一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法，所述新型活化剂包括以下重量组分：20‑26％生物导电纳米纤维、1‑3％发电细胞、3‑4％凝胶混合溶液、9‑11％复合激动剂、12‑14％人工细胞膜、0.3‑0.8％细胞膜激活物、8‑10％特异性抗体，余量为培养基液；本发明专利技术利用一大部分生物导电纳米纤维对复合激动剂进行负载，然后再利用人工细胞膜进行包裹，最后利用细胞膜激活物处理活化后，结合特异性抗体；将发电细胞与凝胶混合溶液种植在另一小部分生物导电纳米纤维上，然后将两部分生物导电纳米纤维均放置入培养基液中构成免疫细胞扩增的新型活化剂。总之，本发明专利技术能将免疫细胞的体外增殖率提高10‑15倍。

A new activator for immune cell expansion and its preparation method

The invention discloses a novel activator for immunocyte amplification and a preparation method thereof. The new activator comprises the following weight components: 20_26% bioconductive nanofibers, 1_3% power generation cells, 3_4% Gel Mixed solution, 9_11% compound agonist, 12_14% artificial cell membrane, 0.3_0.8% cells. Membrane activator, 8_10% specific antibody, the remainder is culture medium; the invention uses a large part of bio-conductive nanofibers to load the composite agonist, and then uses the artificial cell membrane to wrap it, and finally uses the cell membrane activator to treat and activate, then combines the specific antibody; the power generation cells and the gel are mixed. The solution is planted on another small part of the bioconductive nanofibers, and then both parts of the bioconductive nanofibers are placed in the medium to form a new activator for immune cell amplification. In conclusion, the invention can increase the proliferation rate of immune cells in vitro by 10 to 15 times.

