一种靶向细胞核的序列及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向细胞核的序列，包括：a)至少含有序列表中SEQ ID NO.1所示序列的第100‑141位核苷酸序列，并且从SEQ ID NO.1所示序列的第100位开始、按照SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸序列向5′端延长，得到长度为42至141 bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQ ID NO.1所示序列的第141位开始、按照SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸序列向3′端延长，得到长度为42至1305 bp的任意一个可被3整除的DNA片段；所述DNA分子具有核定位功能。实验证明，本发明专利技术的核定位序列能够准确标记核。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向细胞核的序列及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体来说是一种核定位序列及其应用。
技术介绍
真核细胞的重要特征之一是具有细胞核。细胞核中存储有遗传物质，外面包围着一层极薄的膜，称为核膜。核膜上有许多孔，称为核孔，对控制核内外物质的出入，维持核内环境的稳定有重要作用。大多数分子量小于40kD的蛋白质或小于250bp的DNA片段可以通过核孔自由扩散进入细胞核，而大分子如病毒蛋白、大多数转录因子、组蛋白、mRNA和一些特殊的小分子蛋白质必须以能量依赖的方式通过其本身携带的核定位信号，被相应的核转运蛋白识别进入核内。核定位信号是蛋白质的一个结构域，通常为一短的氨基酸序列，能与入核载体相互作用，介导外源DNA或者蛋白质进入核内，具有引导其所在序列趋向定位于核区的功能，进而对转录调控、信号传导、基因表达、细胞分化发挥至关重要的作用。目前利用核定位序列进行蛋白核导入存在以下问题：1）核定位序列的选择余地比较少；2）核定位序列介导的蛋白质核导入效率还比较低；3）核定位序列介导蛋白进入细胞核后，难以确定入核后的分布。因此，核定位序列的发现对我们进一步研究核内外物质转运的机制以及解决一些细胞生物学难题具有重大意义。核孔蛋白50（nucleoporin50，NUP50）是定位于核孔复合体的核质原纤维，含有苯丙氨酸和甘氨酸重复组成的NUP基序，目前的研究表明，NUP50能与输入蛋白importin-α和β相互作用，对核蛋白输入具有促进作用。
技术实现思路
针对现有技术中的上述问题，本专利技术提供了一种核定位序列及其应用，所述的这种核定位序列及其应用要解决现有技术中核定位序列的选择余地比较少、核定位序列的效率比较低、核定位序列难以确定入核后的分布的技术问题。本专利技术提供了一种细胞中的核定位序列，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中SEQIDNO.1所示序列的第100-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第100位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的5′端延长，得到长度为42至141bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为42至1305bp的任意一个可被3整除的DNA片段；所述DNA分子具有核定位功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有核定位功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有核定位功能的DNA片段。根据本专利技术的核定位序列DNA分子，所述DNA分子是下述A1)-A4)中的任一种DNA片段：A1)核苷酸序列至少含有序列表中SEQIDNO.1所示序列的第85-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第85位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的5′端延长，得到长度为为57至141bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为57至1305bp的任意一个可被3整除的DNA片段。A2)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为141至1404bp的任意一个可被3整除的DNA片段。A3)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-345位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第345位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为345至1404bp的任意一个可被3整除的DNA片段。A4)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-639位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第639位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为639至1404bp的任意一个可被3整除的DNA片段。3.根据权利要求1-2中任一所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为下述1)-5)中任意一种：1)序列表中SEQIDNO.1所示序列的第100-141位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中SEQIDNO.1所示序列的第85-141位核苷酸所示的DNA分子；3)序列表中SEQIDNO.1所示序列的第1-141位核苷酸所示的DNA分子。4)序列表中SEQIDNO.1所示序列的第1-345位核苷酸所示的DNA分子。5)序列表中SEQIDNO.1所示序列的第1-639位核苷酸所示的DNA分子。