一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法，利用微孔板高通量培养技术（固态及液态）培养红曲霉，同时基于酶标仪以双波长法（△A=A238‑A247）快速检测发酵液中洛伐他汀含量。相比于常规平板培养和摇瓶发酵，本发明专利技术中所述的微孔板高通量培养技术试样量小、一次性可处理样品种类多，且节省空间，培养箱利用率高；对于高产洛伐他汀菌株的快速筛选，相比于液相色谱法，本发明专利技术实验周期大大缩短；相比于文献中所报道的比色法（单波长或双波长），本发明专利技术更能排除发酵液中其他物质的干扰。总之，整个过程可同时对上百株红曲霉进行快速培养和筛选，整个过程工作量小，操作快速便捷，易于实现。

A rapid screening method for high production of lovastatin Monascus

The invention discloses a method for rapid screening of high yield lovastatin Aspergillus oryzae, using microporous plate high flux culture technique (solid-state and liquid) to cultivate Aspergillus oryzae and the rapid detection of lovastatin content in the fermentation broth on the basis of a double wavelength method (delta A=A238 A247) based on the enzyme labeling instrument. Compared to the conventional plate culture and the shake flask fermentation, the microporous plate high flux culture techniques described in the present invention have small sample size, many kinds of disposable samples, space saving, high utilization rate of the culture box, rapid screening for high yield lovastatin strain, compared with the liquid chromatograph method, the experimental period of the invention is greatly shortened. Compared with the colorimetric method reported in the literature (single wavelength or dual wavelength), the invention can eliminate the interference of other substances in fermentation broth. In conclusion, the whole process can be used for rapid cultivation and screening of hundreds of Monascus. The whole process is small in workload, fast and convenient in operation, and easy to implement.

【技术实现步骤摘要】
一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法
本专利技术属于红曲霉筛选
，具体涉及一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法。
技术介绍
红曲霉是从红曲中分离纯化出的黄酒酿造用菌，红曲霉会产很多有益的代谢产物，洛伐他汀就是其中一种，具有抑制胆固醇合成、降血脂等功效。筛选高产洛伐他汀的红曲霉的目的主要在于制备功能性红曲粉，使红曲色素中富含较高含量的洛伐他汀。在实验室的研究中，红曲霉的筛选一般需要经过平板活化、摇瓶发酵。近期微孔板发酵技术的兴起，微孔板逐渐替代摇瓶发酵而作为一种高通量培养、筛选的技术，但前期红曲霉的扩培仍停留在平板活化的旧技术上。另一方面，经过高通量培养技术后，新型的快速检测技术尚待建立，多数文献关于产洛伐他汀菌的快速筛选方法都基于液相色谱检测技术，液相色谱虽然精确，但相对耗时，且随着检测时间的增长，排在后面的待测样品难免会发生变性；有学者采用比色法对洛伐他汀进行快速筛选，但单波长法（A238）的干扰性太强，难以说明此波长处的物质就是洛伐他汀，另外有学者专利技术了双波长法（△A=A246-A254）对洛伐他汀进行快速检测，但该方法仅仅排除了红曲色素的干扰而没有针对发酵液中其他物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法，其特征在于：以微孔板高通量培养技术培养红曲霉，同时基于酶标仪以双波长法快速检测发酵液中洛伐他汀含量，具体包括以下步骤：（1）红曲霉固态培养：取1.5mL PDA培养基于24孔微孔板中，将红曲霉在PDA固体培养基上进行单菌落点种并培养6~7d；（2）孢子液的洗脱：在培养后的微孔板中每孔加入0.5~0.7mL生理盐水，于恒温振荡器中30℃、1200r/min 振荡5min，使孢子洗脱下来；（3）种子液的培养：取上述孢子液接种于每孔装有5mL的液体种子培养基的24孔深孔板中，孢子液接种量为4~10%（v/v），在28~30℃、300r/min条件下培养36~...

【技术特征摘要】
1.一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法，其特征在于：以微孔板高通量培养技术培养红曲霉，同时基于酶标仪以双波长法快速检测发酵液中洛伐他汀含量，具体包括以下步骤：（1）红曲霉固态培养：取1.5mLPDA培养基于24孔微孔板中，将红曲霉在PDA固体培养基上进行单菌落点种并培养6~7d；（2）孢子液的洗脱：在培养后的微孔板中每孔加入0.5~0.7mL生理盐水，于恒温振荡器中30℃、1200r/min振荡5min，使孢子洗脱下来；（3）种子液的培养：取上述孢子液接种于每孔装有5mL的液体种子培养基的24孔深孔板中，孢子液接种量为4~10%（v/v），在28~30℃、300r/min条件下培养36~48h；（4）发酵液的培养：将步骤（3）培养后的种子液接入每孔装有5mL的液体发酵培养基的24孔深孔板中，种子液接种量为2~4%（v/v），在28~30℃、300r/min条件下培养6~7d；（5）双波长法检测：在24孔深孔板中每孔加入0.2mL步骤（4）培养得到的发酵液和3.8mL的70wt%乙醇，在500r/min、60℃条件下旋转震荡2h，震荡后用孔板离心机4000r/min离心30min；取上清液于96孔板中，于酶标仪上进行双波长检测，检测波长为△A=A238-A247；以洛伐他汀标品为对照绘制双波长标曲，计算样品中洛伐他汀含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪莉，周康熙，王翊丞，何冬萍，刘志彬，张雯，张晨，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建,35