A tissue culture method for young leaves of Trichosanthes Trichosanthes, including explant resistance to browning, disinfection, induction and cultivation of leaf callus, induction and differentiation of cluster buds, subculture, rooting and seedling transplanting. In this method, the fresh leaf petiole leaves were taken as explants and treated with vitamin C and Potassium Permanganate aqueous solution successively. The browning rate and pollution rate of the explants were reduced. The survival rate of the explants was 95%, and the harmful substances were adsorbed and suppressed by adding activated carbon and polyvinylpyrrolidone in the medium. It can increase the differentiation rate and reduce the browning rate of explants. The invention first uses cytokinin and growth combination to direct induction of leaf differentiation callus, reducing the first induction of adventitious bud differentiation, and improving the efficiency of tissue culture. The survival rate of transplanting is up to 90% by using the seedbed covering small arch shed. This method can provide technical support for the utilization of factory seedlings of Trichosanthes trichosanthis.
【技术实现步骤摘要】
一种栝楼嫩叶的组培育苗方法
本专利技术涉及通过组织培养技术的植物再生,进一步而言,涉及栝楼嫩叶的组培育苗方法。
技术介绍
栝楼(Trichosantheskirilowii)为葫芦科栝楼属多年生攀援藤本植物,产辽宁、华北、华东、中南、西北、四川、贵州和云南。其根(天花粉)、果实(瓜蒌)、果皮(瓜蒌皮)、种子(瓜蒌仁)均是常用中药材,用于治疗多种疾病。此外,其果实可美容、观赏,种子、根可食用,全株可用于绿化。由于经济价值很高,近年来其种植范围越来越广、种植面积逐步扩大。栝楼为雌雄异株,开花前无明显的形态差异,难以分辩,而种子繁殖的幼苗,雌雄比例约为3:7,而栝楼栽培雌雄植株的合理配比为10∶1,种子苗栽培利用直接影响产量和经济效益。分根繁殖虽然能分辨雌雄株,但繁殖系数低,且种苗容易退化,使发展良种生产受到一定限制。只有通过组织培养技术,才能实现栝楼种苗雌雄株定向培养,解决雌雄株合理配比的问题。目前栝楼组织培养技术研究报道较多,主要存在幼嫩外植体杀菌不彻底,伤口容易褐变,移栽成活率低等问题,导致工厂化组培育苗困难,无法满足规模化生产种苗的需要。以栝楼顶芽、腋芽、带芽茎段、叶片、块茎幼苗的茎尖和卷须等为外植体选择的研究均有报道,大部分研究表明,带芽茎段是较好的外植体。由于栝楼嫩芽带有绒毛,如果杀菌时间较短,则容易污染,杀菌时间过长,则外植体剪口容易氧化褐变,外植体消毒不彻底导致初诱导不成功是当前栝楼组培育苗技术急需攻克的技术难点之一。大部分研究均采用75%乙醇联合0.1%升汞的植物组织培养常用消毒方法,污染率在5.0%~42.8%;采用5.2%次氯酸钠替代0.1 ...
【技术保护点】
1.一种栝楼嫩叶的组培育苗方法,其特征在于包含以下步骤:(1)外植体消毒: 采集刚萌发5~10天的栝楼带叶柄嫩叶做外植体;冲洗干净后,用3000mg.L‑1维生素C蒸馏水溶液浸泡40min,然后用2500 mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3~5次,再用1000 mg.L‑1氯化汞水溶液常规消毒10min,蒸馏水冲洗5次;(2)组织培养条件的设定: 各阶段的基本培养基均为:1/2MS+12 g.L‑1琼脂+30 g.L‑1蔗糖,pH值6.0;培养条件为:温度24℃~26℃,光照为1500~2000Lux,光照时间为12~14h/d;(3)愈伤组织诱导培养: 将消毒后外植体的叶柄插入培养基中,叶片部分出露,诱导叶片分化愈伤组织;培养30天后,可产生直径1.5cm的绿色疏松愈伤组织;培养基配方:基本培养基+1.0 g.L‑1活性炭+1.0 g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮+1.0 mg.L‑1噻苯隆+ 0.1 mg.L‑12,4‑二氯苯氧乙酸+ 0.5 mg.L‑1 萘乙酸;(4)丛生芽诱导培养: 将初诱导培养产生的愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种到丛生芽诱导培养基 ...
【技术特征摘要】
1.一种栝楼嫩叶的组培育苗方法,其特征在于包含以下步骤:(1)外植体消毒:采集刚萌发5~10天的栝楼带叶柄嫩叶做外植体;冲洗干净后,用3000mg.L-1维生素C蒸馏水溶液浸泡40min,然后用2500mg.L-1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3~5次,再用1000mg.L-1氯化汞水溶液常规消毒10min,蒸馏水冲洗5次;(2)组织培养条件的设定:各阶段的基本培养基均为:1/2MS+12g.L-1琼脂+30g.L-1蔗糖,pH值6.0;培养条件为:温度24℃~26℃,光照为1500~2000Lux,光照时间为12~14h/d;(3)愈伤组织诱导培养:将消毒后外植体的叶柄插入培养基中,叶片部分出露,诱导叶片分化愈伤组织;培养30天后,可产生直径1.5cm的绿色疏松愈伤组织;培养基配方:基本培养基+1.0g.L-1活性炭+1.0g.L-1聚乙烯吡咯烷酮+1.0mg.L-1噻苯隆+0.1mg.L-12,4-二氯苯氧乙酸+0.5mg.L-1萘乙酸;(4)丛生芽诱导培养:将初诱导培养产生的愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种到丛生芽诱导培养基上;培养35天后,每块可分化5~8个丛生芽;基本培养基配方:+1.0g.L-1活性炭+1.0g.L-1聚乙烯吡咯烷酮+2.0mg.L-16-卞氨基嘌呤+0.1mg.L-1噻苯隆+0.2mg.L-1萘乙酸;(5)丛生芽继代增殖培养:将高度1.0cm以下丛生芽分割成带愈伤组织小块的单株后接种到继代增殖培养基上,培养20天后,可产生5个以上丛生芽;基本培养...
【专利技术属性】
技术研发人员:席培宇,王济红,蔡国俊,张丽敏,张建利,李安定,龙琴秀,彭熙,
申请(专利权)人:贵州省生物研究所,
类型:发明
国别省市:贵州,52
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