目标分析方法以及目标分析芯片技术

提供一种不进行PCR而直接检测以微小RNA为首的目标的新的目标分析方法以及目标分析芯片。本发明专利技术的目标分析方法的特征在于，包括：使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体的步骤；使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一结合体和所述载体进行结合反应，并形成第二结合体的步骤；对所述载体进行浓缩的步骤；以及通过检测与上述浓缩了的载体相结合的所述标记探针的标记，分析所述试样中的目标的步骤。

Target analysis method and target analysis chip

A novel target analysis method and a target analysis chip for direct detection of microRNAs without PCR are presented. The target analysis method of the present invention is characterized in that the target in the sample, the marker probe combined with the target, and the carrier combined with the target and the carrier are contacted with the probe, so that the target, the marker probe and the carrier are combined with the probe for binding reaction and form the first. The first binding body is contacted with the carrier, the first binding body is bonded with the carrier, and the second binding body is formed; the carrier is concentrated; and the labeling of the labeling probe is separated by detecting the labeling probe combined with the condensed carrier. The steps of the target in the sample are analyzed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】目标分析方法以及目标分析芯片
本专利技术涉及目标分析方法以及目标分析芯片。
技术介绍
近年来，关注血液中微小RNA(核糖核酸)等的RNA与疾病的关联性，为了尽早发现疾病等，尝试将所述RNA的检测用于医疗中。作为微小RNA的定量方法，例如报告有通过聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)特异性扩增目标的微小RNA而进行检测的方法(专利文献1)。但是，由于PCR是必须的，因此需要进行温度控制的装置、对DNA(deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸)的逆转录等，操作繁杂。另外，在所述方法中，从少量的试样中所含的RNA中，通过逆转录获得DNA，进一步通过进行PCR来进行扩增。但是，这样的逆转录PCR是所述试样中的RNA的间接检测而不是直接检测，因此当进行定量分析时，存在精度不够的问题。在先技术文献专利文献专利文献1：日本专利第5192229号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的问题因此，本专利技术的目的在于，提供一种无需PCR而直接检测以微小RNA为首的目标的新的目标分析方法以及目标分析芯片。用于解决问题的手段为了解决所述本专利技术的问题，本专利技术的目标分析方法的特征在于，包括：第一反应步骤，在液体溶剂中，使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体；第二反应步骤，使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一结合体和所述载体进行结合反应，并形成比重比所述液体溶剂大的第二结合体；浓缩步骤，将含有所述第二结合体的所述液体溶剂进行离心，并对所述第二结合体进行浓缩；以及分析步骤，通过检测以浓缩的状态包含于所述第二结合体中的所述标记探针的标记，分析所述试样中的目标。本专利技术的目标分析芯片的特征在于，包括：基板，所述基板具备反应部、检测部以及流路，所述流路连通所述反应部与所述检测部，所述反应部是试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针、以及所述载体进行结合反应的部位，所述检测部是第二结合体被浓缩的部位，所述第二结合体是所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针相结合了的第一结合体经由所述载体结合用探针与所述载体相结合而形成的，所述流路具有作为移动控制单元的疏水性的内壁，所述移动控制单元控制所述第二结合体的从所述反应部向所述检测部的移动，通过所述移动控制单元，在液体溶剂中，比重比所述液体溶剂大的所述第二结合体在施加了比所述流路的疏水性产生的阻力(R)大的离心力(C)的情况下，经由所述流路，能够移动到所述检测部。专利技术效果根据本专利技术，能够不使用PCR而直接分析试样中的目标。附图说明图1是示出本专利技术的目标分析芯片的一个例子的简要图，(A)是立体图，(B)是俯视图，(C)是(A)的I-I方向的截面图；图2是示出离心装置的一个例子的截面图；图3是示出在离心装置配置了目标分析芯片的状态下的一个例子的简要图；图4是测定了本专利技术的实施例1中玻璃底皿上的抗生物素蛋白修饰珠子的照片；图5是示出本专利技术的实施例1中的荧光信号的光谱的曲线图；图6的(A)是示出实施例2中的平均荧光强度的曲线图，图6的(B)是示出实施例2中的吸光度的曲线图；图7是实施例3中所使用的分析芯片的内部的俯视图；图8是示出实施例3中的总荧光量的相对值的曲线图。具体实施方式本专利技术的目标分析方法的特征在于，如前所述，包括：第一反应步骤、第二反应步骤、浓缩步骤以及分析步骤。在所述第一反应步骤中，在液体溶剂中，使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体。在第二反应步骤中，使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一结合体和所述载体进行结合反应，并形成比重比所述液体溶剂大的第二结合体。