【技术实现步骤摘要】
一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法
本专利技术属于生物工程和生物医药领域，具体涉及一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法。
技术介绍
免疫细胞(immunecell)是白细胞的俗称，包括淋巴细胞和各种吞噬细胞等，也特指能识别抗原、产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛，主要是T淋巴细胞、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化(activation)，分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单核吞噬细胞系统的细胞。然而现在对于癌症的治疗，自身的免疫细胞已经不能够维持患者自身免疫系统的正常运行，因此需要进行自体免疫细胞回输治疗，就是将患者自身具有抗病毒和抗肿瘤活性的细胞在体外激活和扩增处理，选择性产生高效低毒的抗病毒、抗肿瘤免疫细胞，然后，将这些细胞回输到患者体内，从而达到清除病毒和杀灭肿瘤细胞的目的。人体内数量众多分工明确的免疫细胞在保持人体内环境中发挥重要作用。淋巴细胞是免疫细胞中的精锐部队，而抗原提呈细胞是免疫细胞中的雷达部队。抗原提呈细胞一旦探测到机体危险信号，将会传递给淋巴细胞，使其能够快速反应并前往危险地带排除危险。在肿瘤和慢性病毒性肝炎患者体内，免疫细胞数量及活力不足，不能及时探测到肿瘤细胞和病毒入侵信号，恶变的肿瘤细胞和入侵的病毒不能被及时清除，导致疾病进一步恶化。细胞治疗此时成了激活自身免疫力的钥匙。即细胞治疗将患者体内受抑制的免疫细胞，主要是淋巴细胞和抗原提呈细胞取出，经过体外复制、激活过程，使它们的数量和活性得到大幅度提高，然后再回输到患者体内，从而发挥抗病毒、抗肿瘤的效应。然而现有技术中的免疫细胞扩增的活化剂效果不太理想，培育扩增的免疫细胞数量低且质量差，并且用到的活化剂的成分随免疫细胞回输入患者体内，容易造成不良反应。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术提供一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法。本专利技术的技术方案为：一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，所述新型活化剂包括以下重量组分：20-26％生物导电纳米纤维、1-3％发电细胞、3-4％凝胶混合溶液、9-11％复合激动剂、12-14％人工细胞膜、0.3-0.8％细胞膜激活物、8-10％特异性抗体，余量为培养基液；生物导电纳米纤维能够为作为复合激动剂的载体，还能够使免疫细胞和发电细胞进行攀附；发电细胞能够放电模拟人体环境生物电，并且可刺激免疫细胞扩增，人工细胞膜经过细胞膜激活物处理后能够与更多的特异性抗体进行粘度，从而提高免疫细胞与特异性抗体的结合率，最终提高免疫细胞的意外扩增率。所述复合激动剂按照重量百分比包括：0.2-0.9％青蓝霉素A、0.1-0.3％环孢菌素、2-5％特异性半胱氨酸蛋白酶、1.3-2.5％银杏黄酮甙、3.6-5.4％白果内酯、0.7-1.4％三叶青提取物、0.4-0.7％木酚素、3.2-6.7％可溶性蛋白多糖，余量为白介素2；所述青蓝霉素A具有有效的抗真菌活性，并且青蓝霉素A能显著地增加T细胞上CTLA-4的表达以及随后下调CD28的表达；所述白果内酯、特异性半胱氨酸蛋白酶具有免疫调节活性，诱导免疫细胞扩增；银杏黄酮甙能够使免疫细胞处于兴奋状态，可有效抑制其进入休眠，进而促进免疫细胞进行扩增；三叶青提取物能够纠正免疫系统的紊乱；木酚素能够激活免疫细胞受体活性，并且还具有良好的抗氧化性；可溶性蛋白是重要的渗透调节物质和营养物质，他们的增加和积累能提高细胞的保水能力，对细胞的生命物质及生物膜起到保护作用，此外，可溶性蛋白多糖可作为乳化稳定剂，使复合激动剂中的各个成分进行均匀混合，并且增强其稳定性；所述培养基液按照重量百分比包括：4.5-6.8％脐带提取物、1.2-2.6％纤维蛋白原、0.5-1.2％凝血因子、0.3-0.6％三碘甲状腺原氨酸、3.5-5.0％％谷胱甘肽、4.7-5.3％壳寡糖、3.1-6.0％牛磺酸、2.0-4.5％维生素C、2.2-3.6％柠檬酸锌、1.5-3.7％尿囊素、2.6-4.9％不饱和脂肪酸、7.6-9.4％平衡盐溶液，余量为DMEM基础培养介质；脐带提取物能偶为免疫细胞以及发电细胞提供营养物质；尿囊素具有抗敏舒缓的作用，能够减小人体对体外扩增后的免疫细胞的过敏反应。进一步地，所述生物导电纳米纤维包括以下重量组份：40-60份碳纳米管、11-13份聚多巴胺、7-9份聚吡咯、30-50份N-甲基吡咯烷酮、24-35份丝素蛋白、13-22份胶原、8-10份乳酸乙醇酸共聚物，其中，丝素蛋白、胶原、乳酸乙醇酸共聚物具有良好的生物延展性，并且可降解，不会对人体及体外的细胞产生危害；碳纳米管、聚多巴胺、聚吡咯为导电材料，能够将发电细胞发电进行传导，进而促进免疫细胞进行扩增。更进一步地，所述生物导电纳米纤维的制备方法包括以下步骤：S1：将所述碳纳米管、聚多巴胺、聚吡咯溶解在所述N-甲基吡咯烷酮中，形成导电材料溶液；S2：将所述丝素蛋白、胶原、乳酸乙醇酸共聚物进行混合得到生物材料溶液；将所述导电材料溶液与所述生物材料溶液利用超声波进行分散混合均匀，得到生物导电材料溶液；S3：再利用静电纺丝技术将所述生物导电材料溶吹成生物导电纤维丝；S4：将所述生物导电纤维丝放置在真空干燥箱内，在60-80℃温度下低温干燥24-30h，即得生物导电纳米纤维。进一步地，所述发电细胞来自电鳗、电鳐、电鲶中的任意一种。进一步地，所述凝胶混合溶液是由水凝胶原蛋白胶、透明质酸、3D聚左旋乳酸按照重量比为3:1:0.5混合而成。进一步地，所述人工细胞膜是由以下重量组分组成：34-40％卵磷脂、12-15％胆固醇、0.1-0.5％抗坏血酸四异棕榈酸、1.2-2.3％维生素E酯、2.5-3.6％酯丙酮酸钠、1.3-1.8％鸟氨酸、1.0-1.6％脯氨酸、2.8-4.1％二硬脂酰磷脂酰甘油、余量为去离子水；所述维生素E酯具有抗氧化作用；鸟氨酸、脯氨酸作为亲水性辅助剂能覆盖在磷脂双层表面上，从而起到保护脂质体的作用。进一步地，所述新型活化剂的制备方法包括以下步骤：(1)负载复合激动剂：将所述白介素2、青蓝霉素A、环孢菌素、特异性半胱氨酸蛋白酶、银杏黄酮甙、白果内酯、三叶青提取物、木酚素、可溶性蛋白多糖按照上述比例进行混合，得到复合激动剂；再将所述生物导电纳米纤维裁切成2-5mm的生物导电纳米纤维棒并利用紫外线消毒处理10-20min，取消毒后的70-80％的生物导电纳米纤维棒与所述复合激动剂进行混合均匀，利用超声波进行分散负载，直至复合激动剂完全负载在生物导电纳米纤维棒上；(2)制备液态人工细胞膜：将卵磷脂、胆固醇、抗坏血酸四异棕榈酸、维生素E酯按照上述比例进行混合形成疏水性混合物，所述疏水性混合物以1:2-3的体积比溶解在混合有机溶剂中，得到预混物；将所述预混物进行蒸发处理，去除所述混合有机溶剂，得到磷脂膜；再将所述酯丙酮酸钠、鸟氨酸、脯氨酸、二硬脂酰磷脂酰甘油溶解于所述去离子水中，形成亲水性混合物；再将所述亲水性混合物与所述磷脂膜进行混合，机械搅拌3-5min，得到液态人工细胞膜；(3)包膜处理：将负载有复合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述新型活化剂包括以下重量组分：20‑26％生物导电纳米纤维、1‑3％发电细胞、3‑4％凝胶混合溶液、9‑11％复合激动剂、12‑14％人工细胞膜、0.3‑0.8％细胞膜激活物、8‑10％特异性抗体，余量为培养基液；所述复合激动剂按照重量百分比包括：0.2‑0.9％青蓝霉素A、0.1‑0.3％环孢菌素、2‑5％特异性半胱氨酸蛋白酶、1.3‑2.5％银杏黄酮甙、3.6‑5.4％白果内酯、0.7‑1.4％三叶青提取物、0.4‑0.7％木酚素、3.2‑6.7％可溶性蛋白多糖，余量为白介素2；所述培养基液按照重量百分比包括：4.5‑6.8％脐带提取物、1.2‑2.6％纤维蛋白原、0.5‑1.2％凝血因子、0.3‑0.6％三碘甲状腺原氨酸、3.5‑5.0％％谷胱甘肽、4.7‑5.3％壳寡糖、3.1‑6.0％牛磺酸、2.0‑4.5％维生素C、2.2‑3.6％柠檬酸锌、1.5‑3.7％尿囊素、2.6‑4.9％不饱和脂肪酸、7.6‑9.4％平衡盐溶液，余量为DMEM基础培养介质。

