一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法，属于植物中黄酮类组分的提取及纯化方法。以甘草为原料，经蒸馏水提取得到甘草提取液，再经甲醇和乙酸乙酯处理对甘草中黄酮组分粗分离，采用DM130大孔树脂和聚酰胺树脂联合过柱法进行，最后用高效液相‑质谱技术对纯化的黄酮组分进行成分鉴定。有益效果是：联合DM130大孔树脂和聚酰胺树脂法可将甘草中的黄酮组分较好地分离纯化，且将皂苷组分的影响降到最低，利于干草中黄酮组分药效学等研究；利用液质联用鉴定纯化后的甘草黄酮主要是甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷、异甘草素葡萄糖芹糖苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、刺芒柄花素、甘草瑞酮、甘草酸、甘草香豆素。

Extraction and purification of Flavonoids from Glycyrrhiza Glycyrrhiza

The invention relates to a method for extracting and purifying Glycyrrhiza flavonoids, which belongs to the extraction and purification method of flavonoid components in plants. Glycyrrhiza extract was extracted from Glycyrrhiza Glycyrrhiza by distilled water, and then the flavonoids in Glycyrrhiza Glycyrrhizae were separated by methanol and ethyl acetate. The DM130 macroporous resin and polyamide resin were combined with the column method, and the components of the purified flavonoids were identified by high performance liquid chromatography. The beneficial effect is that the combined DM130 macroporous resin and polyamide resin method can separate and purify the flavonoids in Glycyrrhiza uralensis, and reduce the effect of the saponins to the lowest, which is beneficial to the study of the pharmacodynamics of flavonoids in hay, and the flavonoids identified by liquid chromatography are mainly glycyrrhizin glucoside and Glycyrrhiza. Glucoside, isoglycyrrhizin, glucose, apigenin, liquorice, isoglycyrrhizin, ondansein, Gan Caorui, glycyrrhizic acid and glycyrrhizin coumarin.

【技术实现步骤摘要】
一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法
本专利技术属于植物中黄酮类组分的提取及纯化方法。
技术介绍
近年来研究发现，黄酮类化合物具有防癌、抗癌、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗菌、抗心血管疾病、降血脂、抗骨质疏松、镇痛、雌性激素样作用、预防老年痴呆以及调节免疫系统等多方面药理作用。由于很多植物药中黄酮类物质的作用机理尚不明确，因此近年来人们对植物药中黄酮类成分的鉴定以及相关药理作用的研究越来越重视。黄酮类化合物种类繁多，泛指两个苯环(A与B)通过三个C原子相互连接而成的一系列化合物，基本骨架有C6-C3-C6模式，结构如下，主要包括黄酮、黄酮醇、黄烷酮等。黄酮纯化方法较多，目前主要的纯化方法有：萃取法、超滤膜法、结晶法和柱层析法等。溶剂萃取法利用相似相溶的原理，将不同极性的黄酮类化合物分离，广泛地应用于天然产物的研究中，常用的有机试剂有甲醇、乙醇、乙酸乙酯和正丁醇等。超滤膜法是按照相对分子量进行分离的一种方法，可选用合适的超滤膜孔径，通过物理分离方法，有效地除去提取液中的大分子物质。黄酮类化合物在低温下水溶解度低，易饱和，因此可以采用结晶法进行分离，设置不同温度、不同溶剂体系对黄酮类化合物进行分离，但该方法应用较少。最常用的柱层析法为聚酰胺树脂和大孔树脂法。黄酮类化合物富含酚羟基，因此可与聚酰胺树脂中的酰胺基结合。不同化合物与聚酰胺形成的氢键缔合能力不同，因此聚酰胺树脂可用来分离纯化中药提取液中的黄酮类化合物。大孔树脂是一种具有大孔结构、人工合成的有机高分子共聚体，因其多孔结构特点可通过吸附性和筛选性原理相结合分离不同的物质。大孔树脂的型号种类众多，功能差异较大，可根据不同物质的理化性质，选择合适的大孔树脂进行分离。AB-8、D101、NKA、NKA-9、D152、ADS-17等大孔树脂均可对黄酮进行筛选纯化。现今有许多化合物检测技术，包括紫外检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测、蒸发光散射检测器和质谱(MS)等。与其它检测技术相比，MS不仅能够得到化合物的结构信息而且具有更高的灵敏度。近年来随着软电离质谱技术的发展，应用质谱技术进行中药研究的报道越来越多，特别是它与色谱联用后能够对复杂的混合物进行分析，这点对于中药这一复杂体系十分重要。中药的质谱分析主要是通过对已知化合物进行串联质谱分析，推断类似结构化合物的裂解规律，从而对中药和中药复方中其它未知结构的化合物进行推断。黄酮类化合物在串联质谱中主要发生逆狄尔斯-阿德反应、开环断裂和糖苷键断裂等反应，通过总结这些反应的规律可以对黄酮类化合物的同分异构体进行区分。
技术实现思路
本专利技术提供一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法，通过设计筛选成熟的工艺步骤和工艺参数，以得到纯度高、生物活性好、质量稳定的甘草黄酮产品。本专利技术采取的技术方案是：包括下列步骤：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，9～11倍量蒸馏水浸泡25～35min，回流提取0.5～1.5h，离心分离上清液和药渣，将药渣用9～11倍量水回流提取35～45min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心8～12min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液加入少量甲醇至溶解，在磁力搅拌器下，慢慢加入10倍甲醇体积的乙酸乙酯，静置9～11min，转移上清液，浓缩至干，将溶液稀释至0.2g生药/mL，以备纯化；(3).甘草粗黄酮的纯化DM130树脂和聚酰胺树脂的预处理上样DM130树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附9～11h，随后用6BV蒸馏水和50％的乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液，浓缩；上样聚酰胺树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附样品9～11h，随后用6BV蒸馏水和用50％的乙醇分别洗脱树脂柱，收集洗脱液浓缩冻干，得甘草黄酮组分纯化物。本专利技术有益效果是：联合DM130大孔树脂和聚酰胺树脂法可将甘草中的黄酮组分较好地分离纯化，且将皂苷组分的影响降到最低，利于干草中黄酮组分药效学等研究；利用液质联用鉴定纯化后的甘草黄酮主要是甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷、异甘草素葡萄糖芹糖苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、刺芒柄花素、甘草瑞酮、甘草酸、甘草香豆素。附图说明图1是甘草纯化后黄酮负谱总离子流图。具体实施方式实施例1步骤如下：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，9倍量蒸馏水浸泡25min，回流提取0.5h，离心分离上清液和药渣，将药渣用9倍量水回流提取35min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心8min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液加入少量甲醇至溶解，在磁力搅拌器下，慢慢加入10倍甲醇体积的乙酸乙酯，静置9min，转移上清液，浓缩至干，将溶液稀释至0.2g生药/mL，以备纯化；(3).甘草粗黄酮的纯化DM130树脂和聚酰胺树脂的预处理上样DM130树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附9h，随后用6BV蒸馏水和50％的乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液，浓缩；上样聚酰胺树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附样品9h，随后用6BV蒸馏水和用50％的乙醇分别洗脱树脂柱，收集洗脱液浓缩冻干，得甘草黄酮组分纯化物。实施例2步骤如下：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，10倍量蒸馏水浸泡30min，回流提取1h，离心分离上清液和药渣，将药渣用10倍量水回流提取40min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心10min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液加入少量甲醇至溶解，在磁力搅拌器下，慢慢加入10倍甲醇体积的乙酸乙酯，静置10min，转移上清液，浓缩至干，将溶液稀释至0.2g生药/mL，以备纯化；(3).甘草粗黄酮的纯化DM130树脂和聚酰胺树脂的预处理上样DM130树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附10h，随后用6BV蒸馏水和50％的乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液，浓缩；上样聚酰胺树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附样品10h，随后用6BV蒸馏水和用50％的乙醇分别洗脱树脂柱，收集洗脱液浓缩冻干，得甘草黄酮组分纯化物。实施例3步骤如下：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，11倍量蒸馏水浸泡35min，回流提取1.5h，离心分离上清液和药渣，将药渣用11倍量水回流提取45min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心12min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液加入少量甲醇至溶解，在磁力搅拌器下，慢慢加入10倍甲醇体积的乙酸乙酯，静置11min，转移上清液，浓缩至干，将溶液稀释至0.2g生药/mL，以备纯化；(3).甘草粗黄酮的纯化DM130树脂和聚酰胺树脂的预处理上样DM130树脂：以1BV/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法，其特征在于，包括下列步骤：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，9～11倍量蒸馏水浸泡25～35min，回流提取0.5～1.5h，离心分离上清液和药渣，将药渣用9～11倍量水回流提取35～45min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心8～12min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液加入少量甲醇至溶解，在磁力搅拌器下，慢慢加入10倍甲醇体积的乙酸乙酯，静置9～11min，转移上清液，浓缩至干，将溶液稀释至0.2g生药/mL，以备纯化；(3).甘草粗黄酮的纯化DM130树脂和聚酰胺树脂的预处理上样DM130树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附9～11h，随后用6BV蒸馏水和50％的乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液，浓缩；上样聚酰胺树脂：以1BV/mL的速度上样，吸附样品9～11h，随后用6BV蒸馏水和用50％的乙醇分别洗脱树脂柱，收集洗脱液浓缩冻干，得甘草黄酮组分纯化物。

【技术特征摘要】
1.一种甘草黄酮组分的提取及纯化方法，其特征在于，包括下列步骤：(1).甘草提取液的制备精密称取甘草粗提物，9～11倍量蒸馏水浸泡25～35min，回流提取0.5～1.5h，离心分离上清液和药渣，将药渣用9～11倍量水回流提取35～45min，离心，合并两次上清液，将上清液浓缩至0.5g生药量/mL，加入95％乙醇，使其醇沉溶液终浓度为60％，4℃条件下静置12h后，4000r/min离心8～12min，将上清液浓缩至干，待用；(2).甘草提取液的黄酮组分粗分离将浓缩至干的甘草提取液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘忠英，刘媛媛，韦梦莹，马莹慧，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22