球虫病疫苗制造技术

本发明专利技术涉及改进的抗家禽中的球虫病的疫苗。该疫苗包含组合物中的活的艾美球虫卵囊，所述组合物由于引入了0.3至1.5%w/v黄原胶而具有相对高的粘度。在喷雾接种时，该新的疫苗形成被禽类迅速摄食并且提供快速的疫苗吸收的珠，导致攻击感染后球虫病体征的迅速和有效改善。本发明专利技术还涉及对包含黄原胶的组合物热灭菌的方法；通过引入一定浓度的金属盐，可以很大程度防止粘度的不可逆和剧烈降低。

Coccidiosis vaccine

The invention relates to an improved vaccine against coccidiosis in poultry. The vaccine contains live Eimeria oocysts in the composition, which has a relatively high viscosity due to the introduction of 0.3 to 1.5% w/v xanthan gum. During spray inoculation, the new vaccine forms beads that are quickly ingested by poultry and quickly absorbed by the vaccine, resulting in rapid and effective improvement in symptoms of coccidiosis after attack infection. The invention also relates to a method for thermal sterilization of a composition containing xanthan gum, by introducing a certain concentration of metal salts, irreversible and drastic viscosity reduction can be prevented to a great extent.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】球虫病疫苗本专利技术涉及兽医寄生虫学和疫苗学领域；更具体地，本专利技术涉及包含活的艾美球虫（Eimeria）卵囊的用于家禽的球虫病疫苗；涉及用于制备该球虫病疫苗的方法；涉及部件的试剂盒（kitofparts）；并且涉及该球虫病疫苗的施用方法。艾美球虫是顶复门（phylumApicomplexa）和球虫纲（classCoccidia）的原生动物寄生虫，并且在全世界存在。当感染家禽时，它们导致中度至严重的肠疾病-综合征（complex），称作球虫病。艾美球虫具有复杂的生命周期，该生命周期具有多个阶段，一些是在宿主外发育。艾美球虫感染是通过摄食孢子化卵囊（sporulatedoocysts）而发生的，并且可以从第一日龄就发生。在肠中，释放子孢子，其随后通过侵入肠上皮细胞而在禽的一段肠上建群。复制导致裂殖子释放阶段，和来自宿主的肠上皮细胞的破裂。随后，裂殖子再感染另外的上皮细胞，这持续最多另外的四个4-6日的周期。最后，发育至性阶段，其产生随粪便释放的卵囊。在环境中形成孢子后，重新开始周期(Shirley等,2005,Adv.inParas.,vol.60,p.285)。可以通过多种途径，常规通过球虫的显微粒径和外观鉴定感染家禽的主要艾美球虫物种。同样，不同的艾美球虫物种倾向于在禽类肠的不同区域建群。家禽中艾美球虫感染的症状不同，从食欲不振到由于肠中坏死组织的积累导致的血性腹泻（bloodydiarrhoea）和器官衰竭。结果是饲料转化率的下降、降低的生长速度、降低的蛋产量和对继发性感染的易感性，这些全部都导致受影响的禽类的主要不适和对商业家禽经营的严重经济损害。