用于冷冻保存HUTC的组合物和方法技术

技术编号：18815686 阅读：66 留言：0更新日期：2018-09-01 10:45

本发明专利技术提供了用于冷冻保存人脐带组织衍生的细胞的组合物。所述冷冻保存组合物可包含：(a)氨基酸；(b)维生素；(c)无机盐；以及(d)DMSO、蔗糖、甘露糖醇和乳糖酸。本发明专利技术还提供包含所述组合物和人脐带组织衍生的细胞的试剂盒以及冷冻保存所述细胞的方法，所述方法利用所述组合物。

Compositions and methods for cryopreservation of HUTC

The invention provides a composition for cryopreservation of human umbilical cord tissue derived cells. The cryopreservation composition may include: (a) amino acids; (b) vitamins; (c) inorganic salts; and (d) DMSO, sucrose, mannitol and lactic acid. The invention also provides a kit comprising the composition and cells derived from human umbilical cord tissue and a method for cryopreservation of the cells using the composition.

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于冷冻保存HUTC的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求美国临时申请62/278,780(2016年1月14日提交)的优先权，该美国临时申请的内容全文以引用方式并入本文。
本专利申请涉及可用于冷冻保存人脐带组织衍生的细胞(hUTC)的组合物和利用这些组合物冷冻保存hUTC的方法。
技术介绍
对于同种异体细胞治疗产品而言，细胞或组织得自供体，其在施用于患者之前被进一步操纵。非同源细胞治疗产品的制造方法通常包括以下步骤：解冻和扩增细胞；浓缩细胞并去除不期望的杂质，诸如在细胞生产期间使用的血清和胰蛋白酶；将细胞构成最终制剂缓冲液；以及冷冻保存细胞或产物。一旦在临床场所，就将冷冻保存的产品解冻并施用于受体。产品在适用于受体之前和期间保留在冷冻保存制剂中。冷冻保存是通过冷却至零度以下温度来保存细胞或整个组织的方法。在这些寒冷的温度下，任何生物活性，包括可导致细胞死亡的生化反应均有效地停止。然而，已知冷冻保存对冷冻细胞造成损伤，从而影响细胞存活。冷冻保存期间的细胞存活能力通过解冻之后的细胞恢复和活力来测量。冷冻保存期间的细胞存活可受过程变量，诸如例如冷冻保存制剂、冷冻循环和程序、以及解冻程序显著影响。此外，在冷冻保存期间可能对细胞造成损伤的现象主要发生在冷冻阶段期间，并且包括但不限于溶液效应、细胞外冰形成、脱水和细胞内冰形成。为避免这种损伤，使用针对待保存的细胞独特设计的冷冻保存溶液。使用此类冷冻保护剂保护细胞免受在冷却或解冻期间由于冷冻而造成的损伤。因此，重要的是也被用作递送产品的载体的最终冷冻保存制剂能够在解冻期间支撑并保持高细胞存活能力并保留产品完整性。该...

