一种G-四联体增强型胶体金层析试纸条制造技术

本发明专利技术涉及一种G‑四联体增强型胶体金层析试纸条，以胶体金颗粒作为信号，其特征在于：试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板，所述背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；所述结合垫粘附于所述样品垫之上，并与所述反应垫相搭接；所述反应垫与所述吸收垫相搭接；将可以特异性识别的抗体或核酸以条带状固定在硝酸纤维素膜上，并将G‑四联体与抗体或核酸的胶体金复合物吸附在结合垫上，所述硝酸纤维素膜上具有检测线和质控线；所述检测带与所述质控带的距离为5mm～10mm。

A G- four enhanced colloidal gold strip for testing

The present invention relates to a G_tetrad reinforced colloidal gold chromatographic strip, which takes colloidal gold particles as a signal and is characterized in that the strip comprises a sample pad, a bonding pad, a nitrocellulose membrane, an absorption pad and a backplane, and the backing is successively attached with a sample pad, a bonding pad, a nitrocellulose membrane and an absorption pad. The reaction pad is overlapped with the absorption pad, the specific recognition antibody or nucleic acid is fixed on the nitrocellulose membrane in strips, and the G_tetrad and the colloidal gold complex of the antibody or nucleic acid are adsorbed on the binding pad. A detection line and a quality control line are provided on the cellulose membrane, and the distance between the detection band and the quality control band is 5 mm to 10 mm.

【技术实现步骤摘要】
一种G-四联体增强型胶体金层析试纸条
本专利技术涉及一种检测装置装置，特别是一种G-四联体增强型胶体金层析试纸条。
技术介绍
胶体金层析试纸条以胶体金颗粒作为信号，由以下五个不同的部分组成：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板。胶体金试纸条有两类，分为基于免疫依赖原理和基于核酸依赖原理：基于免疫依赖原理的胶体金层析试纸条是利用免疫分析技术与试纸法的结合，是基于医学中的血清学检测方法以抗原与抗体反应为检测手段来进行检测。基于核酸依赖原理的胶体金层析试纸条是利用分子生物学技术与试纸法的结合，检测过程与核酸的复性或核酸的特异性反应有关。胶体金试纸条是的使用方法非常简便，其使用者不需要经过专业训练，只需要观察检测线和质控线的颜色变化即可完成检测，任何工作人员都能轻松快速地学会。胶体金层析试纸条因其具有制作简单、使用方便、价格低廉、灵敏性好、特异性强、稳定性好、反应迅速、无需设备、结果显示直观、一次性使用、不需检修维护等特点，在食品质量安全快速检测和人类健康诊断方面有良好的应用前景。胶体金颗粒的灵敏度不足，很难检测痕量的待测物质。现有的提高灵敏度的方法中，辣根过氧化物酶增强法是最为成熟且高效的一种途径。但是，辣根过氧化物酶是蛋白质大分子，不仅稳定性较差、储存条件苛刻、价格较高，而且在胶体金颗粒上修饰效率较低。希望可以找到一种新型增强材料代替辣根过氧化物酶，克服上述缺陷。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术一种G-四联体增强型胶体金层析试纸条，以胶体金颗粒作为信号，试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板，所述背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；所述结合垫粘附于所述样品垫之上，并与所述反应垫相搭接；所述反应垫与所述吸收垫相搭接；将可以特异性识别的抗体或核酸以条带状固定在硝酸纤维素膜上，并将G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物吸附在结合垫上，所述硝酸纤维素膜上具有检测线和质控线；所述检测带与所述质控带的距离为5mm～10mm。不同种类的生色底物均可以用于G-四联体增强型胶体金层析试纸条，包括2'-联氨-双(3-乙基苯并赛唑啉-6-磺酸)-二胺盐(ABTS)、3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)、3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)、邻苯二胺(OPD)、二氨基联苯胺(DAB)，其中，AEC的增强效果最为明显。G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物合成步骤为：1)胶体金颗粒的制备将50mL的2.4×10-4MHAuCl4水溶液加热至沸腾，然后加入1.67mL的1％柠檬三钠，将沸腾溶液再搅拌30分钟，然后在使用前在4℃下储存；2)G-四联体与胶体金复合物的制备：G-四联体的DNA序列为/SHC6/-AAAAAACTGGGAGGGAGGGAGGG，20μL的100mMG-四联体DNA溶液与980μL的上述胶体金溶液混合并持续搅拌，缓慢加入50mM的NaCl并孵育12h，然后，将溶液在12000×g下离心20min，所得沉淀即为G-四联体与胶体金复合物；3)G-四联体与抗体的胶体金复合物的制备将20μL的1mg/mL抗体溶液1mL与980μL的上述G-四联体与胶体金复合物溶液混合并持续搅拌，继续加入20μL的10％BSA溶液搅拌30min.然后，将溶液在12,000×g下离心20min，所得沉淀即为G-四联体与抗体的胶体金复合物并在4℃下保存在Tris-HAc缓冲液中；4)G-四联体与核酸的胶体金复合物的制备20μL的100mM核酸探针溶液与980μL的上述G-四联体与胶体金复合物溶液混合并持续搅拌，缓慢加入50mM的NaCl并孵育12h，然后，将溶液在12,000×g下离心20min，所得沉淀即为G-四联体与核酸的胶体金复合物并在4℃下保存在Tris-HAc缓冲液中。G-四联体增强型胶体金层析试纸条的检测步骤，包括以下步骤：1)待测样品的制备：根据样品特征和检测原理的差异，将其制备成溶液状态，当待测物为蛋白时或小分子时，可以通过将样品均质后直接获得，当待测物为核酸时，待测样品的制备可通过DNA提取和核酸扩增的步骤获得；2)检测缓冲液的制备：将5μLG-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物加入140μL磷酸盐缓冲液中，然后加入10μL的1μM凝血酶，并将混合溶液在37℃在孵育20min，最后加入10μL的2μM生色底物以及2μM过氧化氢，继续37℃在孵育10min，所得溶液即为检测缓冲液；3)检测步骤：将25μL的待测样品溶液与175μL的检测缓冲液混合滴加在G-四联体增强型胶体金层析试纸条的样品垫上，在毛细管力的作用下，流经硝酸纤维素膜后再检测线和质控线上形成可以肉眼识别的条带，全过程可在5min内完成。附图说明图1为G-四联体增强原理。图2为G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物与生色底物的反应图3为G-四联体增强型胶体金层析试纸条图4为G-四联体增强型胶体金层析试纸条进行转基因大豆GTS40-3-2的检测具体实施方式以下结合附图对本专利技术作进一步的描述。实例1：用G-四联体增强型胶体金层析试纸条(基于免疫依赖原理)进行转基因大豆GTS40-3-2的检测。G-四联体增强型胶体金层析试纸条，以胶体金颗粒作为信号，试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板，所述背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；所述结合垫粘附于所述样品垫之上，并与所述反应垫相搭接；所述反应垫与所述吸收垫相搭接；将可以特异性识别的抗体或核酸以条带状固定在硝酸纤维素膜上，并将G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物吸附在结合垫上，所述硝酸纤维素膜上具有检测线和质控线；所述检测带与所述质控带的距离为5mm～10mm。待测样品的制备：A.大豆样品基因组的提取所述的大豆样品采购于孟山都，采用核酸提取试剂盒对大豆样品进行基因组提取。B.针对GTS40-3-2侧翼序列的环介导等温扩增引物的设计均购于上海英捷生物公司，扩增片段长度为205bp。25μL的扩增体系，包括20mM的Tris-HCl(pH8.8),10mM的KCl,10mM的(NH4)2SO4,5mM的MgSO4,0.1％的TritonX-100,0.5M的甜菜碱,1.2μM的Biotin-FIP和Digoxin-BIP,0.2μM的F3和B3,以及每种dNTP400μM.加入2μL的模板DNA，将混合物在95℃下孵育5min并迅速冷却,然后加入8U的BstDNA大片段聚合酶.将该混合溶液在65℃下反应40min，即可获得大量一段标记Biotiin，另一端标记Digoxin的双链DNA扩增产物，即为待测样品溶液。检测缓冲液的制备：1)胶体金颗粒的制备将50mL的2.4×10-4MHAuCl4水溶液加热至沸腾，然后加入1.67mL的1％柠檬三钠，将沸腾溶液再搅拌30分钟，然后在使用前在4℃下储存；2)G-四联体与胶体金复合物的制备：G-四联体的DNA序列为/SHC6/-AAAAAACTGGGAGGGAGGGAGGG，20μL的100mMG-四联体DNA溶液与980μL的上述胶体金溶液混合并持续搅拌，缓慢加入50mM的NaCl并孵育12h，然后，将溶液在12000×g下离心20min，所得沉淀即为G-四联体与胶体金复合物；3)G-四联体与抗体的胶体金复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种G‑四联体增强型胶体金层析试纸条，以胶体金颗粒作为信号，其特征在于：试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板，所述背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；所述结合垫粘附于所述样品垫之上，并与所述反应垫相搭接；所述反应垫与所述吸收垫相搭接；将可以特异性识别的抗体或核酸以条带状固定在硝酸纤维素膜上，并将G‑四联体与抗体或核酸的胶体金复合物吸附在结合垫上，所述硝酸纤维素膜上具有检测线和质控线；所述检测带与所述质控带的距离为5mm～10mm。

