一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物及其在制备抗炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物及其在制备抗炎药物中的应用。本发明专利技术从一株海漆内生真菌Diaporthe sp.SYSU‑HQ3中分离得到所述茚类衍生物。该菌株于2017年8月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No：60217。该类新化合物具有显著抑制LPS诱导的NO的产生，其IC50分别为：8.5mM（1）、5.9 mM（2）、4.2 mM（3）、4.2 mM（4），具有抗炎治疗的临床应用潜力，可用于制备抗炎药物，应用前景好。

An Indian derivative derived from marine paint endophytic fungi and its application in the preparation of anti-inflammatory drugs

The invention discloses an enin derivative derived from endophytic fungi from sea lacquer and its application in the preparation of anti-inflammatory drugs. The present invention is prepared from an endophytic fungus Diaporthe sp.SYSU HQ3 of sea lacquer. The strain was preserved in the Guangdong provincial microorganism Preservation Center in August 4, 2017, and its preservation number is GDMCC No:60217. The new compound has a significant inhibitory effect on the production of NO induced by LPS. Its IC50 is 8.5mM (1), 5.9 mM (2), 4.2 mM (3), 4.2 mM (4). It has the potential of anti-inflammatory therapy and can be used in the preparation of anti-inflammatory drugs. The application prospect is good.

