓶得原种；所述制作栽培种：按照下述重量百分比配料：杂木屑10-15％、...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗霞，许晓燕，江南，余梦瑶，贺黎铭，
申请(专利权)人：四川省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：四川,51