用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于蝙蝠蛾拟青霉Cs‑4的培养基及其制备方法，包括种子培养基和液体发酵培养基，种子培养基的组分有葡萄糖、蛋白胨、麸皮、无机盐和氨基酸，液体发酵培养基的组分有热榨豆饼粉、葡萄糖、蔗糖、无机盐、氨基酸、维生素B1、腺嘌呤和三七粉。该培养基的制备方法简单，适合工业化大生产。在不同阶段，使用不同培养基，有利于菌株的生长。培养基中添加氨基酸、维生素B1和腺嘌呤，Cs‑4的菌丝体生长旺盛，制备得到的虫草菌粉中的腺苷、总氨基酸、麦角甾醇及甘露醇的含量高。三七粉加入培养基后，能被菌株利用，在菌粉中能检测到三七皂苷和人参皂苷，同时菌粉中原有活性成分的含量也提高，虫草菌粉的药用价值明显提高。

Culture medium for Paecilomyces Paecilomyces Cs-4 and its preparation method

The present invention relates to a culture medium for Paecilomyces batmoth Cs_4 and a preparation method thereof, including a seed medium and a liquid fermentation medium. The components of the seed medium are glucose, peptone, bran, inorganic salt and amino acid. The components of the liquid fermentation medium are hot pressed bean cake powder, glucose, sucrose and inorganic salt. Amino acids, vitamin B1, adenine and 37 powder. The preparation method of the medium is simple and suitable for industrial production. Using different media at different stages is beneficial to the growth of the strain. The mycelium of Cs_4 grew vigorously when amino acid, vitamin B1 and adenine were added to the culture medium. The content of adenosine, total amino acid, ergosterol and mannitol in Cordyceps sinensis powder was high. Panax Notoginseng Powder can be used by the strains after adding to the culture medium. Panax notoginseng saponins and ginsenosides can be detected in the bacterial powder. Meanwhile, the content of the original active ingredients in the bacterial powder is also increased, and the medicinal value of Cordyceps sinensis powder is obviously improved.

【技术实现步骤摘要】
用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基及其制备方法
本专利技术属于微生物学领域，尤其涉及用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基及其制备方法。
技术介绍
冬虫夏草是药用名，是动物和真菌类的综合体，为麦角菌科植物冬虫夏草菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科昆虫虫萆蝙蝠蛾等的幼虫尸体的复合体。冬虫夏草由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体。冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死；到了夏季，自幼虫尸体之上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得。冬虫夏草主要活性成分是虫草素、虫草腺苷，具有免疫调节、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。现代研究发现，冬虫夏草含有蛋白质、脂肪、粗纤维、碳水化合物、多种维生素、虫草素、虫草酸、多种氨基酸及铁、磷、钙、锌、锰、硒等人体必需的元素。