细胞分选培养增殖容器及细胞分选培养增殖方法技术

本发明专利技术提供一种用于从组织、细胞群体将所期望的细胞高效地分选并培养增殖的技术，其操作简便且廉价，可稳定地实施。本发明专利技术涉及一种能密闭的细胞分选培养增殖容器，其包含如下单元而构成：细胞分选单元，其为：具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；第一次培养用单元，其为：具有能培养通过了所述细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，具有能将保持于该单元内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构的容器状结构体；以及，主体容器单元，其为：具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构的容器状结构体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞分选培养增殖容器及细胞分选培养增殖方法
本专利技术涉及一种能密闭的细胞分选培养增殖容器，详细而言，涉及一种用于从组织、细胞群体将所期望的细胞高效地分选并增殖的技术，其是一种操作简便且廉价，可稳定地实施的细胞分选培养增殖技术。
技术介绍
在生命科学领域中，用于将从组织等的细胞群体的任意细胞分选并增殖的技术为重要技术，特别是可高效地达成干细胞的分选培养的技术，在医疗领域中所瞩目的技术。其中，现有技术中的细胞分选法，可列举使用流式细胞术的方法或使用磁抗体珠的方法。但是，在利用流式细胞术或磁抗体珠的方法中，从装置、设备、原理等观点考虑，该方法在从廉价利用的观点考虑仍存在课题。另外，作为根本课题指出了如下课题:从安全性的观点考虑，如何符合临床上使用基准，即医药品及医药部外品的制造管理及质量管理的基准的相关省令(GMP)。作为使用流式细胞术分选对象的目标细胞的方法，例如为干细胞时，可列举如下方法:以DNA结合性色素标记SP细胞(源自齿髓的CD31-SP细胞)，分选出强烈排出该色素的部分。但是，在使用流式细胞术的方法中，被指出本身在细胞的安全性存在问题。另外，作为利用磁抗体珠的方法，例如，列举使用与骨髓干细胞用CD34或CD133膜表面抗原对应的抗体珠来分选目标细胞的方法，则具有由于分选用组织所含的干细胞的含有率不高而使得分选率低的问题。另外，由于抗体珠根据种类进行定制化，因此不认为是可廉价地实现的操作。因此，专利技术人等的研究团队以不使用流式细胞术或磁抗体珠而分选肝细胞的技术为目标，构思了一种利用趋化因子及膜分选器的技术(专利文献1)。其中，作为专利文献1所述的膜分选器，也可作为上部结构插入细胞培养内件(cellcultureinsert，法尔康(Falcon)公司制)等市售制品而使用。但是，若仅使用专利文献1所述的膜分选器，则在移植到用于进行增殖培养的其他容器时所导致的对细胞的刺激、损伤等的损失大，特别在对刺激敏感性强而容易丧失多能性的贵重的干细胞的分选增殖中，会成为细胞的品质及回收效率大幅降低的主要原因。另外，由于必须分别进行分选及增殖，因此在处理细胞的操作技术上必须熟练，分选效率会因操作者的熟练度而产生极大差异。另外，由于专利文献1所述的膜分选器是假定为开放形状构件的装置，因此有引起霉浆菌、病毒等感染以及来自其他细胞源的污染等风险的担忧。因此，有难以达成稳定的生产效率、难以得到实验结果的课题。现有技术文献专利文献专利文献1:国际专利申请WO2012/133803号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术是鉴于上述现有技术的情况而完成的，作为其课题的目的在于提供一种用于从组织、细胞群体将所期望的细胞高效地分选并培养增殖的技术，其操作简便且廉价，可稳定地实施。用于解决问题的方案在上述现有技术的状况中，专利技术人等重复地进行了深入研究，其结果是构思出一种涉及含有细胞分选单元、第一次培养用单元及主体容器单元而构成的能密闭的细胞分选培养增殖容器的技术，从而想到本专利技术。详细而言，所述细胞分选单元构思为如下构件构成:具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体。另外，所述第一次培养用单元构思为如下构件构成:具有能培养通过了所述细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，具有能将保持于该单元内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构的容器状结构体。另外，主体容器单元构思为如下构件构成:具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构的容器状结构体。