一种孔性溶菌酶分离纯化介质及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种孔性溶菌酶分离纯化介质及其制备方法，属于分离纯化介质技术领域。该介质包括甲壳素30‑40份、1NH2SO4 50‑100份、过氧化苯甲酰3‑5份、异辛醇10‑15份、正戊醇10‑15份、甲基丙烯酸三羟甲基丙酯0.5‑1份、30号机油400‑600份、过氧化二碳酸二环己酯0.3‑0.5份、过硫酸钠0.3‑0.5份、去离子水30‑50份。本发明专利技术以甲壳素作为基本原料，添加一定的物理交联剂和致孔剂，通过悬浮成型工艺制备出具有一定孔结构的孔性甲壳素分离纯化介质。采用本发明专利技术制备的该分离纯化介质可以较好地将其通过层析技术进行回收利用，变废为宝。

Porous lysozyme separation and purification medium and preparation method thereof

The invention relates to a porous lysozyme separation and purification medium and a preparation method thereof, belonging to the technical field of separation and purification media. The medium consists of 40 portions of chitin, 50 1NH2SO4, 100, 3, 5, 10, 15, 10, 15, three hydroxymethyl propyl methacrylate, waste oil, sodium carbonate, sodium carbonate and deionized water . The invention uses chitin as the basic raw material, adding certain physical crosslinker and pore forming agent, and preparing the porous chitin separation and purification medium with a certain pore structure by the suspension forming process. The separation and purification medium prepared by the invention can be recovered and utilized by chromatography technology and can turn waste into treasure.

【技术实现步骤摘要】
一种孔性溶菌酶分离纯化介质及其制备方法
本专利技术涉及一种分离纯化介质及其制备方法，更具体地说，本专利技术涉及一种孔性溶菌酶分离纯化介质及其制备方法，属于分离纯化介质

