一种降磷菌株的筛选及培育方法技术

本发明专利技术公开了一种降磷菌株的筛选及培育方法，所述方法包括：步骤（1）、以富磷废水为基材进行降磷菌初筛步骤（2）、利用菌悬液进行复筛；步骤（3）、进行培养基实验效果测定，以筛选出优质菌株；以及步骤（4）、对所筛选出的菌株进行优化培养。本发明专利技术的方法利用富磷废水中加入菌悬液进行震荡培育，通过观察菌落生长情况进行初筛和复筛，最终获得了效果最好、最稳定并且降磷率高达89.04%的菌株。本发明专利技术的方法简单易行，效果好。此外，本发明专利技术还对培养基进行了改进，获得了高培育效率的培养基。

Screening and breeding of a phosphorus reducing strain

The invention discloses a method for screening and cultivating a phosphorus reducing strain. The method comprises the following steps: step (1), use the phosphorus rich wastewater as the base material to carry out the initial screening step of the dephosphorizing bacteria (2) and resieve using the bacterial suspension; step (3), determine the experimental results of the culture medium to screen out the high quality strains; and step (4), and The screened strains were optimized and cultured. The method of the invention is used to cultivate the bacteria by adding bacteria suspension into the phosphorus waste water. By observing the colony growth, screening and rescreening the bacteria, the best, most stable and 89.04% of the phosphorus reduction rate are obtained. The method of the invention is simple and easy to use, and the effect is good. In addition, the invention also improves the culture medium and obtains a high culture efficiency medium.