本专利技术人等制造了具有上述结构的能密闭的细胞分选培养增殖容器。而且，使用该容器进行用于将对象细胞选择性分选的细胞分选工序，进行第一次培养工序、细胞剥离工序及增殖培养工序等一系列的操作，此时发现能在同一容器内通过简便的操作来实施所期望的对象细胞的分选与增殖培养。需要说明的是，该一系列的工序不需要用于在其他容器增殖培养的细胞移送操作等操作就可实施，且可在显著降低霉浆菌、病毒等感染、来自其他细胞源的污染等风险的状态下实施。该容器所具有的优异作用效果为:通过各构件单元所具有的特殊的结构及性质相互作用而首次被发挥的作用效果。进而，本专利技术人等想到了如下情况:作为上述结构的容器构成构件，通过使特定位置的构件采用透光性构件，不开封主体容器单位也可使用显微镜等实施容器内培养状态的实时观察。进而，本专利技术人等想到了如下情况:作为上述结构的容器构成构件，通过在主体容器配设可插入/插出中空管状构件的结构，不开封主体容器单位也能从细胞分选工序转移至第一次培养工序。进而，本专利技术人等想到了如下情况:作为上述结构的容器构成构件，通过能与主体容器单元的主体盖状部的操作连动而对细胞分选单元的细胞分选膜的位置进行调整，不开封主体容器单元也能从细胞分选工序转移至第一次培养工序。进而，本专利技术人等想到了如下情况:作为上述结构的容器构成构件，通过能与来自主体容器单元的外部的操作连动而使第一次培养用单元的释放结构调整为释放状态，不开封主体容器单元也能从第一次培养工序转移至增殖培养工序。本专利技术人等发现了:通过实施其中1种以上的上述方案的避免主体容器单元开封的方法，可进一步降低感染及污染的风险。另外，本专利技术人等进一步发现了:在具有上述结构的能密闭的细胞分选培养增殖容器中，作为培养用单元的培养面，在使用以具有刺激应答性细胞剥离作用的分子进行了表面修饰的所述基材时，从培养面细胞剥离将变得容易，能更简便地进行细胞移送。另外，本专利技术人等进一步发现了:作为细胞分选单元的细胞分选膜，在使用以亲水性聚合物进行了表面分子修饰的基材时，可大幅降低对象细胞于细胞分选膜的附着损失，可提升回收效率。本专利技术具体涉及以下所述的专利技术。[第一项]一种能密闭的细胞分选培养增殖容器，其为能将所期望的对象细胞分选并培养增殖的容器状结构体，其特征在于，(A)含有细胞分选单元、第一次培养用单元及主体容器单元而构成；(B)所述细胞分选单元为:具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；(C)所述第一次培养用单元为如下容器状结构体:具有能培养通过了所述细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，具有能将保持于该单元内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构；(D)所述主体容器单元为如下容器状结构体:具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构。[第二项]第一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述(B)所述的细胞分选单元为:(b-1)容器状结构体，且(b-2)在构成所述容器状结构体的面的至少一部分具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；所述(C)所述的第一次培养用单元为:(c-1)容器状结构体，且(c-2)具有在将液体填充于该容器状结构体内时，能以细胞分选膜面与填充的液面接触的状态配设所述细胞分选单元的结构，(c-3)在构成该容器状结构体的面的至少一部分具有能培养通过了细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，(c-4)在构成该容器状结构体的面具有能将保持于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能密闭的细胞分选培养增殖容器，其为能将所期望的对象细胞分选并培养增殖的容器状结构体，其特征在于，(A)含有细胞分选单元、第一次培养用单元及主体容器单元而构成；(B)所述细胞分选单元为：具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；(C)所述第一次培养用单元为如下容器状结构体：具有能培养通过了所述细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，具有能将保持于该单元内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构；(D)所述主体容器单元为如下容器状结构体：具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.26 JP 2015-2555111.