胃泌素释放肽前体稀释液及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种胃泌素释放肽前体稀释液及其应用和胃泌素释放肽前体检测试剂盒。本发明专利技术胃泌素释放肽前体稀释液包括柠檬酸‑柠檬酸钠和柠檬酸‑磷酸氢二钠中一种或两种缓冲液0.01‑0.5mol/L、无机盐50‑500mmol/L、防腐剂0.01‑0.5％w/w。本发明专利技术胃泌素释放肽前体稀释液用于配制胃泌素释放肽前体的校准品和质控品。本发明专利技术胃泌素释放肽前体检测试剂盒中含有用本发明专利技术胃泌素释放肽前体稀释液配制的胃泌素释放肽前体校准品和质控品。本发明专利技术胃泌素释放肽前体稀释液不仅能够保证胃泌素释放肽前体抗原在2‑8℃能实现长期液态保存，而且显著提升了胃泌素释放肽前体抗原在37℃液态保存的热稳定性。

【技术实现步骤摘要】
胃泌素释放肽前体稀释液及其应用和试剂盒
本专利技术属于医疗试剂
，具体涉及一种胃泌素释放肽前体稀释液、胃泌素释放肽前体校准品或质控品和胃泌素释放肽前体检测试剂盒。
技术介绍
肺癌的发病率和病死率在世界上呈逐年升高的趋势，严重危害着人类的健康，肺癌按组织病理学分类分为两大类：小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)和非小细胞肺癌non-smallcelllungcancer，NSCLC)，其中SCLC占总肺癌的人群比例约为15％-20％，且具有恶性程度较高、增殖快、易远处转移的特点。与NSCLC相比，SCLC对化疗、放疗较敏感，早期生存率较高，但SCLC患者确诊时多为中晚期，错过最佳治疗时机，故早期诊断SCLC显得尤为重要。因此.寻找对SCLC早期诊断有辅助作用的血清肿瘤标志物具有重要的意义。近年来的实验研究表明SCLC的细胞株及肿瘤组织细胞质中的高尔基体内储存着分泌的胃泌素释放肽(GRP)，在适当时释放到组织中，与胞膜上的GRP受体相结合，促进肿瘤细胞的无限增长，低水平的GRP即可刺激SCLC肿瘤细胞的合成，因此GRP被认为是SCLC的自主生长因子。但GRP肽链端容易被分解酶裂解导致降解迅速，故其活性部分在血液中不稳定，临床上直接检测GRP较困难。GRP的前体结构ProGRP可分为3种含有共同片段为ProGRP31-98的分子亚型.可以在血浆中稳定表达，ProGRP是GRP的基因编码产物，广泛存在于非胃窦组织、神经纤维、脑和肺的神经内分泌细胞中，临床上通常检测ProGRP的表达水平来反映GRP在人体中的表达。目前，临床上ProGRP作为SCLC的重要肿瘤标志物。建立一种快速，简便，灵敏，准确可靠的检测ProGRP水平的方法尤为重要。ProGRP的检测主要为免疫学诊断方法，包括放射性同位素免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附试验法(ELISA)、以及胶体金免疫层析法(ICA)等。其中，放射性同位素免疫分析法法因其存在着操作繁琐、检测时间长、不适合大批量检测、结果重复性差、核素污染等问题。酶联免疫吸附试验法存在着操作繁琐、测定周期偏长、灵敏度相对较低、线型范围偏窄等诸多不足；尤其是，由于ProGRP血清含量偏低，采用ELISA法检测ProGRP表现出明显的灵敏度较差的问题，使临床无法在早期快速准确的诊断出SCLC的发作，因而限制了ELISA法在ProGRP临床检测方面的进一步应用。酶联免疫法一般都通过延长反应时间来提高试剂检测灵敏度，手工操作下，一般都需耗时2-3小时，且手工操作误差较大。在上述现有的检测方法存在缺陷的基础上，化学发光免疫分析法具有灵敏度高、速度快、特异性强和操作简便等优势，现在成为ProGRP测定的重要方法。CLIA的主要优点是灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等。化学发光法虽具有准确、特异性强、精密度好的优点，其灵敏度也远高于酶联免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法；但是，现有的ProGRP商业检测试剂盒灵敏度依然不够高，分析灵敏度都在3pg/mL以上，因而不能够准确地检测超低浓度的ProGRP，故不能满足ProGRP早期诊断的高要求。