【技术实现步骤摘要】
一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物及其在制备抗炎药物中的应用
本专利技术属于医药化合物
更具体地，涉及一种海漆内生真菌来源的新型化合物，属于茚类衍生物，及其在制备抗炎药物中的应用。
技术介绍
炎症是机体受到外源性的抗原刺激，而机体采取的免疫防御过程。炎症的发生在局部组织会产生一系列的复杂变化，主要表现有红、肿、热、痛及功能障碍，同时炎症可引起全身反应，包括发热、嗜睡、肌肉蛋白质降解加速等。当机体受到致炎因子入侵时，会激活体内的单核细胞、巨噬细胞等合成和释放多种内源性生物活性物质，如前列腺素、一氧化氮、血管活性胺等，导致血管通透性增加，炎症细胞趋化，从而诱导炎症的发生。此外，炎症与许多慢性疾病如关节炎，骨质疏松，哮喘，癌症等密切相关。巨噬细胞RAW264.7是抗炎筛选中一种重要的细胞模型。当用外源性抗原脂多糖LPS刺激巨噬细胞会产生一系列的免疫反应，其中在整个过程中巨噬细胞会产生NO2-。Griess试剂是一种可以与巨噬细胞产生的NO2-相互作用产生有色素的偶氮染料化合物。通过酶标仪检测染料的吸光度的强弱来判断产生NO的水平，从而利用此模型筛选小分子抑制剂。目前临床上常用的抗炎药主要有两类：非甾体抗炎药和甾体类抗炎药。虽然他们都有一定的临床抗炎效果，但长期大量使用会产生一系列不良反应和耐受性，如胃粘膜损伤、肝脏损伤、肾脏损害等。为解决药物的耐受性及不良反应，寻找新的抗炎药物以及相关新颖骨架类型的药物成为抗炎药物研究领域的热点。天然产物是药物先导化合物的重要来源，海洋真菌来源的天然产物具有可持续性，对环境友好，代谢产物丰富多样等特点，一直是药物筛选的重要源头。真菌的代谢产物具有广泛的生理活性，如抗菌，抗肿瘤，免疫调节，抗炎，酶抑制等多种活性。目前，从海洋真菌中寻找新的药源分子已成为国际国内研究的热点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一类新的海洋真菌来源的茚类衍生物，该系列新化合物可抑制LPS刺激巨噬细胞产生NO的产生，起到显著的抗炎作用，在制备抗炎药物中具有远大的市场前景。本专利技术的目的是提供一株海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3。本专利技术另一目的是提供一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物。本专利技术的再一目的是提供所述海漆内生真菌来源的茚类衍生物在抗炎药物中的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一株海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3，已于2017年8月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNo：60217。一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物，结构式如下式(I)所示：具体地，该类化合物有4中类型，如结构式1-4所示：另外，所述海漆内生真菌来源的茚类衍生物是从所述海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3的发酵液中分离得到，具体方法如下：S1.真菌种子培养：将权利要求1所述海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3接种斜面培养基，培养得种子液；S2.真菌发酵培养：将种子液接入固体大米发酵培养基中，于25～35℃静置1～2个月；S3.粗提：将步骤S2发酵培养后的产物用甲醇提取2～5次，浓缩提取液，将获得的浓缩浸膏用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯粗提物；S4.分离纯化：将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶和/或C-18反相等柱层析分离技术进行分离纯化。其中，优选地，步骤S1所述斜面培养基的配方为：以质量比计，葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.1％～0.5％，琼脂1.5％～2.5％，氯化钠1.5％～4％，水补足100％。更优选地，步骤S1所述斜面培养基的配方为：以质量比计，葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.5％，琼脂2.5％，氯化钠3％，水98％。优选地，步骤S1所述培养的条件为28～35℃培养4～10天。更优选地，步骤S1所述培养的条件为30℃培养6天。优选地，步骤S2所述固体大米发酵培养基的配方为：以质量比计，大米：海水＝1：1～2。更优选地，步骤S2所述固体大米发酵培养基的配方为：以质量比计，大米：海水＝1：1。优选地，步骤S2中35℃静置2个月。优选地，步骤S3所述甲醇提取的次数为3次。优选地，步骤S4中石油醚/乙酸乙酯是指50～80％乙酸乙酯和20～50％石油醚的混合物。更优选地，步骤S4中石油醚/乙酸乙酯是指70％乙酸乙酯和30％石油醚。另外经过实验证实，所述海漆内生真菌来源的茚类衍生物具有显著抑制LPS诱导的NO的产生，具有抗炎治疗的临床应用潜力，可用于制备抗炎药物。因此，该类海漆内生真菌来源的茚类衍生物在制备抗炎药物中的应用，应在本专利技术的保护范围之内。以及该类海漆内生真菌来源的茚类衍生物在制备能够抑制LPS诱导NO产生的药物中的应用，也应在本专利技术的保护范围之内。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术从海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3中分离得到一类茚类衍生物，该类新化合物具有显著抑制LPS诱导的NO的产生，其IC50分别为：8.5μM(1)、5.9μM(2)、4.2μM(3)、4.2μM(4)，具有抗炎治疗的临床应用潜力，可用于制备抗炎药物，应用前景好。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3的获得专利技术人团队从广东珠海海域红树林植物海漆ExcoecariaagallochaL.的新鲜叶子中分离得到一株海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3，并于2017年8月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏号为GDMCCNo：60217。实施例2化合物的分离从海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3的发酵液中分离得到新型茚类衍生物。具体方法如下：(1)真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3的种子液培养：培养基组成按重量比为：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.5％，琼脂2.5％，氯化钠3％，水98％；制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，30℃培养6天。(2)真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3的发酵培养：利用固体大米发酵培养基：大米：海水＝1：1；将种子中的菌株转接入发酵培养基中，于室温35℃静置2个月；(3)将上述发酵培养后的产物用甲醇提取3次，浓缩提取液，将获得的浓缩浸膏用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯粗提物。(4)将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶、C-18反相等柱层析分离技术，进行分离纯化即得到化合物1-4。实施例3化合物的结构分析对新化合物1-4进行结构测试解析，得到以下实验数据：新化合物1：C25H30O6，HRESI-MS：425.1961[M-H]-(计算值425.1964)。新化合物2：C25H30O6，HRESI-MS：425.1968[M-H]-(计算值425.1964)。新化合物3：C25H30O6，HRESI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株海漆内生真菌Diaporthe sp. SYSU‑HQ3，其特征在于，于2017年8月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No：60217。

【技术特征摘要】
1.一株海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3，其特征在于，于2017年8月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNo：60217。2.一种海漆内生真菌来源的茚类衍生物，其特征在于，结构式如下式（I）所示：。3.权利要求2所述海漆内生真菌来源的茚类衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.真菌种子培养：将权利要求1所述海漆内生真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3接种斜面培养基，培养得种子液；S2.真菌发酵培养：将种子液接入固体大米发酵培养基中，于25～35℃静置1～2个月；S3.粗提：将步骤S2发酵培养后的产物用甲醇提取2～5次，浓缩提取液，将获得的浓缩浸膏用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯粗提物；S4.分离纯化：将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10%～50%乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶和/或C-18反相柱层析分离技...

【专利技术属性】
技术研发人员：佘志刚，崔辉，潘亚宏，黄锡山，刘红菊，李闯彪，梅秀丽，
申请(专利权)人：中山大学，广州金蝉花科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44