一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法技术

本发明专利技术属于甾体激素药物分析方法领域，特别涉及一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，主要参数包括：选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为水、甲醇及乙腈；在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明专利技术能有效的洗脱、分离和定量雌酚酮原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，且分析速度快，同时该方法也可单独适用于雌酚酮杂质A样品或杂质D样品的有关物质检测。

【技术实现步骤摘要】
一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法
本专利技术属于甾体激素药物分析方法领域，特别涉及一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法。
技术介绍
雌酚酮(3-羟基-1，3，5(10)-三烯，17-雌酮)属于雌激素，是一种重要的医药中间体，可用于合成炔雌醇或雌二醇类的衍生物。雌酚酮有关物质测定中，常见的杂质分别为A、B、C、D、E及F的六种化合物，其中，杂质A和杂质E是未转化的物料，其他杂质来源于生产原料药时产生的副产物。对于雌酚酮原料药有关物质HPLC检测方法，未见详细报道。如果按照美国药典USP雌酚酮含量检测方法检测原料药中有关物质，发现有如下缺点：一是USP方法为等度洗脱，而杂质F极性较小，USP方法流动相中用到了高浓度磷酸盐(50mM)，不能进行梯度洗脱，杂质F无法洗脱出来；二是杂质C与雌酚酮结构类似，无法进行有效分离，杂质C定量不准确。因此，寻找一种简单可行，能将雌酚酮及其各杂质依次洗脱且分离，并做定量分析的分析方法势在必行。
技术实现思路
为了解决上述现有技术中存在的雌酚酮原料药有关物质测定中的问题，本专利技术的目的在于提供一种梯度洗脱的高效液相色谱法测定雌酚酮原料药有关物质的分析方法；同时，本专利技术的方法还可用于雌酚酮杂质A(即ADD)和杂质D(即雌酚酮缩酮物)的质量控制。为实现本专利技术的专利技术目的，专利技术人提供如下技术方案：一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，包括：(1)所述的雌酚酮及其有关物质的结构如下：(2)HPLC分析方法的主要参数：a、色谱柱选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇及乙腈，A为水；B为甲醇+乙腈，B中乙腈占比为55％～65％；梯度洗脱时间与流动相比例如下：时间(min)流动相A％流动相B％0～1860～5640～4418～2060～56→3040～44→7020～29307030～3560～5640～44c、检测波长为280nm；d、检测方法：取测试样品适量，精密称定，加等比组成的乙腈-甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，精密量取5μL注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。作为优选，本专利技术的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤(2)b流动相梯度洗脱中流动相B中的乙腈比例为60％。作为优选，本专利技术的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤(2)d检测方法中的流速为0.8～1.5ml/min。作为优选，本专利技术的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤(2)d检测方法中的柱温为30～45℃。作为优选，本专利技术的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤(2)d检测方法中的样品溶液的浓度为0.5～5mg/ml。最优选浓度为4mg/ml。此外，本专利技术的方法还可单独用于雌酚酮杂质A(即ADD)样品或杂质D(即雌酚酮缩酮物)样品的分析检测和质量控制。操作方法同上。与相比现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的高效液相色谱分析方法，能有效的洗脱、分离和定量雌酚酮原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，且分析速度快，同时该方法也可单独适用于雌酚酮杂质A(ADD)样品或杂质D(雌酚酮缩酮物)样品的有关物质检测。本专利技术提供的高效液相色谱梯度法不仅可以对杂质进行有效的分离还可对杂质含量进行准确测定，且快速、简单、可靠。附图说明图1是本专利技术实施例1中系统适应性溶液(流动相B含60％乙腈)色谱图。图2是本专利技术实施例2中系统适应性溶液(流动相B含65％乙腈)色谱图。图3是本专利技术实施例3中系统适应性溶液(流动相B含55％乙腈)色谱图。图4是本专利技术实施例4中(流速1.0ml/min)系统适应性溶液色谱图。图5是本专利技术实施例4中(流速1.4ml/min)系统适应性溶液色谱图。图6是本专利技术实施例5中(柱温35℃)系统适应性溶液色谱图。图7是本专利技术实施例5中(柱温45℃)系统适应性溶液色谱图。图8是本专利技术实施例6中雌酚酮原料药色谱图。图9是本专利技术实施例7中雌酚酮杂质A(即ADD)色谱图。图10是本专利技术实施例8中雌酚酮杂质D(即雌酚酮缩酮物)色谱图。具体实施方式下面结合实施例，更具体地说明本专利技术的内容。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。若无特别指明，实施例采用的方法为本领域通用技术。一些说明：除特别指出外，本专利技术实施例中按以下测定条件：色谱柱：KinetexC84.6*250mm，5μm；检测波长：280nm；样品浓度：4mg/ml。实施例1检测方法：取雌酚酮测试样品适量，精密称定，加乙腈-甲醇(1∶1)溶解并稀释成4mg/ml的样品溶液，摇匀，精密量取5μL注入液相色谱仪，在流速1.2ml/min和柱温40℃下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。流动相B中乙腈为60％。按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液，时间(min)流动相A％流动相B％05842185842203070293070305842355842色谱图见图1，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表1。表1样品名代号保留时间(min)相邻峰间分离度ADD杂质A10.360/雌二醇杂质B12.5966.76雌酚酮-H2杂质C13.5352.48雌酚酮/14.2371.76雌酚酮缩酮物杂质D22.67632.58联苯杂质E23.0523.2917-联苯雌二醇杂质F26.37722.45从表1数据可知：流动相B中乙腈为60％；流速：1.2ml/min；柱温：40℃时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。实施例2其他同实施例1，不同之处在于：流动相B中乙腈为65％；按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液时间(min)流动相A％流动相B％05842185842203070293070305842355842色谱图见图2，流动相B中乙腈为65％，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。实施例3其他同实施例1，不同之处在于：流动相B中乙腈为55％；按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液时间(min)流动相A％流动相B％05842185842203070293070305842355842色谱图见图3，流动相B中乙腈为55％，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。对以上3个实施例中的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即流动相B中乙腈为60％。实施例4其他同实施例1，不同之处在于：流速：1.0ml/min或1.4ml/min；按按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液时间(min)流动相A％流动相B％05842185842203070293070305842355842色谱图见图4和5，由色谱图可知当流速为1.0ml/min或1.4ml/min时各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。对实施例1及实施例4中的色谱图进行比较，最终选择流速1.2ml/min为优选条件。实施例5其他同实施例1，不同之处在于：柱温：35℃或45℃；按按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液时间(min)流动相A％流动相B％058421858422030702930703058本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于包括：(1)所述的雌酚酮及其有关物质的结构如下：

【技术特征摘要】
1.一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于包括：(1)所述的雌酚酮及其有关物质的结构如下：(2)HPLC分析方法的主要参数：a、色谱柱选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇及乙腈，A为水；B为甲醇+乙腈，B中乙腈占比为55％～65％；梯度洗脱时间与流动相比例如下：时间(min)流动相A％流动相B％0～1860～5640～4418～2060～56→3040～44→7020～29307030～3560～5640～44c、检测波长为280nm；d、检测方法：取测试样品适量，精密称定，加等比组成的乙腈-甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，精密量取5μL注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。2.根据权利要求1所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤(2)b流动相梯度...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金涛，王咏，李杰，
申请(专利权)人：浙江仙琚制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33