【技术特征摘要】
1.一种G-四联体增强型胶体金层析试纸条，以胶体金颗粒作为信号，其特征在于：试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和背板，所述背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；所述结合垫粘附于所述样品垫之上，并与所述反应垫相搭接；所述反应垫与所述吸收垫相搭接；将可以特异性识别的抗体或核酸以条带状固定在硝酸纤维素膜上，并将G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物吸附在结合垫上，所述硝酸纤维素膜上具有检测线和质控线；所述检测带与所述质控带的距离为5mm～10mm。2.根据权利要求1所述的G-四联体增强型胶体金层析试纸条，其特征在于：不同种类的生色底物均可以用于G-四联体增强型胶体金层析试纸条，包括2'-联氨-双(3-乙基苯并赛唑啉-6-磺酸)-二胺盐(ABTS)、3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)、3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)、邻苯二胺(OPD)、二氨基联苯胺(DAB)，其中，AEC的增强效果最为明显。3.根据权利要求1所述的G-四联体增强型胶体金层析试纸条，其特征在于：所述G-四联体与抗体或核酸的胶体金复合物合成步骤为：1)胶体金颗粒的制备将50mL的2.4×10-4MHAuCl4水溶液加热至沸腾，然后加入1.67mL的1％柠檬三钠，将沸腾溶液再搅拌30分钟，然后在使用前在4℃下储存；2)G-四联体与胶体金复合物的制备：G-四联体的DNA序列为/SHC6/-AAAAAACTGGGAGGGAGGGAGGG，20μL的100mMG-四联体DNA溶液与980μL的上述胶体金溶液混合并持续搅拌，缓慢加入50mM的NaCl并孵育12h，然后，将溶液在12000×g下离心20min，所得沉淀即为...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文涛，
申请(专利权)人：北京言必信科技有限公司，中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11