另外，上述化学发光免疫分析法由于使用两点定标的试剂，结果值受定标结果影响很大。试剂各组分的热稳定性，是试剂的一项关键指标。然而ProGRP抗原或ProGRP校准品、ProGRP质控品在常规稀释液中的热稳定性较差，从而影响了ProGRP检测的灵敏度和准确度。具体地，例如目前康乃格公司提供6点定标品和2水平质控品，均为冻干粉，复融后2-8℃仅能稳定保存3天。Roche公司提供的ProGRP检测试剂盒，可将其中的生物素化的抗ProGRP的单克隆抗体和钌(Ru)络合物标记的抗ProGRP单克隆抗体与抗原形成三明治夹心法结构，通过电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定ProGRP。但其提供2点定标品和2水平质控品，均为冻干粉，复溶后20-25℃仅能稳定5个小时，2-8℃仅能稳定保存14天。因此，目前关于ProGRP抗原抗体反应的体外诊断试剂的稳定性报道都是针对2-8℃保存条件下的长期稳定性才做稳定性评价。但在实际试剂的运输、流通、使用、保存等环节中，经常会出现10℃以上的环境。个别条件较差的地区或实验室，夏天温度可达到37℃-40℃。如果缓冲液缓冲体系、pH、离子强度、稳定剂、防腐剂等不适合在温度偏高的环境下会造成抗原活性下降，这种下降一般是不可逆的，从而影响试剂结果或使试剂失效。ProGRP抗原或ProGRP校准品、ProGRP质控品在常规稀释液中的热稳定性较差，2-8℃长期热稳定性也不太好，所以大多数厂家选择的是冻干方案。但冻干品容易受冻干工艺、赋形添加物的影响，常会出现瓶间差，尤其是复溶后稳定性差，实际有效的校准品、质控测试受限。因此研究一种能提高ProGRP抗原在液态保存热稳定性的稀释液很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种胃泌素释放肽前体稀释液，以克服常规胃泌素释放肽前体稀释液对胃泌素释放肽前体热稳定性较差，2-8℃长期热稳定性也不理想的技术问题。本专利技术的另一目的在于提供一种胃泌素释放肽前体校准品或质控品，以解决胃泌素释放肽前体校准品或质控品热稳定性或其冻干品复融后稳定性不理想的技术问题。本专利技术的又一目的在于提供一种胃泌素释放肽前体待测样本处理液，以解决胃泌素释放肽前体待测样本处理过程中或之后所含的胃泌素释放肽前体由于热稳定性差而导致检测不准确的技术问题。本专利技术的又一目的在于提供一种胃泌素释放肽前体检测试剂盒，以解决现有胃泌素释放肽前体检测试剂盒和灵敏度准确性不高的技术问题。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的一方面，提供了一种胃泌素释放肽前体稀释液。所述胃泌素释放肽前体稀释液包含如下组分：柠檬酸-柠檬酸钠、柠檬酸-磷酸氢二钠中一种或两种缓冲液0.01-0.5mol/L无机盐50-500mmol/L防腐剂0.01-0.5％w/w。本专利技术的另一方面，提供了一种胃泌素释放肽前体校准品或质控品，包括胃泌素释放肽前体抗原和用于稀释所述胃泌素释放肽前体抗原的稀释液。其中，所述稀释液为本专利技术胃泌素释放肽前体稀释液。本专利技术的又一方面，提供了一种胃泌素释放肽前体待测样本处理液，所述处理液为本专利技术胃泌素释放肽前体稀释液。本专利技术的又一方面，提供了一种胃泌素释放肽前体检测试剂盒。所述胃泌素释放肽前体检测试剂盒包括胃泌素释放肽前体质控品、胃泌素释放肽前体校准品；其中，所述胃泌素释放肽前体校准品和胃泌素释放肽前体质控品为本专利技术胃泌素释放肽前体校准品和质控品。本专利技术的又一方面，提供了本专利技术胃泌素释放肽前体稀释液、本专利技术胃泌素释放肽前体校准品或质控品、本专利技术胃泌素释放肽前体待测样本处理液或本专利技术胃泌素释放肽前体检测试剂盒在检测胃泌素释放肽前体中的应用。与现有技术相比，本专利技术胃泌素释放肽前体稀释液不仅能够保证胃泌素释放肽前体抗原在2-8℃能实现长期液态保存，而且显著提升了胃泌素释放肽前体抗原在37℃液态保存的热稳定性。本专利技术胃泌素释放肽前体校准品或质控品由于是采用上述本专利技术胃泌素释放肽前体稀释液稀释胃泌素释放肽前体抗原，从而使得本专利技术胃泌素释放肽前体校准品和质控品不仅能够在2-8℃能实现长期液态本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于，包含如下组分：柠檬酸‑柠檬酸钠、柠檬酸‑磷酸氢二钠中一种或两种缓冲液0.01‑0.5mol/L无机盐                50‑500mmol/L防腐剂                0.01‑0.5％w/w。