【技术实现步骤摘要】
一种降磷菌株的筛选及培育方法
本专利技术涉及环保领域，尤其涉及通过微生物技术进行废水处理、加速水体中磷的去处的降磷菌株的筛选培养。
技术介绍
生活或工业废水或其他污水中，往往磷的含量超标。磷是植物生长发育的重要物质基础，作物吸收磷量与其生物量（r=0.97）和产量（r=0.75）呈显著的正相关。然而由于过多磷的存在使得水中营养过剩产生大量藻类，使水质恶化水体生物无法生存。微生物降磷是一种有效的减少水体中磷含量的方法，但是，现有的降磷菌株的筛选及培育方法效率低下，培育时间长，菌株浓度低。
技术实现思路
本专利技术提供了一种能够高效培育降磷菌株的方法，其培育效率远高于现有的培育方法。具体而言，本专利技术提供一种降磷菌株的筛选及培育方法，其特征在于，所述方法包括：步骤（1）、以富磷废水为基材进行降磷菌初筛；步骤（2）、利用菌悬液进行复筛；步骤（3）、进行培养基实验效果测定，以筛选出优质菌株；步骤（4）、对所筛选出的菌株进行优化培养。进一步地，所述方法还包括：利用降磷材料和降磷菌株对水体进行处理。进一步地，所述步骤（1）包括将富磷废水按十倍稀释法稀释，将浓度为10-1、10-2、10-3的稀释液各吸取预定量分别接种到无机磷培养基平板表面，涂抹均匀后倒置于30℃恒温培养箱中培养预定时间，选取有大清晰水解圈的菌株在无机磷培养基上进行分离纯化。进一步地，所述步骤（2）包括在富磷废水中接种第二预定量菌悬液，30℃，160r/min震荡培养第二预定时间。进一步地，所述步骤（3）包括：在废水模拟培养基中进行菌悬液接种，30℃，160r/min震荡培养第二预定时间，采用钼蓝比色法测定培养基中的有效磷含量。进一步地，所述步骤（1）中的初筛指的是筛选菌落为圆形或近圆形，质地软，无色素、表面呈白色，不透明，表面较光滑，菌落大，扁平，产芽孢的菌落。另一方面，本专利技术还提供一种高效的降磷菌株，该菌株的DNA序列如序列表中SEQIDNo.1中所示。技术效果本专利技术的培育降磷菌株的方法能够高效地筛选并培育出降磷菌株，本专利技术所培育的降磷菌株降磷率达到89.04%，并且本专利技术的培育方法降磷菌的浓度可达10*10^7个/mL以上附图说明图1为磷含量标准曲线；图2为多个无磷培养基培养后的降磷菌初筛结果；图3为对降磷菌复筛后的结果；图4为不同初始pH对菌种浓度的影响的示意图；图5为新型降磷材料的除磷率随处理时间的变化示意图；图6为新型降磷材料添加5%菌悬液后除磷率随处理时间的变化示意图。具体实施方式以下结合附图及其实施例对本专利技术进行详细说明，但并不因此将本专利技术的保护范围限制在实施例描述的范围之中。本专利技术中，采用下述方式进行降磷菌株的培育。（1）分离筛选降磷菌株。从废水中分离筛选出降磷菌株，通过富集培养，划线分离，无机磷培养基分离以及水体降磷效果的测定，从中筛选出降磷效果较好的菌株。（2）对最终筛选出的几种降磷菌株进行生理生化特征及16s分子生物学鉴定细菌的属。（3）优化培养基配方，运用分光光度法，比较不同种类碳源、氮源、无机盐及不同初始pH情况下降磷菌株的生长情况。（4）结合新型降磷材料和降磷菌株对水体进行处理，探索降磷材料与降磷菌株之间的影响及最佳降磷配比。所采用培养基包括：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，pH7~7.5；（2）无机磷培养基：葡萄糖10g，磷酸钙5g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3g，七水硫酸镁0.3g，七水硫酸亚铁0.03g，硫酸锰0.03g，水1000ml，pH7~7.5；（3）废水模拟培养基：乙酸钠0.5g，牛肉膏0.2g，硫酸铵0.2g，七水硫酸镁0.4g，七水硫酸亚铁0.002g，磷酸二氢钾0.04g，蒸馏水1000ml，自然pH。实施例1下面进行培育方法的具体描述。筛选（1）降磷菌初筛将富磷废水按十倍稀释法稀释，将浓度为10-1、10-2、10-3的稀释液各吸取0.2ml分别接种到无机磷培养基平板表面，涂抹均匀后倒置于30℃恒温培养箱中培养24h，选取有较大清晰水解圈的菌株在无机磷培养基上进行分离纯化并进行编号保存。（2）降磷菌复筛在95ml富磷废水中接种5ml菌悬液（向20ml无菌水中接入三环菌株，充分打散，测得菌种浓度为2.2×10^7个•ml），30℃，160r/min震荡培养72h。采用钼蓝比色法测定培养基中的有效磷含量。（3）培养基实验效果测定在95ml废水模拟培养基中接种5ml菌悬液（向20ml无菌水中接入三环菌株，充分打散），30℃，160r/min震荡培养72h。采用钼蓝比色法测定培养基中的有效磷含量。（其中，步骤（2）为自然富磷废水，步骤（3）为实验室模拟培养基，磷含量较自然废水高）16srRNA序列测定将分离纯化得到的有效菌株送公司测序。大孔吸附树脂应用在100ml富磷废水中按照空白、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200的比例加入降磷材料，设置平行试验A.大孔吸附树脂（比如LSC-700，其能够吸附微生物，使微生物悬浮于水体的上层，进行好养除磷）、B.大孔吸附树脂加5%菌悬液处理，数小时后采用钼蓝比色法测定废水中的有效磷含量。测得的磷含量标准曲线如图1所示，从图1可看出，磷含量标准曲线的回归方程为y=0.0629x-0.0151，x为磷含量，y为OD660值，R²=0.9953，说明线性关系良好。对降磷菌进行初步筛选：筛选菌落为圆形或近圆形，质地软，无色素、表面呈白色，不透明，表面较光滑，菌落大，扁平，产芽孢的菌落。初筛结果见图2接下来对降磷菌进行复筛，复筛结果见图3所示，从图3可以看出，分离的菌株中3,14,19,21号在废水中经48h的恒温震荡培养后降磷效果较好，其中以14号的效果最好最稳定，平均降磷率达到89.04%。试验采取几种效果较好的菌株进行混合培养后进行后续研究。14号菌测序结果如下TGTGACGGGTGCTAATACATGCAGTCGAGCGGACCGACGGGAGCTTGCTCCCTTAGGTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGATTGAACCGCATGGTTCAATCATAAAAGGTGGCTTTTAGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降磷菌株的筛选及培育方法，其特征在于，所述方法包括： 步骤（1）、以富磷废水为基材进行降磷菌初筛； 步骤（2）、利用菌悬液进行复筛； 步骤（3）、进行培养基实验效果测定，以筛选出优质菌株； 步骤（4）、对所筛选出的菌株进行优化培养。

【技术特征摘要】
1.一种降磷菌株的筛选及培育方法，其特征在于，所述方法包括：步骤（1）、以富磷废水为基材进行降磷菌初筛；步骤（2）、利用菌悬液进行复筛；步骤（3）、进行培养基实验效果测定，以筛选出优质菌株；步骤（4）、对所筛选出的菌株进行优化培养。2.根据权利要求1所述的降磷菌株培育方法，其特征在于，所述方法还包括：利用降磷材料和降磷菌株对水体进行处理。3.根据权利要求1所述的降磷菌株培育方法，其特征在于，所述步骤（1）包括将富磷废水按十倍稀释法稀释，将浓度为10-1、10-2、10-3的稀释液各吸取预定量分别接种到无机磷培养基平板表面，涂抹均匀后倒置于30℃恒温培养箱中培养预定时间，选取有大清晰水解圈的菌株在无机...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏宝阳，李秦晋，苏小军，罗琳，李朝晖，
申请(专利权)人：魏宝阳，
类型：发明
国别省市：湖南,43