【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】超分辨率测序
在各个方面和实施方案中，本专利技术涉及对靶多核苷酸测序的方法。
技术介绍
最初有两种成功的DNA序列测定方法：双脱氧链终止法(Sanger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,74:5463-5467(1977))和化学降解法(Maxam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,74:560-564(1977))。这些为核苷酸测序的方法既耗时又昂贵。对个体人类基因组、其他生物和病原体基因组的大规模测序的需求需要开发更低成本且更快速的替代方案。这导致了边合成边测序(SbS)的出现，这种测序已经成为占主导的下一代测序(NGS)技术(例如US5302509)，并且涉及在通过聚合酶模板导向并入延伸的DNA链期间或之后鉴定每个核苷酸。在一种SbS方法即焦磷酸测序(Ronaghi等人Science第281卷第5375期(1998))中，检测是基于焦磷酸(PPi)释放、其向ATP的转化以及萤火虫荧光素酶产生可见光的生物发光检测。ThermoFisher的IonTorrent平台以相同的方式进行测序，但检测质子而非tPPi的释放。这些SbS方法一次仅添加...
【技术保护点】
1.一种用于靶多核苷酸阵列的模板导向的边合成边测序的方法，所述方法包括：(a)在流体容器中提供靶多核苷酸阵列；(b)使所述多核苷酸阵列与包含(i)聚合复合物和(ii)可逆终止且不同标记的A、C、G和T/U核苷酸的溶液接触；(c)使用所述聚合复合物将所述不同标记的核苷酸之一并入与所述多核苷酸阵列中的至少一个核苷酸互补的链中；(d)使成像标签与步骤(c)的所述不同标记的核苷酸结合；(e)成像并存储步骤(d)的所述成像标签的属性和位置；(f)使终止(b)‑(e)逆转；(g)重复步骤(b)‑(e)并且由存储的所述成像标签的属性和位置组装所述靶多核苷酸阵列中的每一个多核苷酸的序列，任...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.18 US 62/256,9811.一种用于靶多核苷酸阵列的模板导向的边合成边测序的方法，所述方法包括：(a)在流体容器中提供靶多核苷酸阵列；(b)使所述多核苷酸阵列与包含(i)聚合复合物和(ii)可逆终止且不同标记的A、C、G和T/U核苷酸的溶液接触；(c)使用所述聚合复合物将所述不同标记的核苷酸之一并入与所述多核苷酸阵列中的至少一个核苷酸互补的链中；(d)使成像标签与步骤(c)的所述不同标记的核苷酸结合；(e)成像并存储步骤(d)的所述成像标签的属性和位置；(f)使终止(b)-(e)逆转；(g)重复步骤(b)-(e)并且由存储的所述成像标签的属性和位置组装所述靶多核苷酸阵列中的每一个多核苷酸的序列，任选地以均相或一锅反应的方式。2.根据权利要求1所述的方法，其中使所述标签结合包括多个、随机结合/去结合事件。3.根据权利要求2所述的方法，其中为所述标签成像包括单分子定位和/或随机光学重建。4.一种对靶多核苷酸测序的方法，所述方法包括：(a)将所述靶多核苷酸置于焦平面中；(b)使所述靶多核苷酸与包含(i)聚合复合物和(ii)不同标记的A、C、G和T/U核苷酸，以及(iii)四种不同DNAPAINT成像链的溶液接触，其中每种不同标记的核苷酸包含结构N-X-LBP，其中N是核苷酸，X是可光裂解的接头，而LBP是包含DNAPAINT成像剂的对接位点的标记结合伴侣，并且其中LBP充当终止子(T)：N-X-LBP(T)或单独的终止子通过可光裂解的接头与N连接：T-X-N-X-LBP；(c)使用所述聚合复合物将所述不同标记的核苷酸之一并入与所述靶多核苷酸互补的链中；(d)用第一波长的电磁辐射照射所述靶多核苷酸，检测对应于所述不同标记的核苷酸的属性的所得信号，并存储所述所得信号；(e)任选地通过用第二波长的电磁辐射照射所述靶多核苷酸，去除步骤(b)的LBP和T；以及(f)重复步骤(b)-(e)并由所述存储信号组装所述靶多核苷酸的序列，任选地以均相或一锅反应的形式。5.一种对靶多核苷酸测序的方法，包括：(a)将所述靶多核苷酸置于流体容器内；(b)使所述靶多核苷酸与包含(i)聚合复合物和(ii)四类不同标记的核苷酸的溶液接触，其中每种不同标记的核苷酸包含以下结构：N-c-L(T...
【专利技术属性】
技术研发人员：卡利姆·U·米尔，
申请(专利权)人：卡利姆·U·米尔，
类型：发明
国别省市：美国,US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。