【技术特征摘要】
1.一种胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于，包含如下组分：柠檬酸-柠檬酸钠、柠檬酸-磷酸氢二钠中一种或两种缓冲液0.01-0.5mol/L无机盐50-500mmol/L防腐剂0.01-0.5％w/w。2.根据权利要求1所述的胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于：所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，所述柠檬酸与柠檬酸钠的摩尔比为1:0.5-1:4；所述柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中，所述柠檬酸与磷酸氢二钠的摩尔比为1:0.5-1:3。3.根据权利要求1或2所述的胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于：所述无机盐为NaCl、KCl、MgCl2中的任一种或两种以上的混合物；所述防腐剂为叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸、苯甲酸盐类、山梨酸盐类、亚硝酸钠、Proclin300、Proclin950中的任一种或两种以上的混合物。4.根据权利要求1或2所述的胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于：还包括0.01-10％w/w封闭剂、1-20％w/w多元醇渗透剂、0.01-2.00％v/v表面活性剂、20-200ug/mL酶抑制剂、0.01-5％w/w络合物中的至少一种组分。5.根据权利要求4所述的胃泌素释放肽前体稀释液，其特征在于：所述封闭剂为BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶中的任一种或两种以上的混合物；所述多元醇渗透剂为乙二醇、丙三醇、蔗糖、海藻糖、PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000中的任一种或两种以上的混合物；所述表面活性剂为非离子表面活性剂；所述酶抑制剂为抑肽酶、胃蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制、亮抑蛋白酶肽、苯甲基磺酰氟、乙二胺四乙酸、N-甲苯磺酰-L-赖氨酰-氯甲基酮、苯丙胺酰氯甲酮、4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐中的任一种或两种以上的混合物；所述络合物为含氨基二乙酸络合剂。6.一种胃泌素释放肽前体校准品或质控品，包括胃泌素释放肽前体抗原和用于稀释所述胃泌素释放肽前体抗原的稀释液，其特征在于：所述稀释液为权利要求1-5任一所述的胃泌素释放肽前体稀释液。7.一种胃泌素释放肽前体待测样本处理液，其特征在于：所述处理液为权利要求1-5任一所述的胃泌素释放肽前体稀释液。8.一种胃泌素释放肽前体检测试剂盒，包括胃泌素释放肽前体校准品、胃泌素释放肽前体质控品，其特征在于：所述胃泌素释放肽前体校准品和胃泌素释放肽前体质控品为权利要求6所述的胃泌素释放肽前体校准品和质控品。9.根据权利要求8所述的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，其特征在于，还包括如下第一至第三任一组试剂：第一组试剂，包括抗胃泌素释放肽前体抗体标记的示踪标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶微，殷俊，袁锦云，陈庆，李婷华，李武，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44