药理试验证实，冬虫夏草具有调节机体免疫力、增强身体素质、延缓衰老、增强耐缺氧能力、抗肾损伤、抗病原微生物、平喘祛痰、升高白细胞等作用。同时，虫草还有较好的镇静、镇痛作用，能够减轻肿瘤发作时的疼痛和化疗的不良反应。随着人民生活水平的提高，对于大健康产业的关注度越来越高，对于冬虫夏草的药理功效也有了广泛的认知，对其需求量也达到供不应求的状态。作为冬虫夏草的替代品虫草菌粉也应运而生，虫草菌粉是以蝙蝠蛾拟青霉PaccilomyceshepialiCs-4为菌种，经过培养基的扩大培养，再经深层发酵而得。虫草菌粉的质量主要取决于虫草菌丝体的质量，菌丝体是菌株扩大培养和发酵培养后的产物，培养基对Cs-4菌株的生长至关重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基，为Cs-4菌株的生长提供丰富的营养，促进Cs-4虫草菌丝体的形成，提高菌丝体中腺苷和麦角甾醇等活性成分的含量。同时，培养基中添加三七粉，得到的Cs-4菌丝体不仅具备虫草原有的药用功效，还具备三七皂苷尤其是人参皂苷的药理用途。具体来说，针对现有技术的不足，本专利技术提供了如下技术方案：一种用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基，包括种子培养基和液体发酵培养基，所述种子培养基包括：葡萄糖、蛋白胨、麸皮、无机盐和氨基酸，所述液体发酵培养基包括：热榨豆饼粉、葡萄糖、蔗糖、无机盐、氨基酸、维生素B1和腺嘌呤。种子培养基中添加氨基酸，促进菌株生长，保证了传代的稳定性。各级发酵培养基的组成略有不同，满足菌株在不同生长阶段的营养需求。培养基中添加腺嘌呤，发酵培养Cs-4菌株，制备得到的虫草菌粉中的腺苷含量明显提高，麦角甾醇、总氨基酸和甘露醇的含量也提高。优选地，所述无机盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、氯化镁、硫酸锌、氯化锌、氯化钠和氯化钙中的一种或几种，氨基酸选自组氨酸、精氨酸、甘氨酸和L-谷氨酸中的一种或几种。优选地，所述种子培养基包括斜面培养基和摇瓶培养基，其中，按重量体积g/mL计，斜面培养基包括：葡萄糖2-4％、蛋白胨0.2-0.4％、麸皮0.4-0.8％、磷酸二氢钾0.1-0.3％、硫酸镁0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.3％、琼脂2-4％，水余量；摇瓶培养基包括：葡萄糖1-5％、蛋白胨0.2-0.4％、麸皮0.4-0.6％、鱼骨粉0.2-0.3％、磷酸二氢钾0.1-0.3％、硫酸镁0.03-0.05％、硫酸锌0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.3％，水余量。优选地，所述液体发酵培养基中还含有三七粉。添加三七粉后，发酵培养得到的虫草菌粉在具备原有虫草功效的同时，还具备三七皂苷、人参皂苷的功效。此外，发酵培养基中同时添加腺嘌呤和三七粉后，麦角甾醇的含量明显提高，三七皂苷的含量相比单独加三七粉、不加腺嘌呤时，也得到提高。优选地，所述液体发酵培养基包括种子罐培养基、繁殖罐培养基和发酵罐培养基，其中，按重量体积g/mL计，种子罐培养基包括：热榨豆饼粉2-4％、葡萄糖2-4％、蔗糖2-4％、磷酸二氢钾0.2-0.4％、硫酸镁0.05-0.1％、硫酸锌0.05-0.1％、组氨酸0.1-0.2％、维生素B10.02-0.3％、腺嘌呤0.05-0.2％和豆油0.1-0.2％，水余量。优选地，所述液体发酵培养基包括种子罐培养基、繁殖罐培养基和发酵罐培养基，其中，按重量体积g/mL计，繁殖罐培养基包括：热榨豆饼粉2-4％、葡萄糖2-4％、蔗糖2-4％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、硫酸镁0.04-0.06％、硫酸锌0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.2％、甘氨酸0.1-0.2％、维生素B10.02-0.3％、腺嘌呤0.05-0.2％和豆油0.2-0.3％，水余量。优选地，所述液体发酵培养基包括种子罐培养基、繁殖罐培养基和发酵罐培养基，其中，按重量体积g/mL计，发酵罐培养基包括：热榨豆饼粉3-4％、葡萄糖1-2％、蔗糖1-2％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、硫酸镁0.04-0.06％、硫酸锌0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.2％、甘氨酸0.1-0.2％、维生素B10.02-0.3％、腺嘌呤0.1-0.2％和豆油0.2-0.3％，水余量。优选地，所述液体发酵培养基中含有三七粉，其中，发酵罐培养基的组成为：热榨豆饼粉4％、葡萄糖2％、蔗糖1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.03％、组氨酸0.1％、甘氨酸0.1％、维生素B10.05％、腺嘌呤0.15％、豆油0.2％和三七粉1％，水余量。