The invention discloses a molecular biological method for quickly identifying blood borne diseases of fish, and belongs to the field of molecular biology technology. The main point of the technical scheme is to extract the genomic DNA of the pathogen by extracting the blood from the tail vein of the sick fish, and to test the genomic DNA of the pathogenic bacteria as a template and use 3 specific primers to amplify the PCR amplification. The agarose gel electrophoresis is used to detect the product of the PCR amplification, and if the 3 pairs of specific primers are all amplified, it is gas. The infection of monomonas aeruginosa causes explosive hemorrhagic disease in fish. The virulence specific primers of the Aeromonas Aeromonas can quickly and accurately identify the pathogen category of the sick fish. The invention is simple in operation, without too many precision instruments, and is completely suitable for detection under conventional conditions, and has a strong repeatability.
【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定鱼类出血病的分子生物学方法
本专利技术属于分子生物学
,具体涉及一种快速鉴定鱼类出血病的分子生物学方法。
技术介绍
随着人口的快速增长,鱼类等水产品作为较为安全的蛋白质来源得到社会的广泛认同,水产养殖业也成为我国快速发展的新型产业。爆发性疾病是阻碍水产养殖发展的重要障碍,气单胞菌属是可引起人、动物、鱼的条件性致病菌,并且在我国广泛的流行,常引起鱼类的大量死亡,为水产养殖行业带来严重的经济损失。因此,快速分离鉴定鱼出血败血症气单胞菌致病因子,并且及时控制制止该病在鱼体间的爆发,找到最佳防治方案是为重中之重,是摆在广大研究者面前的艰巨任务,也已成为近年来养殖鱼类疾病防控等相关研究的热点。国外一些学者将气容素的应用作为研究目标,相比之下我国尚处空白阶段。毒力基因是气单胞菌属良好的标记,鉴定病原菌的致病性。如今,很难在致病过程中明确或定义其作用,通过测定分离株气单胞菌中几种毒力相关因子的存在对了解气单胞菌的发病机制和流行病学至关重要。气单胞菌感染草鱼并致病是由多种毒力因子共同决定的,气溶素、肠毒素、外膜蛋白等是气单胞菌属中重要的毒力基因,其中,气溶素是维氏气单胞菌主要的毒力因子之一,具有溶血性、细胞毒性和肠毒性,并将气溶素认定为气单胞菌属是否有毒性的依据。而带有肠毒素的病原菌,在宿主体内定植并分泌大量的毒素与细胞不可逆结合,从而导致宿主死亡。外膜蛋白是革兰氏阴性菌外膜的主要结构,是重要的黏附因子和保护性抗原,与细菌的毒力也密切相关。我们检测出了病原菌的气溶素、肠毒素和外膜蛋白三种毒力基因,毒力因子刺激后使鱼类大面积发生炎症,造成病鱼的死亡。气单胞 ...
【技术保护点】
1.一种快速鉴定鱼类出血病的分子生物学方法,其特征在于具体步骤为:(1)通过病鱼尾部静脉取血提取待测病原菌基因组DNA;(2)以待测病原菌基因组DNA为模板,利用3对特异性引物对进行PCR扩增反应,该3对特异性引物对序列分别为:上游引物:5’‑CCTATGGCCTGAGCGAGAAG‑3’,下游引物:5’‑CCAGTTCCAGTGCCACCACT‑3’;上游引物:5’‑AGATGGTGACCACCACCAAGAACA‑3’,下游引物:5’‑AACTGACATCGGCCTTGAACTC‑3’;上游引物:5’‑GCTGAATTCATGAAACTCAAATTGGCTC‑3’,下游引物:5’‑GCGAAGCTTTTACTGTTGTACTTGC‑3’;(3)琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,若3对特异性引物对均得到扩增条带,则为气单胞菌感染导致鱼类爆发性出血病。
【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定鱼类出血病的分子生物学方法,其特征在于具体步骤为:(1)通过病鱼尾部静脉取血提取待测病原菌基因组DNA;(2)以待测病原菌基因组DNA为模板,利用3对特异性引物对进行PCR扩增反应,该3对特异性引物对序列分别为:上游引物:5’-CCTATGGCCTGAGCGAGAAG-3’,下游引物:5’-CCAGTTCCAGTGCCACCACT-3’;上游引物:5’-AGATGGTGACCACCACCAAGAACA-3’,下游引物:5’-AACTGACATCGGCCTTGAACTC-3’;上游引物:5’-GCTGAATTCATGAAACTCAAATTGGCTC-3’,下游引物:5’-GCGAA...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈建军,曹香林,刘梁涛,曹笑楠,曹宇,
申请(专利权)人:河南师范大学,
类型:发明
国别省市:河南,41
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