抗艾美球虫感染和球虫病的保护作用可以基于经由饲料施用抗球虫药物（抑球虫剂），但抗性的积累和动物产品中药物残留物的存在是持续关注的问题。因此，优选通过接种来防止家禽中的艾美球虫感染和随后的疾病。仅次于亚单位疫苗和重组DNA疫苗，最多使用的是活疫苗，其包含来自一个或多个艾美球虫物种的孢子化卵囊。它们在禽中的天然复制通过免疫系统的体液和细胞途径两者诱导强免疫。通常，在生命早期单次接种（通过偶尔野生型加强感染辅助）足够终生保护禽类。活的球虫可以是野生型或减毒的致病型。一类特殊的减毒的艾美球虫是所谓的早熟株，它们是将在禽中以少于正常值的周期数完成它们的生命周期的艾美球虫。这些产生更低数目的卵囊排出量以及对目标的肠的更少损害。对于家禽球虫病的综述，参见:"TheMerckveterinarymanual"(第10版,2010,C.M.Kahnedt.,ISBN:091191093X),或:Swayne等,eds.:“DiseasesofPoultry”,第13版,Wiley-Blackwell,Ames,IA.,USA。通常通过比较感染和疾病的主要标准确定艾美球虫疫苗的效力，所述标准是：用毒性艾美球虫株攻击感染后的肠病变得分、卵囊排出量的降低和对体重增长的影响。描述评估艾美球虫疫苗效力的这些标准的相关性的一篇文献是：Williams&Catchpole,(2000,Vaccine,vol.18,p.1178-1185)。活的艾美球虫疫苗一般将包含来自几种艾美球虫物种的孢子化球虫，因为免疫是物种特异性的。例如，一些用于家禽的商业球虫病疫苗是：来自MSD动物健康中心疫苗生产线（MSDAnimalHealth,thevaccinelines）的Coccivac™、Paracox™或Fortegra™，它们包含来自最多8个艾美球虫物种的不同株的活的孢子化球虫。其它商业艾美球虫疫苗是Immucox™(Ceva)和Inovocox™(Zoetis)。一些疫苗通常是通过某种群体接种（massvaccination）方法施用的，以便降低成本，例如通过给身体或饲料喷雾，或经由饮用水。由于从第一日龄开始就存在野外感染（fieldinfection）压力，因此接种的应用优选越年幼越好。这可以通过在孵化场，当小鸡刚刚孵化出来并且放置在敞开的盘中时喷雾施用而方便地完成。该途径到达禽类的身体以及它们的直接环境。然后禽类通过它们啄食小滴和用嘴整理它们的羽毛的倾向性，经由口、鼻或眼途径摄食疫苗。活的球虫艾美球虫接种的主要考虑是优化疫苗吸收(vaccinetake)，即，由禽快速和广泛摄食，以使得球虫在禽类的肠中快速建立感染并且因此诱导保护性免疫应答。因此，本领域急需进一步改善球虫艾美球虫疫苗的摄食和有效性。已经进行了几种改进。例如，为了刺激摄食，通常给喷雾疫苗提供鲜艳的颜色，如绿色（叶绿素）或红色（洋红）。鲜艳的颜色增强可见性并且吸引禽类的好奇心，这刺激啄食和用嘴整理羽毛。艾美球虫喷雾疫苗的一个问题是：球虫是相对大和重的微生物（15–30µm直径的椭圆形），因此在重力的影响下具有在液体载体中下沉的倾向。当应用的疫苗使用不同物种的艾美球虫（它可能具有不同大小的球虫）时这尤其不利；较重的物种随后倾向于下沉更快，并且可能不能被摄食到要求的总量。为了克服此问题，现有的疫苗可以含有流变改性剂作为助悬剂。例如，Paracox™8疫苗含有每动物剂量0.3%w/v黄原胶。这使得不同的球虫在施用过程中保持悬浮并且均匀混合。但是，该疫苗的粘度低。黄原胶是一种高分子量多糖，其由黄单胞菌属（Xanthomonasgenus）的细菌产生。目前它是通过野油菜黄单胞菌（X.campestris）在例如乳清上的工业发酵而生产的。黄原胶用于多种产品，例如药物和食品，作为乳状液的稳定剂，或作为增稠剂来影响产品的粘度。黄原胶是假塑性的，即，它具有剪切稀化特性。它可以从不同的商业供应商，如从CPKelco作为Keltrol™获得。