一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，所述方法包括脂肪干细胞制备、脂肪间充质干细胞的传代培养、细胞收获。在培养基中加入5ng/ml EGF+5ng/ml FGF+5ng/ml IFN‑γ+5ng/ml TNF‑α+1% L‑GlutaMAX,这些因子同时加入培养体系中可以有效促进MSC的增殖，从而有效缩短培养时间。本发明专利技术既可以有效降低成本又可以快速获得优质的脂肪干细胞，减少对细胞的伤害，缩短了培养周期，减少污染，而且能够提高细胞纯度。

A method for isolation and purification of adipose derived stem cells from adipose tissue

The present invention provides a method for the separation and purification of fat stem cells from adipose tissue. The methods include preparation of fat stem cells, subculture of adipose mesenchymal stem cells, and cell harvest. In the medium, 5ng/ml EGF+5ng/ml FGF+5ng/ml IFN +5ng/ml TNF +1% L GlutaMAX, which can effectively promote the proliferation of MSC, can effectively shorten the incubation time. The invention can not only reduce the cost effectively, but also quickly obtain the high quality fat stem cells, reduce the damage to the cells, shorten the culture cycle, reduce the pollution, and improve the purity of the cells.

【技术实现步骤摘要】
一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法
本专利技术属于生物
，具体提供一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法。
技术介绍
脂肪干细胞（adipose-derivedstemcells，ADSCs）是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。脂肪干细胞可以分化成多胚层细胞，包括中胚层，内胚层和外胚层细胞，并且能分泌许多对人体组织有利的细胞因子。脂肪干细胞是一群多功能间充质干细胞，可以分化为其他的细胞系，在脂肪组织的非脂肪(间质)碎片中存在大量的脂肪干细胞，且易于分离获取。脂肪干细胞可以恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容；同时也能使身体机能得到充分改善，可以有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。大量的研究证实ADSCs具有其它类型间充质干细胞如骨髓间充质干细胞所没有的一些优势：脂肪组织来源广泛，取材方便，干细胞获取量大，容易分离纯化，脂肪组织供区损伤微小，分化能力强。因而，脂肪干细胞是一种很好的组织工程和再生医学种子细胞。脂肪干细胞已经在临床上开始应用并且效果显著，目前在医疗美容、免疫力提升等方面应用较为广泛，并且在心血管疾病、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，其特征在于：所述方法包括脂肪干细胞制备、脂肪间充质干细胞的传代培养、细胞收获。

【技术特征摘要】
1.一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，其特征在于：所述方法包括脂肪干细胞制备、脂肪间充质干细胞的传代培养、细胞收获。2.根据权利要求1所述的一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，其特征在于：所述的脂肪干细胞制备为：（1）脂肪组织转移至50ml离心管，每管40ml，800g，8分钟；（2）离心后的脂肪组织转移至新的离心管中，等体积加入0.9%生理盐水，800g8分钟；（3）弃掉上清，重复步骤2洗涤脂肪组织两次；（4）等体积向脂肪沉淀中加消化液，充分混匀封口后放入37℃摇床，150rpm，30-50min；（5）取出消化好的脂肪组织，离心，800g，10分钟；（6）弃掉上层脂肪，用DMEM/F12培养基重悬离心后的细胞沉淀，离心，800g10分钟；重复步骤6洗涤细胞沉淀；（7）弃掉离心后的上清，DMEM/F12培养基重悬细胞沉淀并混匀，先用40um滤网过滤细胞；过滤后的细胞离心，800g10分钟，弃上清；（8）1.0mlDMEM/F12培养基重悬细胞沉淀，混匀后加入4.0ml预冷的0.3%NaCl溶液，室温放置10分钟，裂解红细胞；（9）离心，400g5分钟，弃掉上清；（10）用MSC无血清培养基重悬细胞沉淀，台盼蓝染色细胞计数，调整细胞密度为2.0*10^6/ml，每个培养瓶先加14ml培养基，再加1.0ml细胞悬液，混匀；24小时后细胞换液，去除未贴壁细胞，以后每三天换液一次；培养至第五天后，细胞生长密度达到90%，脂肪间充质干细胞传代培养。3.根据权利要求2所述的一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，其特征在于：所述消化液中含0.075~0.5wt.%I型胶原酶+0.1wt.%IV型胶原酶+0.1wt.%胰蛋白酶。4.根据权利要求2所述的一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法，其特征在于：MSC无血清培养基为MSC无血清培养基+5ng/mlEGF+5ng/mlFGF+5ng/mlIFN-γ+5ng/mlTNF-α+...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏爱盟，肖桂清，谢燕萍，郑得胜，李科，
申请(专利权)人：福建省银丰干细胞工程有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35