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述新型活化剂包括以下重量组分：20-26％生物导电纳米纤维、1-3％发电细胞、3-4％凝胶混合溶液、9-11％复合激动剂、12-14％人工细胞膜、0.3-0.8％细胞膜激活物、8-10％特异性抗体，余量为培养基液；所述复合激动剂按照重量百分比包括：0.2-0.9％青蓝霉素A、0.1-0.3％环孢菌素、2-5％特异性半胱氨酸蛋白酶、1.3-2.5％银杏黄酮甙、3.6-5.4％白果内酯、0.7-1.4％三叶青提取物、0.4-0.7％木酚素、3.2-6.7％可溶性蛋白多糖，余量为白介素2；所述培养基液按照重量百分比包括：4.5-6.8％脐带提取物、1.2-2.6％纤维蛋白原、0.5-1.2％凝血因子、0.3-0.6％三碘甲状腺原氨酸、3.5-5.0％％谷胱甘肽、4.7-5.3％壳寡糖、3.1-6.0％牛磺酸、2.0-4.5％维生素C、2.2-3.6％柠檬酸锌、1.5-3.7％尿囊素、2.6-4.9％不饱和脂肪酸、7.6-9.4％平衡盐溶液，余量为DMEM基础培养介质。2.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维包括以下重量组份：40-60份碳纳米管、11-13份聚多巴胺、7-9份聚吡咯、30-50份N-甲基吡咯烷酮、24-35份丝素蛋白、13-22份胶原、8-10份乳酸乙醇酸共聚物。3.如权利要求1或2所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维的制备方法包括以下步骤：S1：将所述碳纳米管、聚多巴胺、聚吡咯溶解在所述N-甲基吡咯烷酮中，形成导电材料溶液；S2：将所述丝素蛋白、胶原、乳酸乙醇酸共聚物进行混合得到生物材料溶液；将所述导电材料溶液与所述生物材料溶液利用超声波进行分散混合均匀，得到生物导电材料溶液；S3：再利用静电纺丝技术将所述生物导电材料溶吹成生物导电纤维丝；S4：将所述生物导电纤维丝放置在真空干燥箱内，在60-80℃温度下低温干燥24-30h，即得生物导电纳米纤维。4.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维包括以下重量组份：40-60份碳纳米管、11-13份聚多巴胺、7-9份聚吡咯、30-50份N-甲基吡咯烷酮、24-35份丝素蛋白、13-22份胶原、8-10份乳酸乙醇酸共聚物。5.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述发电细胞来自电鳗、电鳐、电鲶中的任意一种。6.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述人工细胞膜是由以下重量组分组成：...

【专利技术属性】
技术研发人员：王军，马玉春，李卓，
申请(专利权)人：大连金玛健康产业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21