嘌呤检测方法技术

本发明专利技术涉及食品检测方法，特别是涉及嘌呤检测方法，包括如下步骤：将待检测样品进行预处理；利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇；甲酸铵溶液为0.3～0.4g甲酸铵溶于500ml超纯水中制成，甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；甲酸铵溶液与甲醇的比例(按体积计)为：97～99:3～1；液相色谱分析仪的流速为0.8～1.2mL/min。利用该方法检测，使得四种嘌呤的分离效果好且保留时间与标准品的保留时间对应。并且本发明专利技术的嘌呤检测方法的预留时间在11min～17min之间，大大缩减了预留时间，不仅提高了检测效率，而且大大降低了检测成本。

Purine detection method

The invention relates to the method of food detection, in particular to the purine detection method, including the following steps: the sample is pretreated, and the pre treated sample is analyzed by a liquid chromatography analyzer, in which the liquid phase chromatograph analyzer consists of ammonium methate solution and methanol; ammonium formate solution is 0. Ammonium formate of 3 ~ 0.4g was dissolved in 500ml super pure water, the pH value of ammonium formate solution was 3.5 ~ 3.59, the ratio of ammonium formate solution and methanol (by volume) was 97 ~ 99:3 ~ 1, and the flow velocity of the liquid chromatography analyzer was 0.8 to 1.2mL/min. By using this method, the separation effect of four purines is good, and the retention time corresponds to the retention time of standard products. And the reserved time of the purine detection method of the invention is between 11min and 17min, which greatly reduces the reserved time, not only improves the detection efficiency, but also greatly reduces the detection cost.

