一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法及其用途技术

本发明专利技术属生物医药和基因工程领域，涉及一种建立TRAMP小鼠高脂饮食模型的方法及其在用于预防和治疗前列腺癌过程研究平台中的应用。本发明专利技术建立以40%脂肪供能饲料为干预措施、以转基因前列腺癌小鼠（TRAMP）为基础的前列腺癌肥胖模型，该模型小鼠前列腺组织肿瘤形成，分化和转移均高于普通饲料喂养的TRAMP小鼠，通过物理学测量、血液生化检查、影像学检查等综合手段，评估前列腺癌肥胖模型的稳定性，建立一个前列腺癌发生与发展中肥胖相关因素的客观、统一、稳定、精准的模型和实验平台，该模型能较好反映高脂饮食对前列腺癌发生发展的影响，在前列腺癌机制研究以及相应的药物筛选、药效评估领域具有广泛的应用价值。

Establishment and application of a high fat diet model for prostate cancer

The invention belongs to the field of biomedicine and genetic engineering, and relates to a method for establishing a TRAMP mouse high-fat diet model and its application in a research platform for prostate cancer prevention and treatment. The invention establishes a prostate cancer obesity model based on transgenic prostate cancer mice (TRAMP) with 40% fat-fed diet as intervention measure. The tumor formation, differentiation and metastasis of prostate tissue in the model mice are higher than those in the TRAMP mice fed with ordinary diet. The model mice are examined by physical measurement, blood biochemical examination and imaging examination. To evaluate the stability of the obesity model of prostate cancer and establish an objective, unified, stable and accurate model and experimental platform of the obesity-related factors in the occurrence and development of prostate cancer. The field of drug screening and drug efficacy evaluation has wide application value.

【技术实现步骤摘要】
一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法及其用途
本专利技术属生物医药和基因工程领域，涉及高脂饮食模型的建立方法，具体涉及一种建立TRAMP小鼠高脂饮食模型的方法及其在用于预防和治疗前列腺癌过程中的应用。
技术介绍
转基因前列腺癌小鼠（transgenicadenocarcinomaofmouseprostate,TRAMP）模型是目前最常使用的转基因前列腺癌模型之一，1995年Greenberg等首先报道该动物模型的建立，其包括，通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤，T抗原在4-6周即开始表达，SV40产生的肿瘤蛋白可阻断抑癌基因P53和RB通路，从而导致肿瘤形成，以及病理进展与人前列腺癌类似（GreenbergNMetal.1995,GingrichJRetal.1996）。资料显示，高脂肪、高蛋白、高热量摄入是西方饮食习惯的主要特点，长期高脂饮食会导致代谢综合征(metabolicsyndrome,MS)的发生，即肥胖、高血压、高血糖、血脂异常等多种代谢危险因素在同一个体中同时存在的临床症候群，包括胰岛素抵抗、代偿性高胰岛素血症、激素水平失调、血液高凝和全身慢性炎症状态等(PuYSetal.2004)。众多研究发现高脂饮食与前列腺癌发生进展密切相关(LundHLetal.2006,DeNunzioCetal.2011)，表现为增加前列腺癌的发生率，并增加肿瘤的侵袭和转移。研究显示，高脂饮食和肥胖促进前列腺癌发生和进展，其机制是复杂且互相关联的，在众多机制中，机体循环雄激素水平(SeveriGetal.2006)、胰岛素及胰岛素样生长因子-1(insulin-likegrowthfactor-1,IGF-1)(RowlandsMAetal.2012)、炎症因子(KunduJKetal.2008)、脂肪因子(RajalaMWetal.2003)等表达水平的改变越来越受到重视。研究表明高脂饮食导致肥胖，会造成体内白色脂肪组织慢性炎症过程，表现为脂肪细胞肥大增生，且前脂肪细胞增多，直接导致局部和体循环的脂肪因子增多，介导免疫过程和促炎、促瘤微环境(Vona-DavisLetal.2009)；白色脂肪组织可以分泌超过50种不同的细胞因子(BalistreriCRetal.2010)，包括IL-6、IL-8、IL-1β、IL-17、TNF-α、VEGF、CCL-2、CCL-5等，有助于促有丝分裂、促血管新生、召集免疫细胞，除此之外，还具有刺激上皮间质转变(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)、增加肿瘤细胞侵袭、增加脂肪细胞和肿瘤干细胞的交互作用等；研究进一步发现，肥胖者中除局部脂肪组织中细胞因子含量发生变化，血清中循环的促炎症细胞因子水平也有明显上升，如TNF-α、IL-6、IL-8、VEGF等，可能对远处促瘤转移环境的形成造成重要影响。目前业内关于肥胖和前列腺癌诊断、病理结局、预后等关系尚未明确，尤其在亚洲人群中报道较少；且肥胖和高脂饮食对前列腺癌影响的相关机制尚未完全阐明，尤其是高脂饮食介导的体内循环细胞因子变化。基于此，本申请的专利技术人拟提供一种TRAMP小鼠高脂饮食模型的建立方法，进一步用于研究前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于居于现有技术的现状，提供一种转基因前列腺癌小鼠（transgenicadenocarcinomaofmouseprostate,TRAMP）小鼠高脂饮食模型的建立方法，进一步用于建立前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等研究平台。鉴于现有技术公开的的不同规格饲料诱导小鼠肥胖的效果相差较大，且因缺乏客观、统一、稳定、精准的前列腺癌肥胖模型，使得不同研究之间的可比性降低，可信度不高；另外，传统的细胞学实验难以模拟肥胖引起的内环境变化，而利用裸鼠移植瘤模型进行肥胖建模又难以模仿前列腺癌的发生过程等等缺陷；本专利技术建立以40%脂肪供能饲料为干预措施、以转基因前列腺癌小鼠（TRAMP）为基础的前列腺癌肥胖模型，通过物理学测量、血液生化检查、影像学检查等综合手段，评估前列腺癌肥胖模型的稳定性，建立一个为研究前列腺癌发生与发展中肥胖相关因素的客观、统一、稳定、精准的模型和实验平台，为进一步深入研究前列腺癌发生与发展的机制奠定基础。本专利技术的一种转基因前列腺癌小鼠高脂饮食模型的建立方法，其包括，构建TRAMP前列腺癌小鼠模型以及构建TRAMP小鼠高脂饮食模型。本专利技术中，基于C57BL/6品系的小鼠模型建立前列腺癌肥胖小鼠模型；本专利技术中，通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤。具体的，本专利技术的一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法，通过以下技术方案实现：1）小鼠出生后即断趾进行基因检测，基因型检测采用PCR方法，采用Sv40引物和tcrd引物作为内参，Sv40上游引物CAGAG-CAGAATTGTGGAGTGG，下游引物GGACAAACCA-CAACTAGAATGCAGTG，内参tcrd上游引物：CAAATGTTGCTTGTCTGGTG，下游引物：GTCAGTC-GAGTGCACAGTTT，PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小确定基因型；子代小鼠均行基因型检测，保留带有目标基因雄鼠，其余小鼠按常规另处理；2）采用携带基因的雄鼠为实验所需小鼠，小鼠出生20天断奶后分笼，并随机分入实验组（高脂饲料喂养组）和对照组（普通饲料喂养组）进行饲料喂养，高脂饲料成分如表1所示；表1：高脂饲料信息结果显示，本方法中通过喂养TRAMP小鼠40%脂肪供能的肥胖诱导饲料，能显著地促进TRAMP小鼠体重的增加，且具有如下有益的技术效果：（1）、本专利技术提供的TRAMP小鼠肥胖模型建立方法建模操作简单，成功率高（超过80%）；（2）、本专利技术提供的TRAMP小鼠肥胖模型不依赖于宿主免疫缺陷或特定的遗传学背景；（3）、本专利技术提供的TRAMP小鼠肥胖模型中的组织与血清标本可用于检测多种肿瘤标志物，比较实验组与对照组差异，用途广泛；（4）、本专利技术建立的的TRAMP小鼠肥胖模型可进一步用于抗肿瘤药物筛选和药物安全性评价等，如相应的药物筛选、药效评估等研发领域。本专利技术提供了一种简便实用的转基因前列腺癌小鼠高脂饮食模型的建立方法，可进一步用于建立前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等研究平台。附图说明图1显示TRAMP小鼠基因型检测结果，其中，根据PCR结果，以tcrd作为内参，见1、2号小鼠在474bp阳性条带，验证SV40Tag阳性，即该TRAMP小鼠携带SV40Tag基因；而3、4号小鼠为阴性，即该TRAMP小鼠未携带SV40Tag基因。图2显示大体解剖：TRAMP前列腺癌局部巨大包块、精囊侵犯。图3显示Micro-CT：TRAMP前列腺癌局部占位，肺部转移灶。图4TRAMP小鼠前列腺HE染色(200X光镜)，确诊为前列腺癌，证实成瘤。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。除非另有描述，本专利技术的实施将采用免疫学本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法，其特征在于，其包括，构建TRAMP前列腺癌小鼠模型以及构建TRAMP小鼠高脂饮食模型；其中，基于C57BL/6品系的小鼠模型建立前列腺癌肥胖小鼠模型；通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤。

【技术特征摘要】
1.一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法，其特征在于，其包括，构建TRAMP前列腺癌小鼠模型以及构建TRAMP小鼠高脂饮食模型；其中，基于C57BL/6品系的小鼠模型建立前列腺癌肥胖小鼠模型；通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建TRAMP前列腺癌小鼠模型方法中包括：1）小鼠基因检测，基因型检测采用PCR方法，采用Sv40引物和tcrd引物作为内参，Sv40上游引物CAGAG-CAGAATTGTGGAGTGG，下游引物GGACAAACCA-CAACTAGAATGCAGTG，内参tcrd上游引物：CAAATGTTGCTTGTCTGGTG，下游引物：GTCAGTC-GAGTGCACAGTTT，PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小确定基因型；子代小鼠均行基因型检测，保留带有目标基因雄鼠；2）采用携带目标基因的雄鼠为...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜昊文，许华，胡吉梦，胡梦博，杨天，朱文辉，刘宇飞，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31