本专利技术还提供了培养基的制备方法，其中，斜面培养基的制备方法包括以下步骤：(1)称量麸皮，加水煮沸，过滤得到滤液；(2)将蛋白胨加入滤液中，加热、搅拌，直至溶解；(3)加入除琼脂外的其他培养基组分，加热和/或加水溶解后，加水定容；(4)加热条件下，往步骤(3)配制好的溶液中加入琼脂；(5)分装配制好的培养基，然后灭菌；摇瓶培养基的制备方法与斜面培养基的制备方法的区别在于没有步骤(4)加入琼脂的过程；液体发酵培养基的制备方法为量取50％的水，往其中加入各培养基组分，加热溶解后，加水定容，然后灭菌。优选地，在称量麸皮之前，先将麸皮过40目筛，所述灭菌为高压蒸汽灭菌，压力为0.09-0.12MPa，温度为120±1℃，时间为30-40分钟。与现有技术相比，本专利技术的效果和益处在于：(1)种子培养基和发酵培养基的组成不同，试验证明斜面培养基适合Cs-4菌株生长，保证了传代的稳定性，为之后的发酵培养提供优良种子。各级发酵培养基的组成也略有不同，保证了不同阶段菌株生长的营养供应，得到的菌丝体产量高，营养价值高。(2)相比普通的豆饼粉，热榨豆饼粉中的脂质含量少，Cs-4菌株能够更好地利用热榨豆饼粉中的蛋白质，原料利用率高。液体发酵培养基中除基础营养外，还添加了氨基酸、维生素B1和腺嘌呤，发酵培养的Cs-4菌株的菌丝体生长旺盛，收率比普通培养基培养的菌丝体收率高。由于腺嘌呤是腺苷生物合成的前体物质，因此利用添加腺嘌呤的培养基发酵得到的虫草菌丝体中的腺苷含量明显增加。检测结果显示，发酵培养得到的虫草菌丝体中的麦角甾醇、甘露醇和氨基酸总含量也提高。(3)培养基中添加三七粉后，Cs-4菌株生长过程中对三七粉中的三七总皂苷进行了生物转化，发酵结束后，在发酵产物中能检测到单体皂苷。因此，Cs-4菌丝体不仅具备虫草原有的药用功效，还具备单体皂苷尤其是人参皂苷的药理用途。发酵培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于蝙蝠蛾拟青霉Cs‑4的培养基，包括种子培养基和液体发酵培养基，其特征在于，所述种子培养基包括：葡萄糖、蛋白胨、麸皮、无机盐和氨基酸，所述液体发酵培养基包括：热榨豆饼粉、葡萄糖、蔗糖、无机盐、氨基酸、维生素B1和腺嘌呤。

【技术特征摘要】
1.用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基，包括种子培养基和液体发酵培养基，其特征在于，所述种子培养基包括：葡萄糖、蛋白胨、麸皮、无机盐和氨基酸，所述液体发酵培养基包括：热榨豆饼粉、葡萄糖、蔗糖、无机盐、氨基酸、维生素B1和腺嘌呤。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述无机盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、氯化镁、硫酸锌、氯化锌、氯化钠和氯化钙中的一种或几种，氨基酸选自组氨酸、精氨酸、甘氨酸和L-谷氨酸中的一种或几种。3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述种子培养基包括斜面培养基和摇瓶培养基，其中，按重量体积g/mL计，斜面培养基包括：葡萄糖2-4％、蛋白胨0.2-0.4％、麸皮0.4-0.8％、磷酸二氢钾0.1-0.3％、硫酸镁0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.3％、琼脂2-4％，水余量；摇瓶培养基包括：葡萄糖1-5％、蛋白胨0.2-0.4％、麸皮0.4-0.6％、鱼骨粉0.2-0.3％、磷酸二氢钾0.1-0.3％、硫酸镁0.03-0.05％、硫酸锌0.03-0.05％、组氨酸0.1-0.3％，水余量。4.根据权利要求1-3任一项所述的培养基，其特征在于，所述液体发酵培养基中还含有三七粉。5.根据权利要求1-3任一项所述的培养基，其特征在于，所述液体发酵培养基包括种子罐培养基、繁殖罐培养基和发酵罐培养基，其中，按重量体积g/mL计，种子罐培养基包括：热榨豆饼粉2-4％、葡萄糖2-4％、蔗糖2-4％、磷酸二氢钾0.2-0.4％、硫酸镁0.05-0.1％、硫酸锌0.05-0.1％、组氨酸0.1-0.2％、维生素B10.02-0.3％、腺嘌呤0.05-0.2％和豆油0.1-0.2％，水余量。6.根据权利要求1-3任一项所述的培养基，其特征在于，所述液体发酵培养基包括种子罐培养基、繁殖罐培养基和发酵罐培养基，其中，按重量体积g/mL计，繁殖罐培养基包括：热榨豆饼粉2-4％、葡萄糖2-4％...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴彪，万义斌，葛友群，左飞鸿，杨明，何琳，李进进，
申请(专利权)人：江西国药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江西,36