在浓缩步骤中，对含有所述第二结合体的所述液体溶剂进行离心，并对所述第二结合体进行浓缩。在分析步骤中，通过检测以浓缩的状态包含于所述第二结合体中的所述标记探针的标记，分析所述试样中的目标。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述载体结合用探针包含第一结合物质，所述载体包含与所述第一结合物质相结合的第二结合物质，所述载体结合用探针经由所述第一结合物质与所述第二结合物质之间的结合而与所述载体相结合。在本专利技术的目标分析方法中，所述目标是目标核酸。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述目标核酸是目标RNA。所述目标RNA例如为微小RNA。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述标记探针是荧光标记探针。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述荧光标记探针与所述载体结合用探针相比，结合于所述目标核酸的5’端侧。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述荧光标记探针从所述目标核酸的5’端与连续的碱基相结合，所述载体结合用探针从所述目标核酸的3’端与连续的碱基相结合。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述荧光标记探针的荧光标记是通过所述荧光标记探针与所述目标核酸相结合而发生信号变化的物质。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述荧光标记是含有芘的物质。在本专利技术的目标分析方法中，包含以下步骤：所述标记探针进一步由补骨脂素修饰，通过照射紫外线，使所述补骨脂素与所述目标核酸相结合。在本专利技术的目标分析方法中，例如通过检测波长450～510nm的荧光信号来检测所述荧光。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述载体的直径小于100μm，更优选100nm～4μm。在本专利技术的目标分析方法中，例如使用具有基板的目标分析芯片，所述基板具备反应部、检测部以及流路，所述流路连通所述反应部与所述检测部，所述反应部是所述目标、所述标记探针、所述载体结合用探针和所述载体进行结合反应的部位，所述检测部是所述第二结合体被浓缩的部位，所述流路具有作为移动控制单元的疏水性的内壁，所述移动控制单元控制所述第二结合体的从所述反应部向所述检测部的移动，通过所述移动控制单元，所述第二结合体在施加了比所述流路的疏水性产生的阻力(R)大的离心力(C)的情况下，能够经由所述流路而移动到所述检测部，在向所述反应部导入了含有所述目标的试样之后，在所述反应部进行所述第一反应步骤，进一步在所述反应部进行所述第二反应步骤，在从所述反应部经由所述流路到所述检测部为止的期间进行所述浓缩步骤，在所述检测部进行所述分析步骤。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述检测部的高度是1～500μm。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述载体是珠子。另外，所述载体例如由二氧化硅制造。在本专利技术的目标分析方法中，例如，所述珠子的直径是100nm～4μm。<目标分析方法>本专利技术的目标分析方法(以下，也称为“分析方法”)的特征在于，如前所述，包括以下步骤：在液体溶剂中，使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体的步骤(第一反应步骤)；使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种目标分析方法，其特征在于，包括：第一反应步骤，在液体溶剂中，使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体；第二反应步骤，使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一结合体和所述载体进行结合反应，并形成比重比所述液体溶剂大的第二结合体；浓缩步骤，将含有所述第二结合体的所述液体溶剂进行离心，并对所述第二结合体进行浓缩；以及分析步骤，通过检测以所述浓缩的状态包含于所述第二结合体中的所述标记探针的标记，分析所述试样中的目标。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.22 JP 2016-0110181.一种目标分析方法，其特征在于，包括：第一反应步骤，在液体溶剂中，使试样中的目标、与所述目标相结合的标记探针、以及与所述目标和由具有透光性的材料形成的载体相结合的载体结合用探针接触，使所述目标、所述标记探针以及所述载体结合用探针进行结合反应，并形成第一结合体；第二反应步骤，使所述第一结合体与所述载体接触，使所述第一结合体和所述载体进行结合反应，并形成比重比所述液体溶剂大的第二结合体；浓缩步骤，将含有所述第二结合体的所述液体溶剂进行离心，并对所述第二结合体进行浓缩；以及分析步骤，通过检测以所述浓缩的状态包含于所述第二结合体中的所述标记探针的标记，分析所述试样中的目标。2.根据权利要求1所述的目标分析方法，其中，所述载体结合用探针包含第一结合物质，所述载体包含与所述第一结合物质相结合的第二结合物质，所述载体结合用探针经由所述第一结合物质与所述第二结合物质之间的结合而与所述载体相结合。3.根据权利要求1或2所述的目标分析方法，其中，所述目标是目标核酸。4.根据权利要求3所述的目标分析方法，其中，所述目标核酸是微小RNA。5.根据权利要求3或4所述的目标分析方法，其中，所述标记探针是荧光标记探针。6.根据权利要求5所述的目标分析方法，其中，所述荧光标记探针与所述载体结合用探针相比，结合于所述目标核酸的5’端侧。7.根据权利要求6所述的目标分析方法，其中，所述荧光标记探针从所述目标核酸的5’端与连续的碱基相结合，所述载体结合用探针从所述目标核酸的3’端与连续的碱基相结合。8.根据权利要求5至7中任一项所述的目标分析方法，其中，所述荧光标记探针的荧光标记是通过所述荧光标记探针与所述目标核酸相结合而发生信号变化的物质。9.根据权利要求8所述的目标分析方法，其中，所述荧光标记是含有芘的物质。10.根据权利要求3至9中任一项所述的目标分析方法，包括以下步骤：所述标记探针进一步由补骨脂素修饰，通过照射紫外线，使所述补骨脂素...

【专利技术属性】
技术研发人员：村上章，小堀哲生，山吉麻子，野田雄一郎，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，国立大学法人京都工艺纤维大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP