LYNX1在促进糖尿病患者种植体骨整合中的应用制造技术

本发明专利技术公开了LYNX1在促进糖尿病患者种植体骨整合中的应用，本发明专利技术基于胰岛素可以促进糖尿病患者种植体整合，研究胰岛素作用过程中发生变化的基因，从而进一步研究靶向该基因是否具有促进创口愈合的作用。本发明专利技术同时公开了一种筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物的方法及其应用。

【技术实现步骤摘要】
LYNX1在促进糖尿病患者种植体骨整合中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及LYNX1在促进糖尿病患者种植体骨整合中的应用。
技术介绍
胰岛素被认为是体内能量代谢的主要调控者，其主要生理作用是促进合成代谢，是目前治疗糖尿病的首选药物。糖尿病患者牙周病的发病率和严重程度都高于非糖尿病人群，更容易发生牙齿缺失等疾病。人工种植牙技术是牙列缺损缺失修复和口腔颌面部缺损固位的有效手段，人工种植牙技术的成功应用依赖于种植体在机体内形成骨结合的状况，而种植体-骨结合的质量又受到机体的骨再生能力、种植体的材料、形态以及应力环境等因素的影响。在骨骼系统内骨组织能够通过自我调节力，维持骨重建中成骨细胞及其主导的骨生成和破骨细胞及其主导的骨吸收保持平衡，进而维持骨的各项生理指标及其功能活动在正常范围，保持骨骼系统整体功能的稳定和有序被称作骨稳态。骨稳态主要通过周期性的骨重建来实现，种植体骨结合后的骨重建过程是复杂的，受多因素影响，并且此过程影响着牙种植体的初期及其长期稳定性。因此，糖尿病状态下的骨再生能力受损是影响种植体骨结合的根本原因，从而成为制约人工种植牙技术应用于日益增多的糖尿病患者的瓶颈。大量研究表明，II型糖尿病患者骨结构和骨质量发生了改变，种植体周围的新生骨表现呈更不成熟、更无序的状态。临床研究和动物实验显示，胰岛素可以作为一种骨代谢因子直接或间接参与调节骨形成。申请人前期研究(CN201010274095.8)已经证实将生理浓度的胰岛素局部应用于糖尿病大鼠拔牙窝处能促进新骨形成，加速拔牙窝愈合，但是对于其作用机制尚未有明确的研究成果。本申请从胰岛素对骨愈合有促进作用的角度出发，研究起重要作用的分子，为种植体的骨愈合提供新途径。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与糖尿病患者种植体骨整合的基因标志物，通过改变基因的表达水平，可以影响种植体骨愈合。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了LYNX1在制备促进糖尿病患者种植体骨整合中的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括LYNX1的抑制剂。进一步，所述抑制剂为siRNA。优选的，siRNA的序列如SEQIDNO.3～4所示。进一步，所述糖尿病是II型糖尿病。本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括LYNX1功能性表达的抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。其中，LYNX1功能性表达的抑制剂是指任何可降低LYNX1蛋白的活性、降低LYNX1基因或蛋白的稳定性、下调LYNX1蛋白的表达、减少LYNX1蛋白有效作用时间、或抑制LYNX1基因的转录和翻译的物质，这些物质均可用于本专利技术，作为对于下调LYNX1有用的物质，从而可用于促进骨整合。例如，所述的抑制剂包括核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子。其中核酸抑制物选自：以LYNX1或其转录本为靶序列、且能够抑制LYNX1基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。蛋白结合分子选自：与LYNX1蛋白特异性结合的物质，如能够抑制LYNX1蛋白活性的抗体或配体。进一步，所述抑制剂为siRNA。优选的，siRNA的序列如SEQIDNO.3～4所示。本专利技术提供了一种筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物的方法，步骤包括：用待筛选物质处理表达或含有LYNX1基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中LYNX1基因或其编码的蛋白的表达或活性。其中，若所述待筛选物质可降低LYNX1基因或其编码的蛋白的表达或活性优选显著降低，(如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该待筛选物质是促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物。在本专利技术中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选药物包括(但不限于)：针对LYNX1基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物。在本专利技术中，所述的步骤还包括：对获得的候选药物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选药物中进一步选择促进糖尿病患者种植体骨整合的物质。本专利技术提供了如上所述的方法在筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物中的应用。在本专利技术中，LYNX1包括野生型、突变型或其片段。在本专利技术的具体实施例中，一种代表性LYNX1基因的的核苷酸序列如目前国际公共核酸数据库GeneBank中LYNX1(NM_001356370.1)所示。本专利技术的LYNX1核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。在本专利技术中，作为本专利技术的一种选择方式，所述的LYNX1的抑制剂是一种特异性与LYNX1结合的抗体。所述特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体；本专利技术不仅包括完整的抗体分子，也包括抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与LYNX1蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体作为本专利技术的一种优选方式，所述LYNX1的抑制剂是一种LYNX1特异性的小干扰RNA分子。如本文所用，所述的“小干扰RNA”是指一种短片段双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰(RNAinterference)过程。小干扰RNA可以制备成双链核酸的形式，它含有一个正义链和一个反义链，这两条链仅在杂交的条件下形成双链。一个双链RNA复合物可以由相互分离的正义链和反义链来制备。因此，举例来讲，互补的正义链和反义链是化学合成的，其后可通过退火杂交，产生合成的双链RNA复合物。在筛选有效的siRNA序列时，本专利技术人通过大量的比对分析，从而找出最佳的有效片段。本专利技术人设计合成了多种siRNA序列，并将它们分别通过转染试剂转染相关细胞系进行验证，选出干扰效果最佳的siRNA，它们分别具有SEQIDNO.3、SEQIDNO.4所示的序列，进一步地在细胞水平实验，结果证明对于细胞试验而言抑制效率非常高。本专利技术的核酸抑制物如siRNA可以化学合成，也可以通过一个重组核酸结构里的表达盒转录成单链RNA之后进行制备。siRNA等核酸抑制物，可通过采用适当的转染试剂被输送到细胞内，或还可采用本领域已知的多种技术被输送到细胞内。作为本专利技术的一种可选方式，所述的LYNX1的抑制剂也可以是一种“小发夹RNA(SmallhairpinRNA，shRNA)”，其是能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，小发夹RNA能够通过RNA干扰途径来抑制基因的表达。如上述，shRNA可以由双链DNA模板来表达。双链DNA模板被插进一个载体，例如质粒或病毒载体，然后在体外或体内连接到一个启动子进行表达。shRNA在真核细胞内DICER酶的作用下，可被切割成小干扰RNA分子，从而进入RNAi途径。“shRNA表达载体”是指一些本领域常规用于构建shRNA结构的质粒，通常该质粒上存在“间隔序列”以及位于“间隔序列”两边的多克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LYNX1在制备促进糖尿病患者种植体骨整合中的药物组合物中的应用。

【技术特征摘要】
1.LYNX1在制备促进糖尿病患者种植体骨整合中的药物组合物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物组合物包括LYNX1的抑制剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，抑制剂为siRNA。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，siRNA的序列如SEQIDNO.3～4所示。5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述糖尿病是II型糖尿病。6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括LYNX1功能性表达的抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。7.根据权利要求6所述的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪林，刘洪臣，姜华，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11