一种牙髓间充质干细胞的培养方法技术

一种牙髓间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：准备牙髓样本，分离培养牙髓间充质干细胞，克隆化培养分离牙髓间充质干细胞，牙髓间充质干细胞检测，牙髓间充质干细胞检测染色。本发明专利技术的有益效果在于：1、利用克隆分离培养的细胞之间排列紧密，中心部细胞界限不清。呈圆形或不规则状及形成细胞结节样，周边部细胞呈多角形或短梭形，胞浆较少，核浆比例大，核仁明显，部分细胞呈成纤维状；2、不会产生严重的免疫排斥问题；3、取材方便安全和交叉感染风险小，可以用于修复缺损牙齿及牙齿再生；4、可促进皮肤伤口愈合及再生，延缓衰老或治愈失明，此外，牙髓干细胞还可治疗心脏病、类风湿性关节炎、烧伤、中风或软骨受损等，用途广泛。

A culture method of dental pulp mesenchymal stem cells

A method for the cultivation of dental pulp mesenchymal stem cells, including the following steps: preparation of dental pulp samples, isolation and culture of dental pulp mesenchymal stem cells, cloning and isolation of dental pulp mesenchymal stem cells, dental pulp mesenchymal stem cells detection, dental pulp mesenchymal stem cells detection and staining. The beneficial effects of the invention are as follows: 1. The cells separated by cloning and culture are closely arranged, and the cell boundaries of central part are not clear. Circular or irregular shape and formation of cell nodules, the peripheral cells are polygonal or short shuttle shaped, with less cytoplasm, large nucleolus ratio, obvious nucleolus, and some cells are fibroid. 2, no serious immune rejection problem is produced; 3, it is convenient for safety and cross infection risk, and can be used to repair the defect teeth and can be used to repair the defective teeth and to repair the defect teeth. Tooth regeneration, 4, can promote healing and regeneration of skin wound, postpone aging or cure blindness. In addition, dental pulp stem cells can also treat heart disease, rheumatoid arthritis, burns, stroke, or cartilage damage.

【技术实现步骤摘要】
一种牙髓间充质干细胞的培养方法
本专利技术涉及生物医学工程领域，特别涉及一种牙髓间充质干细胞的培养方法。
技术介绍
1999年，《Science》将人类胚胎干细胞研究成果评为当年世界十大科技进展之首，2000年，《Time》周刊将其列为20世纪末世界十大科技成就之首，并认为胚胎干细胞和人类基因组将同时成为新世纪最具发展和应用前景的领域。至此干细胞研究成为近年来生物学以及医学领域中最引人注目的热点之一。干细胞是在生物个体的生长和发育中起“主干”作用的原始细胞，是一种具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，它包括胚胎干细胞和成体干细胞。虽然胚胎干细胞能分化成各种细胞类型，但这种分化是“非定位性”"的，而且存在伦理道德等方面的问题。成体干细胞则不存在着伦理、法律、免疫排斥反应等问题，同时具有取材方便、来源广等优点，因而，成体干细胞在组织工程、基因治疗及个体化治疗的研究中具有较好的临床应用前景。其实，干细胞的来源非常广泛。包含乳牙、骨髓、脐带血、脐带、智齿等，但不同组织的干细胞使用时是有区别的。目前市场上主要的产品为脐带血、脐带衍伸的干细胞储存，虽然其中含有丰富的干细胞，但局限于胎儿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、准备牙髓样本：将牙齿样本浸泡在缓冲溶液或将牙齿样本冷藏保存，其保存时间在40h~47h，其后劈开牙冠，取出牙髓;S2、分离培养牙髓间充质干细胞:用0.01M冻存液PBS冲洗后，将取出的牙髓剪成约1mm3×1mm3×1mm3小块，再用0.3%的I型胶原酶和0.4%的分解酶在37℃中消化1h，轻轻吹打离散单细胞团块，将形成的单细胞悬液通过孔径为70μm的细胞筛网后800r/min离心5min；再用0.01M冻存液PBS冲洗一次，将细胞沉淀，同时将密度5000/cm2的干细胞培养基接种于培养瓶中培养，每3d换液1次；S3、克隆化培养...

【技术特征摘要】
1.一种牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、准备牙髓样本：将牙齿样本浸泡在缓冲溶液或将牙齿样本冷藏保存，其保存时间在40h~47h，其后劈开牙冠，取出牙髓;S2、分离培养牙髓间充质干细胞:用0.01M冻存液PBS冲洗后，将取出的牙髓剪成约1mm3×1mm3×1mm3小块，再用0.3%的I型胶原酶和0.4%的分解酶在37℃中消化1h，轻轻吹打离散单细胞团块，将形成的单细胞悬液通过孔径为70μm的细胞筛网后800r/min离心5min；再用0.01M冻存液PBS冲洗一次，将细胞沉淀，同时将密度5000/cm2的干细胞培养基接种于培养瓶中培养，每3d换液1次；S3、克隆化培养分离牙髓间充质干细胞：待细胞生长达80％~85%汇合度时，用0.25%的胰酶消化传代，再用0.01M冻存液PBS冲洗一次，将细胞沉淀，同时将密度5000/cm2的干细胞培养基接种于培养瓶中培养，每3d换液1次，其中等细胞生长达80％汇合度时，用0.25%的胰酶消化收获；S4、牙髓间充质干细胞检测：将收获的子代牙髓间充质干细胞，利用PBS重悬细胞，调整细胞密度为1×106/ml，取出1ml，加入预冷的无水乙醇2ml吹打混匀，在4℃下过夜并离心弃乙醇后再流式细胞仪上进行细胞周期检测；S5、牙髓间充质干细胞检测染色。2.根据权利要求1所述的牙髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述牙齿样本为19—29岁...

【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，
申请(专利权)人：深圳中生健康管理有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44