本专利技术提供了一个含有核定位序列的生物材料，为下述B1)至B13)中的任一种：B1)含有上述定位序列DNA分子的表达盒；B2)含有上述定位序列DNA分子的重组载体；B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；B4)含有上述定位序列DNA分子的重组微生物；B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；B6)含有B2)所述重组载体的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有上述定位序列DNA分子的转基因动物细胞系；B9)含有B1)所述表达盒的转基因动物细胞系；B10)含有上述定位序列DNA分子的转基因动物组织；B11)含有B1)所述表达盒的转基因动物组织；B12)含有上述定位序列DNA分子转基因动物器官；B13)含有B1)所述表达盒的转基因动物器官。本专利技术提供了一个核定位序列作为核定位中的应用，为下述M1-M4中任一种：M1、含有上述定位序列DNA分子在作为核定位中的应用；M2、含有上述定位序列DNA分子在作为细胞中核定位中的应用；M3、含有上述定位序列DNA分子在作为转基因动物组织中核定位中的应用；M4、含有上述定位序列DNA分子在作为转基因动物器官中核定位中的应用。本专利技术提供了一个核定位序列作为导向片段介导目的基因进入核内的应用，为下述N1-N4中任一应用：N1、含有上述定位序列DNA分子作为导向片段介导目的基因进入细胞核中的应用；N2、含有上述定位序列DNA分子在细胞中作为导向片段介导目的基因进入细胞核中的应用；N3、含有上述定位序列DNA分子在转基因动物组织中作为导向片段介导目的基因进入细胞核中的应用；N4、含有上述定位序列DNA分子在转基因动物器官中作为导向片段介导目的基因进入细胞核中的应用。本专利技术的提供了一个核定位序列在动物中作为导向片段介导目的基因进入细胞核中的应用；进一步的，所述目的基因的导向具有细胞核特异性。本专利技术通过构建含有NUP50基因以及其截断体的重组载体，探究其特定的核定位序列，明确了NUP50有效的核定位序列，进一步可将它作为导向片段，在需要转运入核、但不能被核转运蛋白有效特异性识别的大分子蛋白上，人为添加该特定的序列，提高相应靶分子转运入核的效率，调控相关基因表达和分子的信号转导，进而将为某些疾病的病理机制研究和有效治本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞中的核定位序列，其特征在于：是下述a)或b)或c)的DNA片段中的任意一种：a)至少含有SEQ ID NO.1所示序列的第100‑141位核苷酸序列，并且从SEQ ID NO.1所示序列的第100位开始、按照SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸序列向SEQ ID NO.1所示序列的5′端延长，得到长度为42至141bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQ ID NO.1所示序列的第141位开始、按照SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸序列向SEQ ID NO.1所示序列的3′端延长，得到长度为42至1305bp的任意一个可被3整除的DNA片段；所述DNA片段具有核定位功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有核定位功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有核定位功能的DNA片段。

【技术特征摘要】
1.一种细胞中的核定位序列，其特征在于：是下述a)或b)或c)的DNA片段中的任意一种：a)至少含有SEQIDNO.1所示序列的第100-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第100位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的5′端延长，得到长度为42至141bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为42至1305bp的任意一个可被3整除的DNA片段；所述DNA片段具有核定位功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有核定位功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有核定位功能的DNA片段。2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子是下述A1)-A4)中的任一种DNA片段：A1)核苷酸序列至少含有SEQIDNO.1所示序列的第85-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第85位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的5′端延长，得到长度为57至141bp的任意一个可被3整除的DNA片段；或者从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为57至1305bp的任意一个可被3整除的DNA片段；A2)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-141位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第141位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为141至1404bp的任意一个可被3整除的DNA片段；A3)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-345位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第345位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为345至1404bp的任意一个可被3整除的DNA片段；A4)核苷酸序列的5′端至少含有SEQIDNO.1所示序列的第1-639位核苷酸序列，并且从SEQIDNO.1所示序列的第639位开始、按照SEQIDNO.1所示序列的核苷酸序列向SEQIDNO.1所示序列的3′端延长，得到长度为639至1404bp的任意一个可被3整除的D...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈义汉，徐亮，管溢，石蕊，高雪婷，俞帅，
申请(专利权)人：上海市东方医院，
类型：发明
国别省市：上海,31