黄原胶的细节和特性描述于例如‘Xanthanbook’,第8版,2008,cpkelco.com。为了改进球虫艾美球虫疫苗的摄食，已经应用了其它适应方法，例如将疫苗组合物配制为高粘度凝胶。例如，WO2005/099.617描述了作为包含约1%角叉菜胶的软凝胶提供的球虫艾美球虫疫苗，角叉菜胶是一种因为其胶凝特性而常用于食品工业的源自海藻的多糖。但是，为了将该凝胶施用在鸡上，需要特殊的送递系统，即，‘凝胶分配器’，其具有产生凝胶小滴流的特殊歧管。用于病毒疫苗或细菌疫苗的喷雾施用的该角叉菜胶软凝胶制剂的进一步发展描述于WO2011/011.873：通过添加每个剂量约0.1%w/v的黄原胶，软凝胶小滴更粘。但是，仍然需要特殊的送递装置。因此，本专利技术的一个目的是通过提供活的球虫艾美球虫喷雾疫苗克服现有技术的缺点，并且适应本领域中的需要，该疫苗提供改进的疫苗效力，并且可以通过常规喷雾装置送递。出乎意料地，发现通过提供包含0.3-1.5%w/v黄原胶的基于活的艾美球虫球虫（Eimeriacoccidia）的球虫病疫苗，可以满足该目的，并且因此可以克服和改进现有技术的一个或多个缺点，所述0.3-1.5%w/v黄原胶给疫苗提供相对高的粘度。该新疫苗展示了与不具有该浓度的黄原胶的相似疫苗相比显著改进的效力。有利的结果是：该新的球虫病疫苗被禽类快速和广泛地摄食，导致改进的疫苗吸收（肠中疫苗球虫的复制水平）。这是因为从摄食到开始第一轮复制的时间显著缩短了。此外，可以用常规喷雾装置，如标准的孵化场喷雾柜或背包式喷雾器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于家禽的球虫病疫苗，其包含药学可接受的载体中的至少一个艾美球虫物种的活卵囊，其特征在于所述疫苗包含 0.3 ‑ 1.5 % w/v黄原胶，所述 0.3 ‑ 1.5 % w/v黄原胶给所述疫苗提供200至4000 mPa.s的粘度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.29 EP 15203012.81.用于家禽的球虫病疫苗，其包含药学可接受的载体中的至少一个艾美球虫物种的活卵囊，其特征在于所述疫苗包含0.3-1.5%w/v黄原胶，所述0.3-1.5%w/v黄原胶给所述疫苗提供200至4000mPa.s的粘度。2.根据权利要求1的球虫病疫苗，其特征在于所述至少一个艾美球虫物种是选自下组的一个或多个或全部：堆型艾美球虫（E.acervulina）、柔嫩艾美球虫（E.tenella）、巨型艾美球虫（E.maxima）、布氏艾美球虫（E.brunetti）、和缓艾美球虫（E.mitis）、早熟艾美球虫（E.praecox）、变位艾美球虫（E.mivati）、哈氏艾美球虫（E.hagani）和毒害艾美球虫（E.necatrix）。3.根据权利要求1或2的球虫病疫苗，其特征在于所述疫苗包含少于约0.4%w/v金属盐。4.用于制备根据权利要求1或2的球虫病疫苗的方法，其特征在于该方法包括将药学可接受的载体中的至少一个艾美球虫物种的活卵囊与最多0.3-1.5%w/v的黄原胶混合的步骤。5.根据权利要求4的方法，其特征在于黄原胶提供在组合物中，所述组合物的浓度使得在混合后得到的疫苗包含0.3-1.5%w/v黄原胶。6.根据权利要求5的方法，其用于制备根据权利要求3的球虫病疫苗，其特征在于所述包含黄原胶的组合物另外包含至少约0.1%w/v浓度的金属盐，并且所述组合物中所述金属盐的浓度使得得到的疫苗包含少于约0.4%w/v金属盐。7.用于制备根据权利要求1-3的任一项的球虫病疫苗的部件的试剂盒，其特征在于该试剂盒包含至少两个容器：一个容器包...

【专利技术属性】
技术研发人员：C克劳奇，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL