本发明专利技术提供了一种白色紫锥菊不定根提取物及其抗炎应用。本发明专利技术将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30～40d，所述培养液包括改良的3/4MS培养液、1～3mg·L‑1的吲哚丁酸、30～60g·L‑1的蔗糖，所述培养液的pH值为5.8～6.8；其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3‑浓度为30～40mmol·L‑1、NH4+浓度为6～8mmol·L‑1、PO43‑浓度为1.5～2mmol·L‑1；本发明专利技术将培养得到的所述白色紫锥菊不定根用甲醇提取得到白色紫锥菊不定根提取物，具有较高的抗炎活性。
An extract from Echinacea purpurea and its application in anti inflammation
The invention provides a white Echinacea adventitious root extract and its anti-inflammatory application. In the present invention, white Echinacea indeterminate root is inoculated in a culture liquid of a bioreactor for 30 to 40d, and the culture medium includes improved 3/4MS culture liquid, 1 ~ 3mg / L 1 indolo butyric acid, 30 to 60g. L 1 sucrose, and the pH value of the culture medium is 5.8 to 6.8; among them, NO3 concentration is 3 in the improved 3/4MS culture solution. The concentration of 0 ~ 40mmol / L 1, NH4+ was 6 ~ 8mmol. L 1, and PO43 concentration was 1.5 to 2mmol. L 1. The inventive white Echinacea adventitious root was extracted from the extract of the adventitious root of Echinacea purpurea and had high anti-inflammatory activity.
【技术实现步骤摘要】
一种白色紫锥菊不定根提取物及其抗炎应用
本专利技术涉及天然产物提取领域，特别涉及一种人工培养白色紫锥菊不定根提取物及其抗炎应用。
技术介绍
炎症是机体对伤害性刺激、组织损伤以及感染等的应激反馈，为一种极为常见而又十分重要的病理过程，是人类赖以生存的防御性和保护性反应。其基本病理变化表现为局部微血管反应和血液成分的渗出，组织和细胞的变形，坏死以及增生和修复。炎症介质和炎性细胞因子是引起炎症反应的关键生物活性物质。在炎症反应中，巨噬细胞在免疫防御系统中发挥着重要作用。经脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞可产生多种炎症介质，如一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)等。而药用植物中的咖啡酸类衍生物、多糖类、挥发油、烷基酰胺类化合物等可以有效抑制这些炎症介质的产生。且药用植物具有无毒副作用，无残留，无抗药性，不会致畸、致癌、致突变等优点。白色紫锥菊(Echinaceapallida(Nutt.)Nutt.)又名白松果菊、淡紫松果菊，为菊科松果菊属多年生草本植物，是原产于北美地区的一种药用植物。白色紫锥菊在国外分布较为广泛，国内没有其野生资源，近年来先后从欧洲与美洲成功引种至北京、沈阳、山东等地。但是，在人工栽培过程中，由于种子萌发率低，育苗难度较大，且易受气候、土壤、生长期等条件以及其他不可控制因素的影响，导致其生物活性成分含量低，药用品质也难以保证。加之不同溶剂对有效活性成分的提取效率不同，导致提取物的药用活性不一。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种人工培养的白色紫锥菊不定根，对该白色紫锥菊不定根的甲醇提取物进行了体外抗炎研究，明确了这种提取物具有较强的抗炎特性。本专利技术的技术方案如下：一种白色紫锥菊不定根提取物，将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30～40d，所述培养液包括改良的3/4MS培养液、1～3mg·L-1的吲哚丁酸、30～60g·L-1的蔗糖，所述培养液的pH值为5.8～6.8；其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3-浓度为30～40mmol·L-1、NH4+浓度为6～8mmol·L-1、PO43-浓度为1.5～2mmol·L-1；将培养得到的白色紫锥菊不定根用甲醇提取得到白色紫锥菊不定根提取物。优选的，所述白色紫锥菊不定根在所述生物反应器中的接种量为6.5～7.5g·L-1。优选的，所述生物反应器的通气量为80～120mL·min-1，培养温度为(25±1)℃。优选的，接种于所述生物反应器中的所述白色紫锥菊不定根长度为1～2cm。优选的，所述白色紫锥菊不定根提取物的制备过程包括：(1)将所述人工培养白色紫锥菊不定根干燥、粉碎后，得到不定根干粉；(2)将所述不定根干粉与甲醇混合，所得混合液经超声提取，过滤后得到的滤液为不定根甲醇提取液；(3)所述不定根甲醇提取液经真空减压干燥后，得到白色紫锥菊不定根提取物。优选的，所述不定根干粉与所述甲醇混合的质量体积比为(25～35)g：(300～500)ml。优选的，所述超声提取的温度为35～40℃，所述超声提取的时间为0.5～1h。本专利技术还包括上述白色紫锥菊不定根提取物在制备抗炎药物、保健品及食品中的应用。优选的，所述白色紫锥菊不定根提取物的有效浓度为25～100μg/mL。现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术提供了一种人工培养白色紫锥菊不定根提取物及其抗炎应用。本专利技术将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30d，所述培养液包括改良的3/4MS培养液、1～3mg·L-1的吲哚丁酸、30～60g·L-1的蔗糖，所述培养液的pH值为5.8～6.8；其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3-浓度为30～40mmol·L-1、NH4+浓度为6～8mmol·L-1、PO43-浓度为1.5～2mmol·L-1；本专利技术将培养得到的白色紫锥菊不定根用甲醇提取得到白色紫锥菊不定根提取物。本专利技术利用生物反应器生产出的白色紫锥菊不定根富含大量的目标次生代谢产物，有效物质含量稳定，无农药和重金属残留，且具有生产周期短、成本低的优势。本专利技术生物反应器培养的不定根可获得较多的咖啡酸衍生物，本专利技术对生物反应器培养的白色紫锥菊不定根进行甲醇提取，用这种提取物进行了体外抗炎研究，明确了这种提取物具有较强的抗炎特性，对今后不定根作为白色紫锥菊相关产品的生产提供参考。附图说明图1为不同浓度的白色紫锥菊不定根提取物处理24h后的细胞活性；图2为不同浓度的白色紫锥菊不定根提取物对TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子的抑制作用；图3为不同浓度的白色紫锥菊不定根提取物对MAPKs中三个信号通路的抑制作用。具体实施方式本专利技术提供了一种人工培养的白色紫锥菊不定根，对该白色紫锥菊不定根的甲醇提取物进行了体外抗炎研究，明确了这种提取物具有较强的抗炎特性。本专利技术所述白色紫锥菊不定根的人工培养为将白色紫锥菊不定根在生物反应器中进行培养。本专利技术对生物反应器的种类没有特殊限定，在本专利技术具体实施例中，优选采用气升式生物反应器对白色紫锥菊不定根进行培养。本专利技术中，将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30～40d，优选为暗培养35d，得到人工培养的白色紫锥菊不定根。本专利技术对所述人工培养时接种的白色紫锥菊不定根来源没有特殊限定，可以采用常规基质栽培白色紫锥菊得到的不定根或组织培养扩繁得到的白色紫锥菊不定根。本专利技术所述白色紫锥菊不定根在所述生物反应器中的接种量优选为6.5～7.5g·L-1，更优选为7g·L-1。本专利技术在生物反应器中的培养液包括改良的3/4MS培养液、吲哚丁酸1～3mg·L-1、蔗糖30～60g·L-1，优选所述培养液中包括3/4MS培养液、吲哚丁酸1.5～2.5mg·L-1、蔗糖40～50g·L-1。本专利技术所述培养液的pH值为5.8～6.8，更优选为5.9。其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3-浓度为30～40mmol·L-1，NH4+浓度为6～8mmol·L-1，PO43-浓度为1.5～2mmol·L-1，优选NO3-浓度为34～37mmol·L-1，NH4+浓度为7mmol·L-1，PO43-浓度为1.56～1.72mmol·L-1，3/4MS培养液中的其余物质和含量不变。本专利技术将白色紫锥菊不定根接种于含有上述培养液的生物反应器中。本专利技术优选白色紫锥菊不定根的长度为1～2cm，更优选为1cm。本专利技术控制所述生物反应器的通气量为80～120mL·min-1，优选为100mL·min-1，培养温度为(25±1)℃，进行暗培养。从第10d开始，每隔10d收集不定根样品及其培养液，直到培养至50d。结果为：当不定根培养至30～40d时，其生物量和有效物质达到最大值，其中，鲜物重为304.28g、干物重为29.82g、酚含量为53.48mg·g-1、酚生产量为398.99mg·L-1、黄酮含量为37.61mg·g-1、黄酮生产量为280.57mg·L-1。本专利技术对反应器培养30～40d后收获的白色紫锥菊不定根用甲醇进行提取，制备白色紫锥菊不定根的紫锥菊提取物。所述白色紫锥菊不定根提取物的制备过程包括：(1)将所述人工培养白色紫锥菊不定根干燥、粉碎后，得到不定根干粉；本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种白色紫锥菊不定根提取物，其特征在于：将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30～40d，所述培养液包括改良的3/4MS培养液、1～3mg·L‑1的吲哚丁酸、30～60g·L‑1的蔗糖，所述培养液的pH值为5.8～6.8；其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3‑浓度为30～40mmol·L‑1、NH4+浓度为6～8mmol·L‑1、PO43‑浓度为1.5～2mmol·L‑1；将培养得到的白色紫锥菊不定根用甲醇提取得到白色紫锥菊不定根提取物。
【技术特征摘要】
1.一种白色紫锥菊不定根提取物，其特征在于：将白色紫锥菊不定根接种于生物反应器的培养液中暗培养30～40d，所述培养液包括改良的3/4MS培养液、1～3mg·L-1的吲哚丁酸、30～60g·L-1的蔗糖，所述培养液的pH值为5.8～6.8；其中，所述改良的3/4MS培养液中，NO3-浓度为30～40mmol·L-1、NH4+浓度为6～8mmol·L-1、PO43-浓度为1.5～2mmol·L-1；将培养得到的白色紫锥菊不定根用甲醇提取得到白色紫锥菊不定根提取物。2.根据权利要求1所述的白色紫锥菊不定根提取物，其特征在于，所述白色紫锥菊不定根在所述生物反应器中的接种量为6.5～7.5g·L-1。3.根据权利要求1所述的白色紫锥菊不定根提取物，其特征在于，所述生物反应器的通气量为80～120mL·min-1，培养温度为(25±1)℃。4.根据权利要求1所述的白色紫锥菊不定根提取物，其特征在于，接种于所述生物反应器中的所述白色紫...
【专利技术属性】
技术研发人员：廉美兰，姜君，吴春华，廉哲雄，朴炫春，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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