分子靶标在牙种植体修复中的应用制造技术

本发明专利技术公开了分子靶标在牙种植体修复中的应用，所述分子靶标为DEPDC4。本发明专利技术首次发现了DEPDC4在胰岛素治疗组显著上调，并通过实验进一步证实，提高DEPDC4的表达水平，可以促进巨噬细胞的杀菌率。本发明专利技术同时公开了DEPDC4在筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
分子靶标在牙种植体修复中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标，具体的所述靶标为DEPDC4。
技术介绍
随着人民生活水平的提高以及生活方式的改变，糖尿病患病率逐年增加，中老年人患有糖尿病时又多同时伴有牙列缺损或缺失，渴望受惠于牙种植技术。大量研究证实2型糖尿病患者骨结构和骨质量发生了改变，种植体周围的新生骨表现呈更不成熟、更无序的状态，提示新生骨的性质不同于非糖尿病患者，存在种植体周骨愈合不良等危险因素(MarchandF,RaskinA,Dionnes-HornesA,BarryT,DuboisN,ValeroR,andVialettesB.Dentalimplantsanddiabetes:conditionsforsuccess.DiabetesMetab.2012；38(1):14-19.)。目前研究发现，选择人工种植体修复是更为理想的修复方式，但由于糖尿病患者血糖控制不佳或胰岛素抵抗引起种植体植入后创口愈合延迟，牙种植体骨结合不良(TatarakisN,KinneyJS,InglehartM,BraunTM,ShelburneC,LangNP,GiannobileWV,andOhTJ.Clinical,microbiological,andsalivarybiomarkerprofilesofdentalimplantpatientswithtype2diabetes.ClinOralImplantsRes.2014；25(7):803-812.)。随着我国逐渐进入老龄化社会，糖尿病患者的牙列缺损或缺失后如何修复的问题显得尤为突出。如何提高种植体植入后成功率是国内外学者所追求的目标和着力研究的热点课题。研究发现，在颌骨缺损患者中，体内的免疫细胞包括中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞的功能都发生了改变，中性粒细胞的黏附、趋化和吞噬功能受到损坏或降低，从而对口腔内致病菌的杀伤能力减弱，这也是颌骨缺损患者骨愈合能力降低的重要原因之一。胰岛素被认为是体内能量代谢的主要调控者，其主要作用在肝脏、肌肉及脂肪组织，控制着蛋白质、糖、脂肪三大营养物质的代谢和贮存。本课题组前期研究已经证实将生理浓度的胰岛素局部应用于糖尿病大鼠拔牙窝处能促进新骨形成，加速拔牙窝愈合(CN201010274107.7)，但是目前对于胰岛素的作用机制尚不清楚。寻找与骨愈合相关的分子，为为日益增多的糖尿病患者牙种植体骨结合不良的研究提供理论依据，同时为促进种植体的骨愈合提供新的方法。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与糖尿病患者种植体骨整合相关的分子靶标，通过靶向该分子，可以促进骨整合。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括DEPDC4功能性表达的促进剂。进一步，所述促进剂为为增加DEPDC4基因表达、增强DEPDC4表达功能、和/或增强DEPDC4表达产物活性的试剂。进一步，所述试剂为含有能编码功能性DEPDC4蛋白的核酸的试剂、DEPDC4蛋白的激活剂、含有DEPDC4蛋白质的试剂。进一步，所述试剂为含有能编码功能性DEPDC4蛋白的核酸的试剂。进一步，所述试剂为含有DEPDC4核酸的表达载体。进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。本专利技术提供了DEPDC4在制备促进糖尿病患者种植体骨整合中的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括DEPDC4功能性表达的促进剂。本专利技术提供了一种筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物的方法，步骤包括：测试组中，在培养体系中添加测试化合物，并观察所述测试组的细胞中DEPDC4的表达量和/或活性；在对照组中，在相同的培养体系中不添加测试化合物，并观察对照组的所述细胞中DEPDC4的表达量和/或活性；其中，如果测试组中细胞的DEPDC4的表达量和/或活性高于对照组，就表明该测试化合物是促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物。在本专利技术中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。在本专利技术中，所述的步骤还包括：对获得的候选药物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选药物中进一步选择促进糖尿病患者种植体骨整合的物质。本专利技术提供了上述方法在筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物中的应用。附图说明图1是QPCR检测DEPDC4基因过表达图。图2是DEPDC4对细菌存活率的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，检测施用和未施用胰岛素的基因的表达水平，发现其中具有明显差异的基因，探讨其与种植体骨整合之间的关系。通过测序及分析，本专利技术首次发现了胰岛素组DEPDC4显著性上调。实验证明，促进DEPDC4的表达水平，能够有效的促进巨噬细胞的杀菌效果，从而为颌骨修复提供新的方法，同时为核辐射、肿瘤、全身系统性疾病等因素导致的颌骨缺损提供新的治疗思路。DEPDC4基因在本专利技术中，DEPDC4基因位于人12号染色体长臂2区3带上。DEPDC4包括野生型、突变型或其片段。在本专利技术的具体实施例中，一种代表性DEPDC4基因的的核苷酸序列如目前国际公共核酸数据库GeneBank中DEPDC4(NM-_001319310.1)所示。本专利技术的DEPDC4核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。促进剂和药物组合物基于本专利技术的发现，本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含DEPDC4功能性表达的促进剂。所述的DEPDC4的促进剂是指任何可提高DEPDC4基因或表达产物稳定性、上调DEPDC4的表达、增加DEPDC4的有效作用时间或促进DEPDC4基因的转录的物质，这些物质均可用于本专利技术，作为对于上调DEPDC4基因的表达有用的物质，从而可用于促进骨整合。在本专利技术中，“功能性表达”意指功能性基因产物的转录和/或翻译。“功能性表达”可以在至少两个水平上失调。第一，在DNA水平上，例如通过基因的缺失或破坏，或者是没有转录发生(在两种情况下都阻止相关基因产物的合成)。转录的缺失可以例如由表观遗传的变化(例如DNA甲基化)或由功能缺失性突变导致。如本文中所使用的“功能缺失”或“LOF”突变是，相对于赋予蛋白质增强的或新的活性的功能获得性突变而言，阻止、减少或消除基因产物的功能的突变。功能性缺失可由广泛的突变类型引起，包括但不限于整个基因或基因部分的删除、剪接位点突变、由小的插入和删除引起的移码突变、无义突变、取代了必需氨基酸的错义突变、和阻止产物的正确细胞定位的突变。该定义也包括DEPDC4基因的启动子或调控区域的突变，如果这些突变干扰了基因的功能。无效突变是完全破坏基因产物功能的LOF突变。一个等位基因中的无效突变通常将使表达水平降低50％但可能对基因产物的功能具有严重影响。值得注意的是，功能性表达也可以因为功能获得性突变而失调：通过赋予蛋白质新的活性，蛋白质的正常功能失调，表达的功能活性蛋白减少。反之亦然，功能性表达可以例如通过基因复制或通过缺乏DNA甲基化而增加。功能性表达也可以因为功能获得性突变而失调：通过赋予蛋白质新的活性，蛋白质的正常功能失调，表达的功能活性蛋白减少。反之亦本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括DEPDC4功能性表达的促进剂。

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括DEPDC4功能性表达的促进剂。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述促进剂为为增加DEPDC4基因表达、增强DEPDC4表达功能、和/或增强DEPDC4表达产物活性的试剂。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述试剂为含有能编码功能性DEPDC4蛋白的核酸的试剂、DEPDC4蛋白的激活剂、含有DEPDC4蛋白质的试剂。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述试剂为含有能编码功能性DEPDC4蛋白的核酸的试剂。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述试剂为含有DEPDC4核酸的表达载体。6.根据权利要求1-5任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪林，刘洪臣，姜华，白阳，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11