一种非编码RNA分子lnc-DC在预测乳腺癌预后中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种筛选乳腺癌患者预后标志物的方法，所述方法包括测定乳腺癌患者中非编码Lnc‑RNA分子Lnc‑DC的表达情况，以及所述非编码Lnc‑RNA分子Lnc‑DC在制备预测乳腺癌患者预后的检测剂中的应用，所述Lnc‑DC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还公开了检测Lnc‑RNA分子Lnc‑DC的表达情况的引物或探针，以及提高乳腺癌患者预后患者的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种非编码RNA分子lnc-DC在预测乳腺癌预后中的应用
本专利技术属于肿瘤生物治疗领域，涉及一种非编码RNA分子lnc-DC在预测乳腺癌预后中的应用。
技术介绍
乳腺癌是目前全球女性最常见的恶性肿瘤。乳腺作为人体重要的激素靶向器官，在乳腺发生的恶性肿瘤中70％的乳腺癌表达雌激素受体(EstrogenReceptor,ER)或者孕激素受体(ProgesteroneReceptor,PR)，而该类型乳腺癌对激素抑制治疗较为敏感，具有内分泌治疗指征。他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)是一种非固醇类抗雌激素药物，是目前绝经前女性乳腺癌内分泌治疗的一线用药，具有十分重要的地位。尽管临床观察到他莫昔芬在大部分乳腺癌患者中具有确切的疗效和较小副作用，但对他莫昔芬的耐药问题始终未解。有约30％的乳腺癌患者对他莫昔芬存在原发性耐药，也有部分患者在初始治疗时有效但继而出现获得性耐药，但目前尚无有效的生物标志物可用于预测他莫昔芬敏感性或用于靶向治疗逆转耐药。对于绝经前激素受体阳性乳腺癌患者，在进行内分泌药物治疗之前，筛选出乳腺癌预后良好的患者是当前迫切需要解决的问题。因而，如果通过有效的分子标志物筛选乳腺癌预后良好的患者，就可以精准地指导乳腺癌患者的内分泌治疗，将大大提高治疗的有效率，降低乳腺癌患者的死亡风险。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种非编码RNA分子lnc-DC在预测乳腺癌预后中的应用。在第一方面，本专利技术提供了一种筛选乳腺癌患者预后相关标志物的方法，所述方法包括测定乳腺癌患者中非编码Lnc-RNA分子Lnc-DC的表达情况，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。在一个实施方案中，所述乳腺癌患者经他莫昔芬治疗。在一个实施方案中，所述方法包括使用引物对SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。在一个实施方案中，所述方法包括使用选自SEQIDNO.4至SEQIDNO.9的探针。在第二方面，本专利技术提供了一种非编码Lnc-RNA分子Lnc-DC在制备预测乳腺癌患者预后的检测剂中的应用，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。在一个实施方案中，所述乳腺癌患者经他莫昔芬治疗。在一个实施方案中，所述检测剂包括引物对SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。在一个实施方案中，所述检测剂包括选自SEQIDNO.4至SEQIDNO.9的探针。在第三方面，本专利技术提供了一种用于检测Lnc-RNA分子Lnc-DC表达情况的引物或探针。在一个实施方案中，所述引物为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。在一个实施方案中，所述探针选自SEQIDNO.4至SEQIDNO.9。在第四方面，本专利技术提供了一种用于检测Lnc-RNA分子Lnc-DC表达情况的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第三方面的引物或探针。在第五方面，本专利技术还提供了一种提高乳腺癌患者预后的方法，所述方法包括给予所述乳腺癌患者Lnc-RNA分子Lnc-DC抑制剂，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。在一个实施方案中，所述分子Lnc-DC抑制剂为Lnc-RNA分子Lnc-DC的DualgRNA序列。在一个实施方案中，所述DualgRNA序列选自SEQIDNO.10和SEQIDNO.11。在第六方面，本专利技术还提供了Lnc-RNA分子Lnc-DC抑制剂用于制备提高乳腺癌患者预后药剂的应用，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。在一个实施方案中，所述乳腺癌患者经他莫昔芬治疗。在一个实施方案中，所述分子Lnc-DC抑制剂为Lnc-RNA分子Lnc-DC的DualgRNA序列。在一个实施方案中，所述DualgRNA序列选自SEQIDNO.10和SEQIDNO.11。