鱼藤酮在胰岛保护中的应用制造技术

本发明专利技术公开了鱼藤酮在胰岛保护中的应用，具体涉及鱼藤酮在I型糖尿病中的胰岛保护作用的应用。鱼藤酮能降低I型糖尿病小鼠随机血糖值，增加I型糖尿病小鼠血清及胰岛组织中的胰岛素水平，减少I型糖尿病小鼠胰岛组织的细胞凋亡，减少STZ诱导的及细胞因子混合物诱导的小鼠胰岛β细胞系Min 6的细胞凋亡。

Application of rotenone in the protection of islets

The invention discloses the application of rotenone in islet protection, in particular to the application of rotenone in islet protection in type I diabetes mellitus. Rotenone can decrease the random blood glucose level, increase the insulin level in serum and islet tissue, reduce the apoptosis of islet tissue, and decrease the apoptosis of islet beta cell line Min 6 induced by STZ and cytokine mixture.

【技术实现步骤摘要】
鱼藤酮在胰岛保护中的应用
本专利技术属于药物
，具体涉及鱼藤酮在胰岛保护作用的应用。具体涉及鱼藤酮在I型糖尿病中的胰岛保护作用的应用。技术背景胰岛pancreaticislets(langerhans)是胰的内分泌部分，是许多大小不等和形状不定的细胞团，散布在胰的各处，可控制碳水化合物的代谢。人类的胰岛细胞按其染色和形态学特点，主要分为α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞约占胰岛细胞的20％，分泌胰高血糖素(glucagon)；β细胞占胰岛细胞的60％-70％，分泌胰岛素(insulin)；γ细胞占胰岛细胞的10％，分泌“生长抑素”；PP细胞数量很少，分泌胰多肽(pancreaticpolypeptide)；胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，胰岛素分泌减少，或者胰岛素作用下降，会机体血糖升高，引发糖尿病。临床上糖尿病可分为两类：I型糖尿病是一类因自身免疫系统缺陷导致的胰岛β细胞损伤，使之不能正常分泌胰岛素；II型糖尿病是一种由胰岛素敏感性下降所引发的糖脂代谢紊乱疾病。I型糖尿病(Type1diabetesmellitus，T1DM)是常见于青少年儿童的自身免疫性疾病，由于自身免疫系统过强导致胰岛β细胞损伤，引起胰岛细胞破坏、胰岛素绝对缺乏缺乏。根据国际糖尿病联合会(InternationalDiabetesFederation，IDF)2015年发布的数据，全世界约有约4.15亿糖尿病患者，其中T1DM约占5-10％。糖尿病疾病后期可进一步引发心脑血管、肾脏、神经系统等并发症，严重影响患者的生活质量甚至导致死亡。目前，I型糖尿病的治疗方法多采用胰岛素进行降血糖治疗，而在前期胰岛损伤阶段尚缺乏有效的干预手段。I型糖尿病与II型糖尿病病因不同(I型糖尿病病因为各种原因导致的β细胞彻底损伤；而II型糖尿病患者其体内β细胞产生胰岛素的能力并未丧失，而是机体对其胰岛素产生抵抗)，且目前用于II型糖尿病的口服降糖药噻唑烷二酮、格列奈类药物等仅对2型糖尿病病人有效，对I型糖尿病人无效。因此急需研发用于I型糖尿病的治疗药物。鱼藤酮是一种特异性的线粒体呼吸链复合物Ⅰ抑制剂，存在于豆科植物，如鱼藤属、尖荚豆属、灰叶属等植物中。本研究从体内、外证明低剂量鱼藤酮可保护胰岛细胞，同时降低血糖，是一种潜在的I型糖尿病治疗药物。目前尚无鱼藤酮用于I型糖尿病治疗的任何报道。鱼藤酮化学结构式
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了如下方案：鱼藤酮在制备胰岛保护的药物中的应用，所述的胰岛保护作用可以是降低胰岛损伤并降低血糖水平。特别是，鱼藤酮在制备针对I型糖尿病患者的胰岛保护作用的药物中应用，从而为I型糖尿病治疗提供一种新的候选化合物。上述所说的应用，具体的可以是鱼藤酮显著降低I型糖尿病患者的胰岛损伤并降低血糖水平。而且，可以是将鱼藤酮制成I型糖尿病药物的组合物。通过药效试验证明，鱼藤酮能降低I型糖尿病小鼠随机血糖值，增加I型糖尿病小鼠血清及胰岛组织中的胰岛素水平，减少I型糖尿病小鼠胰岛组织的细胞凋亡，减少STZ诱导的及减少细胞因子混合物诱导的小鼠胰岛β细胞系Min6的细胞凋亡，鱼藤酮减少细胞因子诱导的小鼠胰岛β细胞系Min6的细胞凋亡。因此，鱼藤酮应用于胰岛保护特别是I型糖尿病患者的胰岛保护具有显著效果。附图说明图1是鱼藤酮(100ppm)饲料的安全性评价图。