【技术保护点】
1.一种用于冷冻保存脐带组织衍生的细胞的组合物，其中所述组合物包含：氨基酸：L‑精氨酸、L‑谷氨酰胺、甘氨酸、L‑异亮氨酸、L‑亮氨酸、L‑赖氨酸(HCl)、L‑甲硫氨酸、L‑苯丙氨酸、L‑丝氨酸、L‑苏氨酸、L‑色氨酸和L‑缬氨酸；维生素：D‑泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)、核黄素和硫胺素(HCl)；无机盐：氯化钾(USP)、碳酸氢钠(USP)、氯化钠(USP)和磷酸钠(一碱，H2O)；无机盐：氯化钙二水合物(CaCl2.2H2O)、氯化镁(MgCl2.6H2O)、碳酸氢钾(KHCO3)和单磷酸钾(KH2PO4)；以及DMSO、乳糖酸、谷胱甘肽、右旋糖、蔗糖和甘露糖醇。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.14 US 62/2787801.一种用于冷冻保存脐带组织衍生的细胞的组合物，其中所述组合物包含：氨基酸：L-精氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸(HCl)、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸；维生素：D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)、核黄素和硫胺素(HCl)；无机盐：氯化钾(USP)、碳酸氢钠(USP)、氯化钠(USP)和磷酸钠(一碱，H2O)；无机盐：氯化钙二水合物(CaCl2.2H2O)、氯化镁(MgCl2.6H2O)、碳酸氢钾(KHCO3)和单磷酸钾(KH2PO4)；以及DMSO、乳糖酸、谷胱甘肽、右旋糖、蔗糖和甘露糖醇。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：至少约37.8mg/L的L-精氨酸、至少约262.8mg/L的L-谷氨酰胺、至少约13.5mg/L的L-甘氨酸、至少约47.16mg/L的L-异亮氨酸、至少约47.16mg/L的L-亮氨酸、至少约65.79mg/L的L-赖氨酸(HCl)、至少约13.5mg/L的L-甲硫氨酸、至少约29.7mg/L的L-苯丙氨酸、至少约18.9mg/L的L-丝氨酸、至少约42.755mg/L的L-苏氨酸、至少约7.2mg/L的L-色氨酸和41.85mg/L的L-缬氨酸；至少约0.18mg/L的核黄素和至少约1.8mg/L的以下维生素中的每一种：D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)和硫胺素；至少约432mg/L的氯化钾(USP)、约2565mg/L的碳酸氢钠(USP)、约2880的氯化钠(USP)、至少约56.25mg/L的磷酸钠(一碱，H2O)、至少约3.2mg/L的氯化钙二水合物(CaCl2.2H2O)、至少约458mg/L的氯化镁(MgCl2.6H2O)、至少约225mg/L的碳酸氢钾(KHCO3)和至少约612mg/L的单磷酸钾(KH2PO4)；以及约5％体积/体积至约10％体积/体积的DMSO、至少约855mg/L的右旋糖、至少约415mg/L的谷胱甘肽；至少约3081mg/L蔗糖和至少约1639mg/L的甘露糖醇。3.一种用于冷冻保存脐带组织衍生的细胞的组合物，其中所述组合物包含：氨基酸：L-精氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸(HCl)、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸；维生素：D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)、核黄素和硫胺素(HCl)；无机盐：氯化钾(USP)、碳酸氢钠(USP)、氯化钠(USP)和磷酸钠(一碱，H2O)；以及DMSO、右旋糖、蔗糖和甘露糖醇。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物包含：至少约75.6mg/L的L-精氨酸、至少约525.6mg/L的L-谷氨酰胺、至少约27mg/L的L-甘氨酸、至少约94.32mg/L的L-异亮氨酸、至少约94.32mg/L的L-亮氨酸、至少约131.58mg/L的L-赖氨酸(HCl)、至少约27mg/L的L-甲硫氨酸、至少约59.4mg/L的L-苯丙氨酸、至少约37.8mg/L的L-丝氨酸、至少约85.5mg/L的L-苏氨酸、14.4mg/L的L-色氨酸和至少约83.7mg/L的L-缬氨酸；至少约0.36mg/L的核黄素和至少约3.6mg/L的以下维生素中的每一种：D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)和硫胺素；至少约360mg/L的氯化钾(USP)、至少约3330mg/L的碳酸氢钠(USP)、至少约5760mg/L的氯化钠(USP)和至少约112.5mg/L的磷酸钠(一碱，H2O)；以及约5％体积/体积至约10％体积/体积的DMSO、至少约900mg/L的右旋糖、至少约6160mg/L的蔗糖和至少约3240mg/L的甘露糖醇。5.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物不包含乳糖酸、谷胱甘肽和以下无机盐：氯化钙二水合物(CaCl2.2H2O)、氯化镁(MgCl2.6H2O)、碳酸氢钾(KHCO3)和单磷酸钾(KH2PO4)。6.一种用于冷冻保存脐带组织衍生的细胞的组合物，其中所述组合物包含：氨基酸：L-精氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸(HCl)、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸；维生素：D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、吡哆醇(HCl)、核黄素和硫胺素(HCl)；无机盐：氯化钾(USP)、碳酸氢钠(USP)、氯化钠(USP)和磷酸钠(一碱，H2O)；无机盐：氯化钙二水合物(CaCl2.2H2O)、氯化镁(MgCl2.6H2O)、碳酸氢钾(KHCO3)和单磷酸钾(KH2PO4)；以及约5％体积/体积至约10％体积/体积的DMSO、约12,000mg/L至约20,000mg/L的乳糖酸、约329mg/L至约495mg/L的谷胱甘肽、右旋糖、约2460mg/L至约3695mg/L的蔗糖和约1310mg/L至约1967mg/L的甘露糖醇。7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述脐带组织衍生的细胞从基本上不含血液的人脐带组织中分离，能够在培养中自我更新和扩增，具有分化的潜力，缺乏CD1...

【专利技术属性】
技术研发人员：A格斯伊胡斯卡，AJ吉穆，
申请(专利权)人：德普伊新特斯产品公司，
类型：发明
国别省市：美国,US

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