一种制备天然天麻苷元的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备天然天麻苷元的方法；将竹笋经去壳、切丝、水洗等简单处理后进行密封发酵，发酵完成后回流提取，回收溶剂后的提取液用大孔吸附树脂及硅胶柱层析两种分离手段交替使用，得到天麻苷元粗品，再用萃取或重结晶的方法处理，得天麻苷元的纯品；本发明专利技术方法无需使用酸或碱等有机溶剂，制备过程对环境无污染，工艺简单且成本低廉，产品收率高，适合产业化生产。

A method for preparation of natural gastrodin

The invention discloses a method for preparing natural gastrodin; the bamboo shoots are sealed and fermented after simple treatment such as shelling, shredding and washing, and then refluxed and extracted after fermentation; the extract after solvent recovery is used alternately by macroporous adsorption resin and silica gel column chromatography, and the crude gastrodin is obtained and reused. The method of the invention does not need the use of organic solvents such as acid or base, and the preparation process has no pollution to the environment, simple process and low cost, and the product yield is high, so it is suitable for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种制备天然天麻苷元的方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种通过酸笋制备天然天麻苷元的方法。
技术介绍
天麻苷元，又名对羟基苯甲醇，无色或浅黄色针晶状物质，是天麻素经苦杏仁酶水解后的产物。易溶于甲醇、乙醇和丙酮，可溶于氯仿、乙醚，微溶于水。药理研究表明，天麻苷元具有中枢抑制效应，且与天麻素效果相当，有减少神经元损伤，降低脑梗塞大小和提高脑缺血后的行为参数等，且无皮肤刺激性，适合开发经皮给药制剂，可应用于中枢神经系统疾病的治疗。在体外、体内天麻苷元均具有显著的抗血小板聚集活性，其作用机制可能是通过抑制内钙释放和外钙内流达到抑制血小板聚集作用。此外，天麻苷元具有镇痛的功效，不同剂量下均能显著提高热板法致痛小鼠的痛阈，明显抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，且呈剂量依赖性。目前，天麻苷元的制备主要原料为天麻或天麻科植物，原料成本相对较高。竹笋是禾本科多年生植物竹子的嫩茎，在我国食用已有2500多年的历史。竹笋鲜嫩，肉质松脆，味道鲜美，是一种高蛋白、低淀粉、低脂肪的食品，富含人体所需的氨基酸，长期食用竹笋有促进肠道蠕动、帮助消化、预防肠癌和心血管疾病之功效。新鲜竹笋中含有有毒物质，如果处理不当被人误食常会出现恶心、呕吐、精神涣散的症状，后期还会出现皮肤过敏现象。在云南西双版纳州、德宏州等地区，竹笋深受云南各民族的喜爱，尤其是傣族人民，十分重视竹笋的加工与生产。当地居民将一部分鲜食和制作成干笋外，更多是采用自然发酵加工方法制作酸笋。酸笋味美可口，促进食欲，去腥解腻，防暑解热的优点，而且具有去积食，助消化的功效。竹笋在通过腌制处理（发酵）之后，其毒性会消失，并且发酵时间是决定酸笋是否有毒的关键因素。蔬菜通过发酵将形成多种风味化合物，使其具有特殊的风味和营养成分。有关酸笋的研究报道较少，存在着化学成分不清楚、作用不明确等问题。在传统发酵食品的保健功能及安全性日益受到重视的今天，以云南特色民族食品-傣味酸笋作为研究对象，开展酸笋功效物质基础研究，可以为新型食品及功能性食品的开发利用提供科学支撑；同时，也能为民俗传统食品开发新技术，进而为实现产业化生产奠定基础。