图2是鱼藤酮降低I型糖尿病小鼠随机血糖值图。图3鱼藤酮增加I型糖尿病小鼠血清及胰岛组织中的胰岛素水平图。图3A为小鼠血清胰岛素浓度(ng/mL)图。图3B为WesternBlot法检测的小鼠胰岛组织的胰岛素水平图。图3C为小鼠胰岛组织的胰岛素免疫组化染色的镜下图。图4鱼藤酮减少I型糖尿病小鼠胰岛组织的细胞凋亡图。图4A为促凋亡基因BAX的mRNA表达相对值。图4B为抗凋亡基因BCL-2的mRNA表达相对值。图4C为WesternBlot法检测的小鼠胰岛组织中的凋亡蛋白Caspase3的原型及活性剪切体水平图。图5CCK8法检测小鼠胰岛β细胞的鱼藤酮安全浓度图。图6鱼藤酮减少STZ诱岛的小鼠胰岛β细胞系Min6的细胞凋亡图。图6A的横、纵坐标分别表示所检测细胞的FITC及PI荧光强度。图6B的纵坐标表示细胞凋亡率(％)。图7鱼藤酮减少细胞因子混合物诱导的小鼠胰岛β细胞系Min6的细胞凋亡图。图7A的横、纵坐标分别表示所检测细胞的FITC及PI荧光强度。图7B的纵坐标表示细胞凋亡率(％)。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。本专利技术实施例中所使用的生物材料和试剂，如无特别说明均可从市售渠道获得。实施例1鱼藤酮(100ppm混匀于饲料进食)的安全性评价1实验材料本专利技术使用的C57BL/6种属小鼠购自于南京医科大学实验动物中心；本专利技术使用鱼藤酮(Rotenone，ROT，纯度≥95％)购自Sigma-Aldrich公司。100ppm鱼藤酮饲料(100mg鱼藤酮均匀混合至400g饲料粉中，使用600mL琼脂粉水溶液(2％,m/v)糖混匀成型)；对照组小鼠所用饲料是以相同方法配制的不含药饲料。2实验方法2.1动物给药方法雄性C57BL/6小鼠30只(7周龄，体重20-24g)适应性饲养1周后随机分为Ctrl组(n＝7)和ROT组(n＝7)。实验前动物自由进食，维持12小时光照和12小时黑暗的昼夜节律。实验室温度：20-25℃，湿度50±5％。分组后，ROT组小鼠使用含100ppm鱼藤酮饲料饲养4天，对照组给予相同配制方法的不含药饲料饲养。实验数据证实小鼠每天进食不超过5g饲料，以小鼠25g体重估算，药物使用剂量不超过20mg/kg/d。2.2血清生化检测收集各组别的小鼠全血样本，室温静置1～2h，于4000rpm离心10min，转移上清得到血清样本测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及乳酸脱氢酶(LDH)水平。3实验结果对照组与鱼藤酮组小鼠体重(图1A)、肝损伤指标(血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶)(图1B-C)、肾损伤指标(血清肌酐、尿素氮)(图1D-E)及心脏毒性指标(血清乳酸脱氢酶)(图1F)水平均无差异。说明100ppm鱼藤酮饲料饲养小鼠为安全剂量，在小鼠中以该方式给药无肝脏、肾脏及心脏毒性。实施例2鱼藤酮降低I型糖尿病小鼠随机血糖值1实验材料本专利技术使用的C57BL/6种属小鼠购自于南京医科大学实验动物中心；本专利技术使用的链脲佐菌素(Streptozocin，STZ，纯度98％)与柠檬酸钠均购自Sigma-Aldrich公司。STZ使用柠檬酸钠溶液(pH＝4.0)溶解，现配现用。2实验方法2.1I型糖尿病小鼠模型建立及给药方法雄性C57BL/6小鼠30只(6-8周龄，体重20-24g)随机分为Ctrl组(n＝7)和实验组(n＝23)。所有模型组小鼠在禁食6h后给予50mg/kg的剂量腹腔注射STZ，每天一次，连续注射5天。相应地，对照组注射相同体积的柠檬酸钠溶液，每天一次，连续注射5天。注射结束一周后，连续三天于相同时间测定所有小鼠的血糖水平，三天平均血糖高于15mM的小鼠视为造模成功。按照血糖水平，将实验组小鼠平均分配至STZ组(n＝10)与STZ+RO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鱼藤酮在制备胰岛保护的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.鱼藤酮在制备胰岛保护的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的胰岛保护作用是降低胰岛损伤并降低血糖水平。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的胰岛保护作用是针对I型糖尿病患者的胰岛保护作用。4.鱼藤酮在制备降低I型糖尿病小鼠随机血糖值的药物中的应用。5.鱼藤酮在制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾占军，吴梦秋，张爱华，张玥，麻昊阳，陈维宜，
申请(专利权)人：南京市儿童医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32