在第七方面，本专利技术提供了一种非编码Lnc-RNA分子Lnc-DC在制备区分乳腺癌患者检测剂中的应用，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。在一个实施方案中，所述乳腺癌患者经他莫昔芬治疗。在一个实施方案中，所述检测剂包括引物对SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。在一个实施方案中，所述检测剂包括选自SEQIDNO.4至SEQIDNO.9的探针。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术首次发现Lnc-RNA分子Lnc-DC作为逆转乳腺癌治疗的干预靶点，同时其可作为预测乳腺癌预后的有效标志物，填补了这一领域的空白，不仅具有科学意义的创新，更具有开发成检测试剂盒及相关靶向药物的巨大临床应用价值。附图说明通过以下附图对本专利技术进行说明。图1为通过CRISPR/Cas9-SAM文库系统对MCF-7细胞进行转染，进而在激素非依赖性生长环境中筛选出非激素依赖性生长MCF-7细胞的过程。图2激素剥夺环境中存活的MCF-7细胞进行gRNA的RT-PCR检测。在激素剥夺环境中绝大部分MCF-7细胞死亡，少量存活的MCF-7细胞进行gRNA的RT-PCR检测后发现，Lnc-DC表达升高最为明显。图3他莫昔芬耐药的乳腺癌MCF-7细胞(称为MCF-7R细胞)检测Lnc-DC表达水平。图3显示不同类型细胞Lnc-DC表达水平，他莫昔芬耐药的乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7R)高表达Lnc-DC。BS：筛选前；AS：筛选后；ASR：筛选后他莫昔芬耐药细胞。图4高表达Lnc-DC的MCF-7细胞(称为MCF-7lnc-DC+)，通过Annexin-V-7-AAD检测MCF-7、MCF-7R及MCF-7lnc-DC+细胞对他莫昔芬的耐药能力。相比于普通MCF-7细胞，MCF-7R细胞及MCF-7lnc-DC+细胞对他莫昔芬凋亡诱导敏感性显著下降。图5MCF-7细胞高表达Lnc-DC后(成为MCF-7lnc-DC+)，通过TUNEL试验检测他莫昔芬对MCF-7lnc-DC+凋亡的影响。相比于普通MCF-7细胞，MCF-7R细胞及MCF-7lnc-DC+细胞对他莫昔芬凋亡诱导敏感性显著下降。图6为Lnc-DC不同表达水平的乳腺癌晚期患者复发-时间曲线(relapse-freesurvival)。较早复发的患者Lnc-DC表达水平明显高于较晚复发的患者。具体实施方式下面结合具体的实施案例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。本专利技术人发现了Lnc-RNA在乳腺癌他莫昔芬耐药中的重要作用及相应的生物学功能、机制，可以用于预测乳腺癌患者的预后，为开发新的靶向药物提供选择。本专利技术人发现，所述Lnc-RNA分子Lnc-DC可以通过抑制他莫昔芬诱导的乳腺癌细胞凋亡进而促进其对他莫昔芬耐药，因此可以用于制备提高乳腺癌患者预后的药剂。本专利技术人发现了一种可以引起乳腺癌他莫昔芬耐药的Lnc-RNA，为Lnc-DC，其核苷酸序列为SEQIDNO.1。本专利技术人发现所述Lnc-RNA分子Lnc-DC在他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞中高表达。因此，上述Lnc-RNA分子Lnc-DC可以应用于预测乳腺癌他莫昔芬敏感性。为了筛选对他莫昔芬有效的患者，需要选取Lnc-RNA分子Lnc-DC低表达的那些乳腺癌患者，将乳腺癌患者区分为Lnc-RNA分子Lnc-DC高表达和Lnc-DC低表达组。为了检测Lnc-RNA分子Lnc-DC的表达情况，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非编码Lnc‑RNA分子Lnc‑DC在制备区分乳腺癌患者的检测剂中的应用，所述Lnc‑DC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种非编码Lnc-RNA分子Lnc-DC在制备区分乳腺癌患者的检测剂中的应用，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种非编码Lnc-RNA分子Lnc-DC在制备预测乳腺癌患者预后的检测剂中的应用，所述Lnc-DC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求2所述的应用，所述乳腺癌患者经他莫昔芬治疗。4.根据权利要求1或2的应用，所述检测剂包括用于检测所述Lnc-RNA分子Lnc-DC的表达情况的引物或探针，或者包括所述引物或探针的试剂盒。5.根据权利要求4所述的应用，所述检测剂包括引物对SEQIDNO.2和SEQIDNO.3；或者选自SEQIDNO.4至S...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪超，杨柳，胡晓歌，莫寅元，周怀香，
申请(专利权)人：浙江省人民医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33