【技术实现步骤摘要】
嘌呤检测方法
本专利技术涉及食物检测方法，特别是涉及嘌呤检测方法。
技术介绍
食物中嘌呤主要分为四种：鸟嘌呤、腺嘌呤、次黄嘌呤和黄嘌呤，分别对食物中这四种嘌呤物质进行含量检测，结果相加即为食物的嘌呤含量。现对嘌呤进行检测的主流方法为高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱仪主要分为几个部分：存放流动相的贮液器以及脱去流动相中的气体以保护色谱仪的脱气装置(输液系统)、将食物样品及流动相通过高压泵的作用进入色谱柱的进样装置(进样系统)、色谱过程中携带待测食物样品向前移动的流动相和实现食物样品中四种嘌呤分离的固定相——色谱柱(分离系统)，检测到样品分离并将其转换成图像信号(峰信号)的检测器(检测系统)以及计算峰信号面积的数据处理系统。简单来说，食物样品及流动相通过进样系统运送到色谱柱(固定相)，在色谱柱(固定相)内流动相携带食物样品向前移动，食物样品中的成分因质量、结构等不同在色谱柱(固定相)中的吸附时间不同，因此离开色谱柱的时间也不同(保留时间)。当某种成分离开色谱柱时即被检测器感受，并在显示屏以峰的形式显示出来，通过数据处理系统可得知峰面积的大小，而峰面积的大小与成分的含量成正比。现有技术虽然能四种嘌呤基线分离，但鸟嘌呤和腺嘌呤标准品峰仅能基线分离，并且在实际食品嘌呤检测中四种嘌呤保留时间与标准品保留时间不能完全对应，黄嘌呤在标准品与食品检测中的保留时间前后甚至相差两分钟。同时，标准品中鸟嘌呤、腺嘌呤峰相隔太近可能导致食品中两种嘌呤测定时的峰重叠，影响实际食品嘌呤检测的结果。四种嘌呤峰的保留时间在23.414分钟左右，若用于大批量食品的检测时间消耗较长，同时因检测时长较长所带来的流动相试剂的用量将增加，检测成本相应增加。
技术实现思路
针对检测时间长，且四种嘌呤之间易发生重合，检测结果不可靠的问题，本专利技术提供嘌呤检测方法。为达到专利技术目的，本专利技术提供一种嘌呤检测方法，包括如下步骤：将待检测样品进行预处理；利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇；甲酸铵溶液为0.3g～0.4g甲酸铵溶于500ml超纯净水中制成，甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；甲酸铵溶液与甲醇的比例(按体积计)为：97～99:3～1；液相色谱分析仪的流速为0.8～1.2mL/min。在其中一个实施例中，甲酸铵为0.3153g。在其中一个实施例中，甲酸铵溶液的PH值为3.54～3.56。在其中一个实施例中，甲酸铵溶液的PH值为3.55。在其中一个实施例中，甲酸铵溶液与所述甲醇的比例为98:2。在其中一个实施例中，液相色谱分析仪的流速为1.2mL/min。在其中一个实施例中，液相色谱仪的固定相为WatersAtlantisT3色谱柱。在其中一个实施例中，将待检测样品进行预处理的步骤中，具体包括如下步骤：利用5％～10％浓度的高氯酸水解待检测样品。在其中一个实施例中，高氯酸的浓度为10％。本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供的嘌呤检测方法，将流动相中甲酸铵溶液的pH调节至3.5至3.59之间，并与甲醇按着97～99比3～1的比例进行混合，并将液相色谱仪的流速设定在0.8～1.2mL/min之间。经过反复的验证，四种嘌呤的分离效果好且保留时间与标准品的保留时间对应。并且本专利技术的嘌呤检测方法的预留时间在11min～17min之间，大大缩减了预留时间，不仅提高了检测效率，而且大大降低了检测成本。附图说明图1为本专利技术的实施例的流程图；图2为本专利技术的实施例中甲酸铵溶液的不同pH影响嘌呤分离效果的分离色谱图；图3为本专利技术实施例中甲酸铵溶液与甲醇不同比例影响嘌呤分离效果的分离色谱图；图4为本专利技术实施例中液相色谱仪的不同流速影响嘌呤分离效果的分离色谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例对本专利技术嘌呤检测方法进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。如图1所示，本实施例提供一种嘌呤检测方法，包括如下步骤：步骤100，将待检测样品进行预处理；步骤200，利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇；甲酸铵溶液为0.3g～0.4g甲酸铵溶于500ml超纯净水中制成，甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；甲酸铵溶液与甲醇的比例(按体积计)为：97～99:3～1；液相色谱分析仪的流速为0.8～1.2mL/min。在上述实施例中，甲酸铵的重量较佳地为0.3153g。另外，液相色谱仪的固定相的种类可以为多种，例如：SHIMADZUVP-ODS色谱柱、WatersAtlantisT3色谱柱等。较佳地为在液相色谱仪的固定相为WatersAtlantisT3色谱柱。WatersAtlantisT3色谱柱能将三种嘌呤峰完全分离，且峰形尖锐，无黏连，峰形好。本实施例提供的嘌呤检测方法，将流动相中甲酸铵溶液的pH调节至3.5至3.59之间，并与甲醇按着97～99比3～1的比例进行混合，并将液相色谱仪的流速设定在0.8～1.2mL/min之间。经过反复的验证，四种嘌呤的分离效果好且保留时间与标准品的保留时间对应。并且本实施例的嘌呤检测方法的预留时间在11min～17min之间，大大缩减了预留时间，不仅提高了检测效率，而且大大降低了检测成本。在其中一个实施例中，甲酸铵溶液的pH值为3.54～3.56。如图2所示，经过专利技术人付出创造性劳动下经过反复大量的实验，现给出重点部分实验例，将甲酸铵溶液的pH设置在3.54～3.56，即对甲酸铵溶液在pH3.54、pH3.55和pH3.56时，且甲酸铵溶液与甲醇体积比为98:2进行配比进行实验，得出四种嘌呤能够基线分离。图2中的A为甲酸铵溶液的pH值为3.54时四种嘌呤分离色谱图，B为甲酸铵溶液的pH值为3.55时四种嘌呤分离色谱图，C为甲酸铵溶液的pH值为3.56时四种嘌呤分离色谱图。通过分离图谱可以看出，在甲酸铵溶液pH在3.55时，四种嘌呤能够完全分离，提高了嘌呤检测方法的精准度。在其中一个实施例中，甲酸铵溶液与甲醇的比例为98:2。经过专利技术人付出创造性劳动下经过反复大量的实验，现给出重点部分实验例，在甲酸铵溶液的pH值为3.55的前提下，针对甲酸铵溶液与甲醇按体积比97:3、98:2、99:1进行实验，每组实验中四种嘌呤均能在完全分离，且分离时间均在12～17min。如图3所示，图3中的A为甲酸铵溶液与甲醇体积比为97:3的四种嘌呤分离色谱图，B为甲酸铵溶液与甲醇体积比为98:2的四种嘌呤分离色谱图在上述实验中，C为甲酸铵溶液与甲醇体积比为99:1的四种嘌呤分离色谱图得出。经过实验得出，甲酸铵溶液与甲醇的体积比按98:2时，四种嘌呤能够完全分离且分离时间短，分离时间在12min以内，极大缩小了检测时间，减少了流动相的使用量，极大地降低了使用成本。在其中一个实施例中，液相色谱分析仪的流速为1.2mL/min。经过专利技术人付出创造性劳动下经过反复大量的实验，现给出重点部分实验例，分别将液相色谱分析仪的流速设置为0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min时，四种嘌呤不仅能够完全分离、峰形良好，且流速峰的保留时间短，进一步地提高了嘌呤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嘌呤检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将待检测样品进行预处理；利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，所述液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇；所述甲酸铵溶液为0.3g～0.4g甲酸铵溶于500ml超纯净水中制成，所述甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；所述甲酸铵溶液与所述甲醇的比例(按体积计)为：97～99:3～1；所述液相色谱分析仪的流速为0.8～1.2mL/min。

【技术特征摘要】
1.一种嘌呤检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将待检测样品进行预处理；利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，所述液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇；所述甲酸铵溶液为0.3g～0.4g甲酸铵溶于500ml超纯净水中制成，所述甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；所述甲酸铵溶液与所述甲醇的比例(按体积计)为：97～99:3～1；所述液相色谱分析仪的流速为0.8～1.2mL/min。2.根据权利要求1所述的嘌呤检测方法，其特征在于，所述甲酸铵为0.3153g。3.根据权利要求1所述的嘌呤检测方法，其特征在于，所述甲酸铵溶液的pH值为3.54～3.56。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊文超，
申请(专利权)人：昆明黑马软件股份有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53