一种能密闭的细胞分选培养增殖容器，其为能将所期望的对象细胞分选并培养增殖的容器状结构体，其特征在于，(A)含有细胞分选单元、第一次培养用单元及主体容器单元而构成；(B)所述细胞分选单元为：具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；(C)所述第一次培养用单元为如下容器状结构体：具有能培养通过了所述细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，具有能将保持于该单元内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构；(D)所述主体容器单元为如下容器状结构体：具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构。2.根据权利要求1所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述(B)所述的细胞分选单元为：(b-1)容器状结构体，且(b-2)在构成所述容器状结构体的面的至少一部分具备具有能分选细胞的微细孔的细胞分选膜而成的结构体；所述(C)所述的第一次培养用单元为：(c-1)容器状结构体，且(c-2)具有在将液体填充于该容器状结构体内时，能以细胞分选膜面与填充的液面接触的状态配设所述细胞分选单元的结构，(c-3)在构成该容器状结构体的面的至少一部分具有能培养通过了细胞分选膜的细胞的第一次培养用培养面，(c-4)在构成该容器状结构体的面具有能将保持于该容器内部的细胞及液体自由地释放至具有下一阶段的培养面的单元侧的结构；所述(D)所述的主体容器单元为：(d-1)主要由主体容器及主体盖状部构成的容器状结构体，(d-2)具备能培养从上一阶段的培养用单元释放的细胞的增殖培养用培养面，该增殖培养用培养面的面积比上一阶段的培养用单元的培养面的面积宽，(d-3)在该容器状结构体的内部具有能收纳细胞分选单元及到上一阶段的所有培养用单元的结构，(d-4)所述主体盖状部为能使容器整体处于密闭状态的盖状结构体。3.根据权利要求1或2所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述细胞分选单元为用于经由细胞分选膜在第一次培养用单元的容器状结构体侧将所期望的对象细胞分选的单元。4.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，以将上一阶段的培养用单元的培养面的面积设为1的情况下的面积比计，所述增殖培养用培养面的面积在大于1且20以下的范围。5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述细胞分选培养容器：(E)(e-1)所述细胞分选培养容器所具备的所有培养面的至少一部分以及主体容器单元的增殖培养用培养面的对置方向或大致对置方向的容器结构的至少一部分由具有透光性的材质构成；(e-2)不开封主体容器单元也能经由所述具有透光性的部分观察容器内部的培养面。6.根据权利要求1～5中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述第一次培养用单元为由两个以上的构件构成的容器状结构体，且具有能通过构成该容器状结构体的构件的分离或转置而将所述能释放的结构调整为释放状态的结构。7.根据权利要求1～6中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述第一次培养用单元具有能与来自主体容器单元的外部的操作连动而将所述能释放的结构调整为释放状态的结构。8.根据权利要求1～7中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述第一次培养用单元能与主体盖状部的操作连动而将所述能释放的结构调整为释放状态。9.根据权利要求1～8中任一项所述的细胞分选培养增殖容器，其中，所述细胞分选培养容器为：(F)(f-1)在主体容器单元的主体容器壁面或主体盖状部具备不开封主体容器单元也能将中空管状构件朝容器内部插入或从容器内部插出的结构，(f-2)该结构为配设于经由插入的中空状构件而能将填充于第一次培养用单元内的液体吸出的位置的结构，(f-3)该结构为主要由能保持中空管状构件的未插入状态下的气密性及中空管状构件的插入状态下的气密性的弹性构件构成的结构。10.根据权利要求1～9中任一项所述的细胞分选培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：岛垣昌明，铃木孝尚，渥美优介，中岛美砂子，
申请(专利权)人：内帕基因株式会社，国立研究开发法人国立长寿医疗研究中心，
类型：发明
国别省市：日本,JP