技术介绍
溶菌酶（Lysozyme）在食品、日用化工和医药上具有广泛的用途。采用几丁质及其衍制备生物亲和介质，并该介质制作的亲和层析法来制备纯化溶菌酶已有不少报道。如：几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝胶等。但上述各种几丁质类分离纯化介质均存在一大应用性能缺陷，即在分离材料内部不具有真正的孔，在分离纯化诸如溶菌酶一类大分子物质时由于扩散问题难于获得较好效果。国家知识产权局于2011.04.20公开了一件公开号为CN102021158A，名称为“一种溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法”的专利技术，该专利技术公开了一种溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，包括如下步骤：(1)用pH值6.0～10.5的缓冲溶液稀释含有溶菌酶的混合液得到上样液，以0.1～25cm/min的流速上晶胶床柱，进行吸附；(2)以去离子水或pH值6.0～10.5的缓冲溶液为冲洗液，冲洗掉晶胶内未被吸附的杂质；(3)用含有0.02～3M碱金属盐的pH值6.0～10.5的缓冲溶液为洗脱液，进行洗脱，收集含溶菌酶的洗脱峰，得到所述的溶菌酶。本专利技术方法的价值主要体现在：工艺过程简单，处理量大，得到的溶菌酶纯度高，且晶胶介质再生方便，可重复使用，是一种低成本的溶菌酶分离纯化方法。
技术实现思路
本专利技术旨在解决现有技术的问题，提供一种孔性溶菌酶分离纯化介质，该介质可以较好地将其通过层析技术进行回收利用。为了实现上述专利技术目的，其具体的技术方案如下：一种孔性溶菌酶分离纯化介质，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素30-40份1NH2SO450-100份过氧化苯甲酰3-5份异辛醇10-15份正戊醇10-15份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯0.5-1份30号机油400-600份过氧化二碳酸二环己酯0.3-0.5份过硫酸钠0.3-0.5份去离子水30-50份。一种孔性溶菌酶分离纯化介质的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：A、称取甲壳素放于一容器内，于温水浴中加入1NH2SO4，充分搅拌直至甲壳素溶解完全，备用；B、在一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中，加入过氧化苯甲酰、异辛醇、正戊醇、甲基丙烯酸三羟甲基丙酯，将温度升至30-40℃，开动搅拌使反应体系充分混合均匀，备用；C、将步骤B得到的反应体系中加入步骤A配制的甲壳素溶液，充分混合均匀后加入由去离子水配制好的过氧化二碳酸二环己酯和过硫酸钠溶液，搅拌混合均匀，备用；D、在另一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中加入30号机油，升温至40-45℃；E、在搅拌条件下，加入步骤C制备好的预聚溶液，并将搅拌速度调至以50-60转/分钟，以使预聚溶液分散到分散介质30号机油中；待分散珠体基本上定型后，将反应温度升至55-60℃，保温2-3h；70-75℃保温2-3h；75-80℃保温2-3h；85-90℃，保温2-3个小时；90℃，保温2-3个小时；F、反应结束后将反应体系降温，滤出珠体；去除致孔剂、后处理，即得孔性溶菌酶分离纯化介质。本专利技术在步骤A中，所述搅拌的时间为2-5h。本专利技术在步骤F中，所述降温是指降温到30-50℃。本专利技术带来的有益技术效果：本专利技术以甲壳素作为基本原料，添加一定的物理交联剂和致孔剂，通过悬浮成型工艺制备出具有一定孔结构的孔性甲壳素分离纯化介质。采用本专利技术制备的该分离纯化介质可以较好地将其通过层析技术进行回收利用，变废为宝。具体实施方式实施例1一种孔性溶菌酶分离纯化介质，包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素30份1NH2SO450份过氧化苯甲酰3份异辛醇10份正戊醇10份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯0.5份30号机油400份过氧化二碳酸二环己酯0.3份过硫酸钠0.3份去离子水30份。实施例2一种孔性溶菌酶分离纯化介质，包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素40份1NH2SO4100份过氧化苯甲酰5份异辛醇15份正戊醇15份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯1份30号机油600份过氧化二碳酸二环己酯0.5份过硫酸钠0.5份去离子水50份。实施例3一种孔性溶菌酶分离纯化介质，包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素35份1NH2SO475份过氧化苯甲酰4份异辛醇12份正戊醇12份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯0.75份30号机油500份过氧化二碳酸二环己酯0.4份过硫酸钠0.4份去离子水40份。实施例4一种孔性溶菌酶分离纯化介质的制备方法，包括以下工艺步骤：A、称取甲壳素放于一容器内，于温水浴中加入1NH2SO4，充分搅拌直至甲壳素溶解完全，备用；B、在一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中，加入过氧化苯甲酰、异辛醇、正戊醇、甲基丙烯酸三羟甲基丙酯，将温度升至30℃，开动搅拌使反应体系充分混合均匀，备用；C、将步骤B得到的反应体系中加入步骤A配制的甲壳素溶液，充分混合均匀后加入由去离子水配制好的过氧化二碳酸二环己酯和过硫酸钠溶液，搅拌混合均匀，备用；D、在另一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中加入30号机油，升温至40℃；E、在搅拌条件下，加入步骤C制备好的预聚溶液，并将搅拌速度调至以50转/分钟，以使预聚溶液分散到分散介质30号机油中；待分散珠体基本上定型后，将反应温度升至55℃，保温2h；70℃保温2h；75℃保温2h；85℃，保温2个小时；90℃，保温2个小时；F、反应结束后将反应体系降温，滤出珠体；去除致孔剂、后处理，即得孔性溶菌酶分离纯化介质。优选的，在步骤A中，所述搅拌的时间为2h。优选的，在步骤F中，所述降温是指降温到30℃。实施例5一种孔性溶菌酶分离纯化介质的制备方法，包括以下工艺步骤：A、称取甲壳素放于一容器内，于温水浴中加入1NH2SO4，充分搅拌直至甲壳素溶解完全，备用；B、在一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中，加入过氧化苯甲酰、异辛醇、正戊醇、甲基丙烯酸三羟甲基丙酯，将温度升至40℃，开动搅拌使反应体系充分混合均匀，备用；C、将步骤B得到的反应体系中加入步骤A配制的甲壳素溶液，充分混合均匀后加入由去离子水配制好的过氧化二碳酸二环己酯和过硫酸钠溶液，搅拌混合均匀，备用；D、在另一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中加入30号机油，升温至45℃；E、在搅拌条件下，加入步骤C制备好的预聚溶液，并将搅拌速度调至以60转/分钟，以使预聚溶液分散到分散介质30号机油中；待分散珠体基本上定型后，将反应温度升至60℃，保温3h；75℃保温3h；80℃保温3h；90℃，保温3个小时；90℃，保温3个小时；F、反应结束后将反应体系降温，滤出珠体；去除致孔剂、后处理，即得孔性溶菌酶分离纯化介质。优选的，在步骤A中，所述搅拌的时间为5h。优选的，在步骤F中，所述降温是指降温到50℃。实施例6一种孔性溶菌酶分离纯化介质的制备方法，包括以下工艺步骤：A、称取甲壳素放于一容器内，于温水浴中加入1NH2SO4，充分搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种孔性溶菌酶分离纯化介质，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素                      30‑40份1NH2SO4                      50‑100份过氧化苯甲酰                3‑5份异辛醇                      10‑15份正戊醇                      10‑15份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯      0.5‑1份30号机油                    400‑600份过氧化二碳酸二环己酯        0.3‑0.5份过硫酸钠                    0.3‑0.5份去离子水                    30‑50份。

【技术特征摘要】
1.一种孔性溶菌酶分离纯化介质，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：甲壳素30-40份1NH2SO450-100份过氧化苯甲酰3-5份异辛醇10-15份正戊醇10-15份甲基丙烯酸三羟甲基丙酯0.5-1份30号机油400-600份过氧化二碳酸二环己酯0.3-0.5份过硫酸钠0.3-0.5份去离子水30-50份。2.根据权利要求1所述的一种孔性溶菌酶分离纯化介质的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：A、称取甲壳素放于一容器内，于温水浴中加入1NH2SO4，充分搅拌直至甲壳素溶解完全，备用；B、在一带有电动搅拌器、冷凝管、加料口和氮气通入管的500ml四口圆底烧瓶中，加入过氧化苯甲酰、异辛醇、正戊醇、甲基丙烯酸三羟甲基丙酯，将温度升至30-40℃，开动搅拌使反应体系充分混合均匀，备用；C、将步骤B得到的反应体系中加入步骤A配制的甲壳素溶液，充分混合均匀后加入由去离子水配制好...

【专利技术属性】
技术研发人员：张一帆，
申请(专利权)人：成都锦汇科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51