目前尚未见从酸笋中提取天麻苷元的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从酸笋中提取天然天麻苷元的方法，在对酸笋有效成分的研究基础上，提供提取天麻苷元的工艺，该工艺简单且成本低廉，收率和纯度高，适合规模化生产，能满足天麻苷元在市场上的大量需求，具有广泛的应用前景。可用于本专利技术的竹子品种原料没有特别限制，可以是不同属的竹子，优选牡竹属的竹笋为主，如龙珠、麻竹、山竹；竹笋可以是竹笋肉也可以是竹笋全株，还可以是竹笋的废弃物如笋头和笋壳等。本专利技术通过以下技术方案实现上述目的，方案包括以下步骤：（1）采集新鲜竹笋，经去壳，切丝，水洗后密封发酵1～6月；（2）取发酵后酸笋，用其质量5～10倍的质量百分浓度50～90%的乙醇溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至无乙醇后，分离去沉淀，得溶液；（3）将溶液加入到大孔吸附树脂柱中进行吸附，用质量百分浓度10～90%的乙醇溶液或甲醇溶液梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩至无溶剂得浓缩液；（4）浓缩液采用氯仿、乙酸乙酯或正丁醇萃取2～4次，收集合并萃取液，浓缩得浸膏，拌入硅胶，拌样硅胶干燥后，上样硅胶柱，以石油醚-丙酮混合液或石油醚-乙酸乙酯混合液作为流动相进行梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，回收溶剂后，得天麻苷元粗品；（5）将天麻苷元粗品在有机溶剂中进行重结晶，干燥后得到天麻苷元。本专利技术另一种实现专利技术目的的方案如下：（1）采集新鲜竹笋，经去壳，切丝，水洗后密封发酵1～6月；（2）取发酵后酸笋，用其质量5～10倍的质量百分浓度50～90%的乙醇溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时，过滤，合并滤液；将滤液浓缩至无乙醇后，分离去沉淀，得溶液；（3）溶液采用氯仿、乙酸乙酯或正丁醇萃取2～4次，收集合并萃取液，浓缩得浸膏，拌入硅胶，拌样硅胶干燥后，上样硅胶柱，以石油醚-丙酮混合液或石油醚-乙酸乙酯混合液作为流动相进行梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，回收溶剂后的，残留物用水混悬；（4）将步骤（3）得到的含目标化合物的混悬液加入到大孔吸附树脂柱中进行吸附，用质量百分浓度10～90%的乙醇溶液或甲醇溶液梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，洗脱液再次用大孔吸附树脂柱吸附，洗脱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩至无溶剂得粗品；（5）将天麻苷元粗品在有机溶剂中进行重结晶或用乙酸乙酯萃取，收集有机相，干燥后得到天麻苷元。所述步骤（2）的分离为离心分离。所述大孔吸附树脂为非极性树脂或弱极性树脂。所述石油醚-丙酮混合液是石油醚和丙酮按体积比4:1～2:1的比例混合制得。所述石油醚-乙酸乙酯混合液是石油醚和乙酸乙酯按体积比3:1～2:1的比例混合制得。所述重结晶使用的有机溶剂为石油醚和丙酮按体积比3:1～4:1的比例混合制得。本专利技术具有下列优点和效果：采用上述方案制备天然天麻苷元，无需使用酸或碱等有机溶剂，制备过程对环境无污染，且成本低廉，产品收率高，适合产业化生产。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术保护范围不局限于所述内容。实施例1取新鲜的巨龙竹（Dendrocalamussinicus）竹笋2kg，去壳，切成细丝，用水冲洗，置于密闭小桶内，自然发酵三个月，得食用酸笋；用酸笋质量5倍的质量百分浓度80%乙醇溶液回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至无乙醇后，离心分离去沉淀，得溶液；将溶液加入到大孔吸附树脂柱（树脂型号HP-20）中吸附，采用乙醇-水溶液溶液梯度洗脱（乙醇和水比例为0:100，10:90，30:70，50:50，70:30，100:0），收集含目标成分的洗脱液，浓缩至无乙醇得浓缩液；浓缩液采用氯仿进行萃取3次，收集合并萃取液，浓缩得浸膏，拌入浸膏质量1.5倍的硅胶，拌样硅胶进行常规干燥后上样硅胶柱；以石油醚-丙酮混合液（4:1~2:1）进行梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，回收溶剂后，得天麻苷元粗品；天麻苷元粗品在石油醚-丙酮混合溶液（体积比3:1）中进行重结晶，干燥得1.2g天麻苷元，经高效液相色谱仪检测，纯度达98%；天麻苷元进行检测所用仪器及条件：仪器：PESeries200LC；检测器：PESeries200UV/VISDetector；色谱软件：PESeries200TCWS色谱工作站；色谱条件：色谱柱：DiamonsilC18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（15min梯度变化10%～50%）；检测波长：230nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃。实施例2取新鲜的巨龙竹（Dendrocalamussinicus）竹笋3Kg，去壳，切成细丝，用水冲洗，置于密闭小桶内，自然发酵六个月，得食用酸笋；用酸笋质量7倍的质量百分浓度75%的乙醇溶液回流提取2次，每次3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至无乙醇后，离心分离去沉淀，得溶液；溶液采用乙酸乙酯进行萃取3次，收集合并后进行减压浓缩，得到乙酸乙酯部分28g，用40g硅胶拌样，湿法上硅胶柱；以石油醚-丙酮混合液梯度洗脱（6:1-1:1），收集含目标成分的洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备天然天麻苷元的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采集新鲜竹笋，经去壳，切丝，水洗后密封发酵1～6月；（2）取发酵后酸笋，用其质量5～10倍的质量百分浓度50～90%的乙醇溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至无乙醇后，分离去沉淀，得溶液；（3）将溶液加入到大孔吸附树脂柱中进行吸附，用质量百分浓度0～100%的乙醇溶液或甲醇溶液梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩至无溶剂得浓缩液；（4）浓缩液采用氯仿、乙酸乙酯或正丁醇萃取2～4次，收集合并萃取液，浓缩得浸膏，拌入硅胶，拌样硅胶干燥后，上样硅胶柱，以石油醚‑丙酮混合液或石油醚‑乙酸乙酯混合液作为流动相进行梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，回收溶剂后，得天麻苷元粗品；（5）将天麻苷元粗品在有机溶剂中进行重结晶，干燥后得到天麻苷元。

【技术特征摘要】
1.一种制备天然天麻苷元的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采集新鲜竹笋，经去壳，切丝，水洗后密封发酵1～6月；（2）取发酵后酸笋，用其质量5～10倍的质量百分浓度50～90%的乙醇溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至无乙醇后，分离去沉淀，得溶液；（3）将溶液加入到大孔吸附树脂柱中进行吸附，用质量百分浓度0～100%的乙醇溶液或甲醇溶液梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，浓缩至无溶剂得浓缩液；（4）浓缩液采用氯仿、乙酸乙酯或正丁醇萃取2～4次，收集合并萃取液，浓缩得浸膏，拌入硅胶，拌样硅胶干燥后，上样硅胶柱，以石油醚-丙酮混合液或石油醚-乙酸乙酯混合液作为流动相进行梯度洗脱，收集含目标成分的洗脱液，回收溶剂后，得天麻苷元粗品；（5）将天麻苷元粗品在有机溶剂中进行重结晶，干燥后得到天麻苷元。2.根据权利要求1所述的制备天然天麻苷元的方法，其特征在于：步骤（4）中石油醚-丙酮混合液是石油醚和丙酮按体积比4:1～2:1的比例混合制得。3.根据权利要求1所述的制备天然天麻苷元的方法，其特征在于：石油醚-乙酸乙酯混合液是石油醚和乙酸乙酯按体积比3:1～2:1的比例混合制得。4.一种制备天然天麻苷元的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采集新鲜竹笋，经去壳，切丝，水洗后密封发酵1～6月；（2）取发酵后酸笋，用其质量5～10倍的质量百分浓度50～90%的乙醇溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时...

【专利技术属性】
技术研发人员：程桂广，杨美莲，李芳茹，曹建新，赵天瑞，赵燕，张宏，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南,53